全 文 ：收稿日期:2007-03-15;　修订日期:2007-05-10
基金项目:广西区科技厅攻关资助项目(No.0322024-5B)
作者简介:杨　柯(1975-),男(侗族),广西三江人 , 现任广西中医学院药
学院讲师 ,硕士研究生 ,主要从事中草药抗乙型肝炎病毒及抗肿瘤的药理
学研究工作.
广西藤茶提取物 TTF
抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究
杨　柯 , 郑作文
(广西中医学院药学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 观察从广西藤茶中提取出的一有效部位 TTF抗鸭乙型肝炎病毒的作用。方法 选 1日龄北京雏鸭 , 人工感
染鸭乙型肝炎病毒(DHBV)动物模型 ,应用斑点杂交法观察 TTF对鸭血清鸭乙型肝炎病毒 DNA(DHBV-DNA)的影响。
结果 DHBV感染鸭在感染后第 7天口服 TTF药物治疗 , 75 ～ 150mg/kg组 2次 /d, 10 d对鸭血清 DHBV-DNA水平有一
定的抑制效果;300 mg/kg组 ,对感染鸭血清 DHBV-DNA水平的抑制作用显著 , 停药 3 d未见明显的反跳现象。结论
TTF可明显抑制 DHBV-DNA复制 , 提示 TTF有抗 HBV的作用。
关键词:藤茶;　鸭乙型肝炎病毒(DHBV);　鸭乙肝动物模型
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)11-2634-02
TheAnti-HBVEffectsofTTFfromTengCha
YANGKe, ZHENGZuo-wen
(GuangxiUniversityofTCM, Nanning, Guangxi530001, China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-HBVeffectofTTF.Methods 1-dayoldBeijingducklingswereusedasthehep-
atitisBanimalmodel.DHBVDNAwasdetectedbydot-blothybridizationtest.ResultsAftermedicatedwithTTFfor5daysand
10 days, opticaldensityvalue(ODvalue)ofDHBV-DNAinducklingsserawasobviouslylowerthanthatbeforetreatment, there
weredifferentinfluencesindifferentgroupsandreboundphenomenondidn tappearinbothTTF-groups3 daysafterstopping
medication.ConclusionTTFiseficientintreatingDHBV, whichindicatesthatTTFhasananti-HBVefect.
Keywords:Tengcha;　DuckhepatitisBvirus;　DuckhepatitisModel
　　藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄 Ampelopsisgrossed-
entata(Hand-Mazz)W.T.Wang的嫩茎叶 , 在广西 、广东 、云南 、
贵州 、福建等均有分布 , 亦称甜藤茶 、田婆茶 、乌蔹 、红五爪金龙 、
大齿蛇葡萄。其味甘 、淡 , 性凉 , 具有清热解毒 、祛风湿 、强筋骨 、
消肿止痛之功效。藤茶在民间流传应用已有数百年历史 ,是瑶族
群众的家常备用药。民间用于治疗黄疸型肝炎 , 感冒发热 ,咽喉
肿痛 ,急性结膜炎或水煎外洗治疗痈疮湿毒等 [ 1～ 3] 。藤茶主要成
分是黄酮类化合物 ,含量约为 45.52% [ 4] 。郑氏 [ 5]研究结果表明
藤茶总黄酮对 2215细胞分泌的 HBsAg抑制率为 43.14%, 半数
有效剂量(IC50)为 40.21 μg/ml, 治疗指数(SI)为 3.11;对 2215
细胞分泌的 HBeAg抑制率为 33.76%;对 HBV-DNA有一定抑
制作用。为此 ,笔者对 TTF进行体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验
研究 。现报道如下。
