全 文 ：基金项目:浙江省中西医结合学会临床药学科研专项基金资助项目(编号:2012LY001)
通讯作者:邹盛勤 Tel:13507058127 E-mail:zsqycxy@ 163． com
HPLC法测定不同产地杏香兔耳风中绿原酸和木犀草素的含量
邬浩杰1 邹盛勤2 (1．奉化市中医院 浙江奉化 315500;2．宜春学院化学与生物工程学院)
摘 要 目的:建立高效液相色谱法同时测定不同产地杏香兔耳风中绿原酸和木犀草素的含量。方法:采用 Agilent ZOＲB-
AX C18 ( 250 mm ×4． 6 mm，5 μm ) 色谱柱;流动相 A 为甲醇，流动相 B 为水( 含0． 2%磷酸) ，梯度洗脱: 0 ～ 15 min，A 25% ～
B75%，16 ～ 40 min，A 55% ～ B45% ;流速: 1． 0 ml·min －1，柱温: 30℃，检测波长为 351 nm。结果:绿原酸和木犀草素保留时间
分别约为 10 和 28 min，与各自相邻峰的分离度均大于1． 7。以峰面积对进样量进行线性回归，绿原酸回归方程为 Y = 3． 16 ×
105X － 1． 07 × 103 ( r = 0． 999 7) ，线性范围0． 762 ～ 15． 240 μg，木犀草素回归方程为 Y = 1． 69 × 105X + 1． 35 × 103 ( r = 0． 999 6) ，
线性范围0． 242 ～ 4． 840 μg。绿原酸和木犀草素的平均回收率分别为98． 2%和100． 8%、ＲSD 分别为1． 92%和2． 16% ( n = 6) 。
结论:本方法操作简便，结果准确，可用于杏香兔耳风药材的质量控制。
关键词 高效液相色谱法;杏香兔耳风;绿原酸;木犀草素
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)06-0929-03
Determination of Chlorogenic Acid and Luteolin in Ainsliaea Fragrans from Different Habitats by HPLC
Wu Haojie1，Zou Shengqin2(1． Traditional Chinese Medicine Hospital of Fenghua City，Zhejiang Fenghua 315500，China;2． College
of Chemistry and Bioengineering，Yichun University)
ABSTＲACT Objective:To establish an HPLC method for the simultaneous determination of chlorogenic acid and luteolin in Ainsli-
aea fragrans from different habitats． Methods:The chromatographic conditions included Agilent ZOＲBAX C18(250 mm × 4． 6 mm，
5μm)column，methanol as the mobile phase A，and water (containing 0． 2% phosphoric acid)as the mobile phase B． The flow rate
was 1． 0 ml·min －1 with gradient elution (0-15 min:A 25% -B 75%，16-40 min:A 55% -B 45%)． The detection wavelength was set
at 351 nm and the column temperature was set at 30 ℃ ． Ｒesults:The retention time of chlorogenic acid and luteolin was about 10 min
and 28 min，respectively． The resolution was more than 1． 7． The regression equation for chlorogenic acid was Y = 3． 16 × 105X － 1． 07
× 103(r = 0． 999 7)，and the linear range was 0． 762-15． 240 μg． The regression equation for luteolin was Y = 1． 69 × 105X + 1． 35 ×
103(r = 0． 999 6)，and the linear range was 0． 242-4． 840 μg． The average recovery of chlorogenic acid and luteolin was 98． 2% and
