全 文 ：收稿日期:2003-08-14;修回日期:2003-11-09
作者简介:李五洲 (1971-), 男 (汉), 广西人 , 工程师。
通讯联系人:蒋永红 , 电话:(0516) 3453960。
高效液相色谱法测定卷柏中的穗花杉双黄酮
李五洲1 , 王　建1 , 蒋永红1 , 芦玉亭2 , 栾兴华1
(1.管道储运公司 徐州利富康公司 , 江苏　徐州　221008;2.徐州技术监督局 质检所 , 江苏　徐州　221000)
摘要:用反相高效液相色谱法测定卷柏提取物中的穗花杉双黄酮。结果表明:穗花杉双黄酮在质量浓度为
41.2 mg/ L～ 206 mg/L时 , 峰面积 Y 与其质量浓度X 的线性关系良好 , 回归方程为 Y =547.028X +15.489 5
(r=0.999 9), 最低检测限为 2.0μg/L;穗花杉双黄酮的平均回收率为 99.42 % (n=3), 相对标准偏差 RSD
为0.79 %;连续进样 、 日内进样和日间进样所得检测结果的 RSD分别为 0.12 %、 0.11 %和 0.11 %。
关键词:化妆品添加剂;高效液相色谱法;穗花杉双黄酮
中图分类号:TQ 658　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-1803(2004)02-0121-02
　　卷柏为卷柏科植物卷柏的全草[ 1] , 卷柏中含有多
种黄酮类化合物 , 包括芹菜素 、穗花杉双黄酮 、 扁柏
双黄酮和异柳杉素。在很多种中草药如银杏叶 、 贯叶
连翘中均存在[ 2] , 而卷柏中穗花杉双黄酮的量远远高
于其他中草药 , 如贯叶连翘中穗花杉双黄酮的质量分
数在 0.01 %～ 0.05 %[ 3] , 而卷柏中穗花杉双黄酮的
质量分数却高达 0.8 %。双黄酮类化合物具有抗菌
性 , 能增进血液循环 、控制皮炎 , 在发蜡或发乳中加
入双黄酮类化合物 , 能刺激毛发的生长 , 在肤用品中
加入双黄酮具有活血调理功能[ 4] 。
高效液相色谱 (HPLC)法广泛应用于天然活性
物的分离和分析 , 具有分离效率高 、操作简便 、 分析
速度快和结果准确等特点 , 而高效液相色谱法应用于
卷柏提取物中穗花杉双黄酮的含量测定在国内尚未见
报道 。
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
仪器:Agilent 1100高效液相色谱仪 , 安捷伦公
司;Aglent 1100色谱工作站 , 安捷伦公司;AE240型
电子天平 , 梅特勒-托利多仪器 (上海)有限公司;
JL-120型超声波 , 上海杰理科技有限公司 。
试剂:无水甲醇和无水乙醇 , 均为色谱纯 , 北京
昌化精细化工厂;磷酸为分析纯 , 徐州试剂总厂;水
为由美国 Labconco公司的超纯水仪 (型号 960002)制
备的超纯水;穗花杉双黄酮标准品由美国技源公司提
供 , 质量分数为 95 %以上。
1.2　标准溶液配置
穗花杉双黄酮标准品储备液的制备:准确称取穗
花杉双黄酮标准品 10.3 mg 于 50 mL 容量瓶中 , 加入
体积分数为 80 %乙醇水溶解 , 超声溶解 15 min , 再
用体积分数为 80 %的乙醇定容至刻度 , 配成质量浓
度为 0.206 g/L的储备液 , 摇匀备用。
1.3　样品预处理
准确称取卷柏提取物样品 25 mg 左右 , 置于
50 mL容量瓶中 , 加入体积分数为80 %的乙醇水溶液
超声溶解 15 min , 再用体积分数为 80 %乙醇定容至
刻度 , 摇匀 , 0.45μm 滤膜过滤 , 待用 。
2　结果与讨论
2.1　最佳色谱条件的确定
色谱柱:Kromasil C18柱 , 4.6 mm i.d.×150 mm ,
5 um , 大连依利特公司;流动相:V (无水甲醇)∶
V (0.1 %磷酸水溶液)为 65∶35;流速 0.8 mL/min;
检测波长 337 nm;柱温为 30 ℃;进样量 5μm 。
穗花杉双黄酮的色谱图见图 1。
图 1　穗花杉双黄酮的 HPLC色谱图
　Fig.1　Chromatogram of amentoflavone
·121·
第 34卷第 2 期
2004年 4 月 　　　　　　　　　　　　　　 日 用化 学 工业China Surfactant Detergent &Cosmetics　　　　　　　　　　　　Vo1.34 No.2April 2004
DOI :10.13218/j.cnki.csdc.2004.02.016
2.2　标准工作曲线的制作