1　材料
1.1　受试药物 TTF为浅黄色粉末结晶 , 由本校中药化学教研室
提供 ,含量 90%以上。
1.2　病毒 鸭乙型肝炎病毒 DNA(DHBV-DNA)强阳性血清 ,
采自上海麻鸭 , -70℃保存。
1.3　试剂 DMSO(AR, 广州市新港化工有限公司);α-32P-
Dctp(北京福瑞生物技术工程公司);缺口翻译药盒(普洛麦格公
司(PromegaCo.);SephadexG-50(Ficol);PVP(瑞典 Pharmacia
公司);SDS(西德 Merck公司);鱼精 DNA, 牛血清白蛋白均购自
中国科学院生物物理所;硝酸纤维素膜 0.45 μm(Amersham公
司)。
1.4　仪器 BP211D万分之一克电子天平(德国赛多利斯);酶标
仪(奥地利 SUNRISE);微量加样器(法国 Gilson);BiofugeStratos
高速低温离心机(德国 Heraeus);座式自动电热压力蒸汽灭菌器
(上海申安医疗器械厂)。
1.5　阳性对照药 拉米夫定 (3TC), 葛兰素威康制药公
司 , B008923。
1.6　动物 1日龄北京鸭 , 购自北京前进种鸭动物饲养场。
2　方法及结果
2.1　TTF抗鸭乙肝病毒实验
2.1.1　鸭乙型肝炎病毒感染 1日龄北京鸭 , 经腿胫静脉注射上
海麻鸭 DHBV-DNA阳性鸭血清 , 0.2 ml/只 , 在感染后 7 d取
血 , 分离血清 , -70℃保存待检。
2.1.2　药物治疗实验 DHBV感染雏鸭 7d后随机分组进行药物
治疗试验 , 每组 6只 , 给药组分 3个剂量组 , 分别为 75, 150,
300mg/kg组 , 口服 , 2次 /d, 连续给药 10 d。设病毒对照组(DH-
BV), 以生理盐水代替药物。阳性药用 3TC, 口服给药 50 mg/kg,
2次 /d, 连续给药 10d。在感染后第 7天即用药前(T0), 用药第 5
天(T5),用药第 10天(T10)和停药后第 3天(P3), 自鸭腿胫静脉
取血 ,分离血清 , -70℃保存待检。
2.1.3　检测方法 取上述待检鸭血清 , 每批同时点膜 , 测定鸭血
清中 DHBV-DNA水平的动态。按缺口翻译试剂盒说明书方法 ,
用 32P标记 DHBV-DNA探针 ,并作鸭血清斑点杂交 , 放射自显影
膜片斑点 ,在酶标检测仪测定 OD值(滤光片为 490 nm), 计算血
清 DHBV-DNA密度 , 以杂交斑点 OD值作为标本 DHBV-DNA
水平值。将每组鸭用药后不同时间(T5、T10)和停药后第 3天
(P3)血清DHBV-DNA水平与同组给药前(T0)OD值比较 , 采用
配对 t检验 ,分析差异的显著性 , 判断药物对病毒感染的抑制效
果。按公式计算每组鸭用药后不同时间(T5, T10)和停药第 3天
(P3)血清 DHBV-DNA的抑制率%, 并作图 , 比较各组鸭血清
DHBV-DNA抑制率的动态。
DNA抑制率 (%)=给药前(T0)OD值 -给药后(T5, T10, P3)OD值给药前(T0)OD值
×100%
将给药治疗组不同时间 DHBV-DNA抑制率分别与病毒对
照组相同时间 DHBV-DNA抑制率比较 , 采用成组 t检验 , 作统
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.11　
计学处理 ,计算 t、P值 , 分析差异的显著性 ,判断药效。
2.2　结果
2.2.1　1日龄北京鸭感染 DHBV后 , 血清 DHBV-DNA动态
DHBV-DNA感染鸭口服生理盐水后 DHBV-DNA斑点杂交结
果见图 1。实验感染鸭 30只血清 DHBV-DNA全部阳性。病毒
对照组 6只雏鸭感染后第 7天血清 DHBV-DNA全部阳性 , 实验
全程 21d内血清 DHBV-DNA水平感染后基本平稳。全程不同
时间血清 DHBV-DNA有所波动 , 感染后和给予生理盐水治疗
10 d血清 DHBA-DNA水平无显著差别。
图 1　DHBV-DNA斑点杀交结果
2.2.2　对 DHBV感染鸭血清 DHBV-DNA的影响 结果表明 ,
TTF低剂量组在给药第 10天和停药后 3 d与给药前(T0)比较计
算抑制率 , 配对分析比较 , 有显著性和非常显著性意义(P<0.05
～ 0.01)。成组对比 , 无统计学意义;中剂量组在给药后第 5, 10
天及停药后 3 d(P3),配对分析 , 都有显著性意义(P<0.05)。成
组分析 ,无统计学意义;高剂量组在给药后第 10天(T10)与给药