100． 8% with ＲSD of 1． 92% and 2． 16%(n = 6) ，respectively． Conclusion:The method is simple and accurate，and can be used in
the quality control of Ainsliaea fragrans．
KEY WOＲDS HPLC;Ainsliaea fragrans;Chlorogenic acid;Luteolin
杏香兔耳风(Ainsliaea fragrans Champ．)别名
白走马胎，一枝香等，为我国传统中药，民间以全草
入药，具有清热补虚、凉血止血、利湿解毒、发表祛风
等作用，尤其对经行、产后恶露不尽、瘀血凝滞有独
特疗效，临床上治疗湿热下注之带下病、慢性宫颈
炎、痈疽肿痛等诸多病症［1，2］。杏香兔耳风收载于
《江西省中药材标准》和《卫生部药品标准》，主要含
黄酮类、酚酸类，倍半萜和三萜类等成分。近几年有
研究发现杏香兔耳风中含有绿原酸和异绿原酸类成
分，药理实验已证明，这类化合物为杏香兔耳风中主
要的抗炎活性成分［3，4］。刘戈［5］等从杏香兔耳风的
全草中分离并鉴定了木犀草素、芹菜素、小麦黄素、
木犀草素 7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-5-O-β-D-葡
萄糖苷等黄酮类化合物。张锐［6］等从杏香兔耳风
中首次分离并鉴定了绿原酸。采用反相高效液相色
谱同时测定杏香兔耳中绿原酸和木犀草素含量的方
法鲜见文献报道，本试验建立高效液相色谱法同时
测定了不同产地杏香兔耳风中绿原酸和木犀草素的
含量，旨在为药材的质量控制提供试验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
2996 高效液相色谱仪，515 双泵，Empower 中文
色谱数据工作站(美国 Waters 公司);ＲO-MB-10D
高纯水机(杭州永洁达膜分离设备厂);FY177 型高
速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司);
CP225D 电子分析天平(德国 Sartourius 公司);
SK2510HP超声波清洗器(上海科导超声仪器有限
公司，250 W，59 kHz)。
1． 2 试药
绿原酸和木犀草素对照品(中国食品药品
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中国药师 2014 年第 17 卷第 6 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 6
检定研究院，批号分别为 110753-200212、111520 -
200506);甲 醇 (色 谱 纯，DIMA TECHNOLOGY
INC)，水为高纯水，其余试剂均为分析纯。杏香兔
耳风样品采自江西、浙江等 6 省，经鉴定为杏香兔耳
风(Ainsliaea fragrans Champ．)的全草。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备
2． 1． 1 对照品溶液 精密称取绿原酸对照品
7． 62 mg和木犀草素对照品2． 42 mg，置于 10 ml 棕
色量瓶中，加少量流动相超声溶解后定容，摇匀后即
得含绿原酸0． 762 mg·ml －1和木犀草素0． 242 mg·
ml －1的对照品混合溶液。
2． 1． 2 供试品溶液 将杏香兔耳风样品于 70℃干
燥 4 h后分别粉碎，过 40 目筛。精密称取样品粉末
约 2 g，置具塞三角烧瓶中，用移液管精密加入 70%
乙醇 50 ml，称量后放置 30 min，超声提取 60 min，放
冷后称重，用乙醇补足损失质量，摇匀，0． 45 μm滤
膜过滤后即得样品溶液。
2． 2 测定波长的选择
进样时，设定 PAD检测器波长范围为 190 ～ 400
nm，提取绿原酸和木犀草素对照品在流动相中的紫
外光谱图，绿原酸最大吸收波长分别为218． 6 nm和
328． 7 nm，木 犀 草 素 最 大 吸 收 波 长 分 别 为
206． 9 nm、254． 0 nm和351． 4 nm。提取各波长下色
谱进行比较，选择 351 nm 作为检测波长，2 组分均
有较高的信噪比，且峰形对称。
2． 3 色谱条件
色谱 柱 Agilent ZOＲBAX C18 (250 mm ×
4． 6 mm，5 μm )流动相 A 为甲醇，流动相 B 为水
(含0． 2%磷酸)，梯度洗脱程序:0 ～ 15 min:A 25% -
B75%，16 ～ 40 min:A 55% -B45%;流速:1． 0 ml·
min －1;检测波长:351 nm;柱温:30℃;光电二极管阵
列检测器(PAD)。在此色谱条件下，绿原酸和木犀
草素对称因子分别为1． 02和1． 03，分离度均大于
1． 7，以绿原酸和木犀草素计理论塔板数分别为 5
920 和 13 532。混合对照品及杏香兔耳风样品的色
谱见图 1。
2． 4 精密度试验
取绿原酸和木犀草素混合照品对混合溶液连续
进样 5 次，进样量 10 μl，积分得绿原酸峰面积 ＲSD
为0． 26%，木犀草素峰面积 ＲSD为0． 35%(n = 5)。
2． 5 重复性试验
取同一批杏香兔耳风(江西)样品，精密称取 5
份，每份约 2 g，按“2． 1． 2”项下步骤制备样品溶液，
在选定的色谱条件下进样分析，外标法计算绿原酸
A．混合对照品 B．杏香兔耳风供试品
1．绿原酸 2．木犀草素
图 1 HPLC色谱图
和木犀草素含量。结果绿原酸和木犀草素的平均含
量分别为0． 382%和0． 092%，ＲSD 分别为0． 72%和
1． 03%(n = 5)。
2． 6 稳定性试验
精密吸取同一样品溶液 20 μl，分别在 0，2，8，
12，24 h 进样，积分得绿原酸和木犀草素峰面积积
分值的 ＲSD 分别为1． 21%和0． 89%(n = 5)。表明
混合对照品溶液至少在 24 h内稳定。
2． 7 线性关系考察
分别精密吸取对照品混合溶液 1 ，5 ，10 ，15 ，
20 μl进样，按选定的色谱条件测定峰面积，以对照
品的进样量(X，μg)为横坐标，以峰面积(Y)为纵坐
标，进行线性拟合，绿原酸的回归方程为 Y = 3． 16 ×
105X － 1． 07 × 103(r = 0． 999 7)，木犀草素的回归方
程为 Y = 1． 69 × 105X + 1． 35 × 103(r = 0． 999 6)。表
明当绿原酸和木犀草素进样量分别在 0． 762 ～
15． 240 μg、0． 242 ～ 4． 840 μg时线性关系良好。
2． 8 加样回收率试验
精密称定已知绿原酸和木犀草素含量的同一批
杏香兔耳风样品(广西)6 份，每份约 1 g，加入与样
品中含量相当的适量对照品，按“2． 1． 2”项下步骤
制备样品溶液，测定样品中绿原酸和木犀草素的含
量，计算加样回收率。绿原酸和木犀草素的平均回
收率分别为98． 2%和100． 8%，ＲSD分别为1． 92%和
2． 16%(n = 6)。
2． 9 样品测定
不同产地的杏香兔耳风样品溶液按“2． 1． 2”项
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www． zgys． org 研究论文
下步骤制备，精密吸取 20 μl注入高效液相色谱仪，
重复进样 3 次，测定样品溶液中绿原酸和木犀草素
的峰面积，按外标法计算组分含量。杏香兔耳风样
品测定结果见表 1。
表 1 杏香兔耳风样品中绿原酸和木犀草素
测定结果(%，n =3)
编号 产地 绿原酸 木犀草素
1 江西 0． 382 0． 092
2 安徽 0． 490 0． 105
3 浙江 0． 422 0． 087
4 广西 0． 482 0． 114
5 福建 0． 285 0． 054
6 广东 0． 395 0． 068
3 讨论
3． 1 HPLC法测定结果显示，杏香兔耳风中绿原酸、
木犀草素的含量分别在0． 285% ～ 0． 490%和0． 054%
～0． 105%之间，不同产地的杏香兔耳风中绿原酸和
木犀草素的含量均差异较大。在临床或生产应用时，
应考虑对不同产地杏香兔耳风中主要活性成分的差
异性进行适当调整，从而保证药效的一致。
3． 2 测定时考察了提取方式(超声、索氏和回流提
取)、提取时间、提取溶剂对测定结果的影响，优化了
杏香兔耳风中酚酸类和黄酮类成分的提取方法，最终
确定用 70% 乙醇超声提取 60 min 提取率最高。建
立的方法操作简便，结果准确，重复性好，可用于同时
测定杏香兔耳风中绿原酸和木犀草素的含量。
参 考 文 献
1 《中华本草》编委会． 中华本草［M］． 上海:科学技术出版社，
1999． 6682
2 毛晓敏，沈静琳，陈玲，等．杏香兔耳风质量标准研究［J］．江西中
医药，2007，38(7):74-75
3 陈云．杏香兔耳风总酚酸分散片的药学研究［D］．承德:承德医学
院硕士学位论文，2007
4 刘波．杏香兔耳风活性成分研究［D］．北京:首都师范大学硕士学
位论文，2005
5 刘戈，汪豪，吴婷，等．菊科植物杏香兔耳风的化学成分［J］．中国
天然药物，2007，5(4):266-268
6 张锐，曾宪仪，张正行．杏香兔耳风的化学成分研究［J］．中草药，
2006，37(3):347-348
(2014-01-01 收稿 2014-02-20 修回)