前(T0)比较计算抑制率 , 配对分析 , 有非常显著性意义(P<
0.01)。鸭血清 DHBV-DNA水平与病毒对照组比较 , 在给药第
10天(T10),成组分析 , 有显著性意义(P<0.05);3组均未见反
跳现象。口服阳性药 3TC50 mg/kg, 结果表明给药第 5, 10天
(T5, T10)鸭血清 DHBV-DNA水平 OD值与给药前(T0)作配对
分析比较 ,及给药后血清 DHBV-DNA抑制率与病毒对照组作成
组分析 , 均有非常显著性差异(P<0.01)。但停药后 3 d(P3)给
药组鸭血清DHBV-DNA水平 OD值与给药前(T0)比较 , 有反跳
现象 。结果见表 1 ～ 2和图 2。
表 1　TTF对鸭血清 DHBV-DNA水平的影响( x±s)
组
别
剂量
C/mg· kg-1
OD490
T0 T5 T10 P3
NS - 1.25±0.18 1.23±0.31 1.13±0.28 1.08±0.18
TF 75 0.81±0.11 0.64±0.11 0.64±0.08① 0.57±0.08②
150 0.80±0.08 0.67±0.07① 0.61±0.06① 0.67±0.08①
300 0.55±0.06 0.52±0.04 0.37±0.05② 0.47±0.06
3TC 50 1.30±0.05 0.59±0.02② 0.52±0.02② 1.02±0.20②
　　各组自身与 T0比较 , ①P<0.05, ②P<0.01;n=6
表 2　TTF鸭血清 DHBV-DN水平抑制率的影响( x±s)
组
别
剂量
C/mg· kg-1
水平抑制率(%)
T5 T10 P3
DHBV - 2.68±13.93 10.05±14.22 12.84±11.30
TF 75 18.88±17.83 19.66±16.44 28.85±10.82
150 16.18±10.79 22.68±12.05 15.53±13.46
300 4.68±6.04 31.24±9.19① 11.71±17.25
3TC 50 54.53±2.87② 60.36±0.74② 22.32±13.40
　　与 DHBV组比较 , ①P<0.05, ②P<0.01;n=6
图 2　TTF鸭血清 DHBV-DNA水平抑制率的影响
3　讨论
国内外学者目前普遍采用 DHBV感染 1 ～ 3日龄雏鸭建立
乙型肝炎动物模型 , 其病毒血症持续时间较长且较稳定 , 无明
显的自然转阴现象 , 是研究人类乙型肝炎发病机制 , 病毒复制
过程及筛选有效治疗药物的理想动物模型。
郑氏 [ 5]研究了藤茶总黄酮体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作
用 ,结果表明体外对 HBsAg、HBeAg和 HBV-DNA有明显的抑制
效果。笔者应用 1日龄北京雏鸭经腿胫静脉注射 DHBV-DNA
阳性血清的方法来建立乙型肝炎动物模型 , 观察从藤茶中提取
出 TTF的抗病毒作用 ,结果显示 TTF低 、中 、高剂量组给药后均
有一定的抑制鸭血清 DHBV-DNA水平的作用 (P<0.05 ～
0.01),且停药后 3 d检测结果表明 TTF没有反跳现象。为开发
TTF为治疗乙型肝炎的新药提供实验依据。
致谢:本实验承蒙中国医学科学院生物技术研究所李壮老师
指导 ,谨致谢意!
参考文献:
[ 1 ] 　中国科学院植物研究所.中国高等植物图谱补编 ,第 2册 [ M] .北
京:科学出版社 , 1983:342.
[ 2 ] 　广西壮族自治区中医药研究所.广西药用植物名录 [ M] .南宁:广
西人民出版社 , 1986:300.
[ 3 ] 　全国中草药汇编编写班.全国中草药汇编 ,下册 [ M] .北京:人民卫
生出版社 , 1978:789.
[ 4 ] 　周桂霞 ,何　群 ,等.瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量测定 [ J] .湖
南中医药学报 , 1999, 5(12):30.
[ 5 ] 　郑作文.藤茶总黄酮在 2215细胞培养中对乙型肝炎病毒 HBsAg、
HBeAg和 HBV-DNA的抑制作用 [ J] .山东中医杂志 , 2003, 22
(9):561.
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.11 时珍国医国药 2007年第 18卷第 11期