基金项目:军队医疗机构制剂标准提高科研专项重点课题(编号:13ZJZ02)
通讯作者:史国兵 Tel:(024)28856262 E-mail:sysgb@ 126． com
乌参八味胶囊质量标准研究
顾明业 吴琼 徐彬 胡北 安晔 史国兵 (沈阳军区总医院药剂科 沈阳 110016)
摘 要 目的:建立乌参八味胶囊的质量标准。方法:采用薄层色谱法，对该品种中的何首乌、川芎、赤芍进行专属性鉴别;
采用高效液相色谱法对处方中君药何首乌中有效成分大黄素进行含量测定。色谱柱为 Thermo Hypersil GOLD 柱( 250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-水( 75∶ 25) ，流速为1． 0 ml·min －1，检测波长为 290 nm，柱温为室温，进样量为 20 μl。结果:3
味药材的 TLC特征斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰。大黄素在 10 ～ 1 280 μg·ml －1的浓度范围内呈良好线性关系，r =
0． 999 6。平均加样回收率为99． 71%，ＲSD = 2． 16% ( n = 6) 。结论:所建立的质量标准准确可靠、重复性良好，可用于乌参八
味胶囊的质量控制。
关键词 乌参八味胶囊;大黄素;高效液相色谱法;薄层色谱法;质量控制
中图分类号:TQ460． 7 + 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)06-0931-04
Study on Quality Standard for Wushen Bawei Capsules
Gu Mingye，Wu Qiong，Xu Bin，Hu Bei，An Ye，Shi Guobing (Department of Pharmacy，General Hospital of Shenyang Military Area
Command，Shenyang 110016，China)
ABSTＲACT Objective:To establish the quality standard for Wushen Bawei capsules． Methods:Ｒadix pplygoni multflori，Ｒhizoma
Chizoma Chuanxiong and Ｒadix Paeoniae Ｒubra were identified by TLC． The content of emodin was determined by HPLC． The deter-
mination was performed on a Thermo Hypersil GOLD (250 mm ×4． 6 mm，5 μm)column with methanol-water (75∶ 25)as the mobile
phase，the flow rate was 1． 0 ml·min －1，the detection wavelength was 290 nm，the column temperature was room temperature and the
injection volume was 20 μl． Ｒesults:The TLC spots were clear with good resolution and without interference from the negative sam-
ples． There was a good linearity within the range of 10 ～ 1 280 μg·ml －1(r = 0． 999 6)for emodin． The average recovery of emodin
was 99． 71%(ＲSD = 2． 16%，n = 6)． Conclusion:The method is reliable，accurate and reproducible． It can be used as the quality
control method for Wushen Bawei capsules．
KEY WOＲDS Wushen Bawei capsules;Emodin;HPLC;TLC;Quality standard
乌参八味胶囊是由何首乌、蒲黄、丹参、川芎、赤 芍、山楂、泽泻、党参八味药材制成的中药复方制剂
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中国药师 2014 年第 17 卷第 6 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 6