准确量取穗花杉双黄酮标准品储备液 2.00 mL、
4.00 mL 、 6.00 mL 、 8.00 mL 和 10.00 mL , 分别置于
10 mL容量瓶中 , 用体积分数为 80 %乙醇稀释至刻
度 , 摇匀 , 配成 5种不同浓度的穗花杉双黄酮标准系
列溶液 , 备用。
在选定的色谱条件下进行分析 , 每种浓度的样品
重复进样 3 次 , 取峰面积的平均值 。进样量为5 μL
时 , 在 41.2 mg/L ～ 206 mg/L内峰面积 Y 与质量浓度
X(mg/L)呈良好的线性关系 ,其线性回归方程为 Y =
547.028X +15.489 5 (r=0.999 9)。
2.3　回收率试验
精密称取卷柏提取物样品 25 mg 左右 , 分别置于
50 mL容量瓶中 , 加入体积分数为 80 %乙醇超声溶
解15 min , 并向每个容量瓶中分别加入不同量的穗花
杉双黄酮标准品储备液 , 再用体积分数为 80 %乙醇
定容至刻度 , 摇匀备用。
按照 2.1项所述色谱条件进行分析 , 每个样品测
3次取其面积平均值 , 按 2.3项下所得标准曲线计算
每个样品的质量浓度并计算回收率 , 结果见表 1。
表 1　回收率试验结果 (n=3)
Tab.1　Analytical results of recovey test (n =3)
编号 　　本底值　　/mg·L
添加量
/ mg·L
测定值
/mg·L
　回收率
　　/%
1 　　122.05 　31.16 　31.19 　100.1
2 114.13 45.72 45.12 98.7
3 138.45 62.39 61.45 98.5
4 97.87 76.48 76.63 100.2
5 106.71 87.93 87.58 99.6
平均值 99.42
RSD/ % 0.79
2.4　精密度与稳定性试验
取质量浓度为123.6mg/L 的标准溶液 , 在 2.1项
所述色谱条件下连续进样 6 次 , 并避光放置 2 h 、
4 h 、 6 h 、 8 h 、 10 h及1 d 、 2 d 、 3 d后 , 分别测定峰
面积 Y , 计算峰面积 Y 的偏差 (SD)及相对标准偏
差 (RSD), 结果见表 2 (排于右栏)。
2.5　最低检出限的测定
穗花杉双黄酮在 2.1中所述色谱条件下的最低检
测限为0.5 ng (由 100μg/L的穗花杉双黄酮进样5 μL
时测得 , 信噪比为 3)。结果表明 , 该方法对于穗花
杉双黄酮的检测具有很高的灵敏度 。
表 2　精密度和稳定性试验结果 (n=6)
Tab.2　Analytical results of precision and stability test(n=6)
连续检测
Y/mV·min
日内
t/ h　Y/mV·min
日间
t/ d　Y/mV·min
　1 　2 457.9 　　2 2 460.2 　　1 2 461.1
　2 2 453.4 4 2 461.7 2 2 455.7
　3 2 461.3 6 2 454.8 3 2 459.8
　4 2 458.7 8 2 457.1
　5 2 456.4 10 2 458.2
　6 2 460.7
平均值 2 458.1 2 458.4 2 458.9
SD 2.91 2.68 2.82
RSD/ % 0.12 0.11 0.11
2.6　样品测定
取徐州利富康公司中试车间生产的不同批次不同
规格的卷柏提取物产品 , 按 1.3样品预处理方法处
理 , 按2.1色谱条件进行测定 , 结果见表3 。
表 3　卷柏提取物中穗花杉双黄酮含量测定结果 (n=5)
Tab.3　Analytical results of amentoflavones in experimental
　 　　　　　samples (n=5)
批号 产品规格 w(穗花杉双黄酮)/% RSD/ %
AMF20020701 A13 15.7 0.10
AMF20020903 A20 21.3 0.09
AMF20030601 A20 25.5 1.21
AMF20030701 A30 34.6 0.08
3　结论
(1)在选择色谱条件时针对检测波长的确定采用
紫外扫描 , 发现穗花杉双黄酮的最大吸收波长为
211 nm 、 270 nm 和337 nm , 其中337 nm 处在HPLC图
上受杂峰最少 , 为此选用 337 nm作为检测波长。
(2)采用HPLC法直接测定卷柏提取物中穗花杉
双黄酮质量分数 , 有较高的灵敏度和精密度 , 准确性
和稳定性均良好 , 为卷柏提取物的生产控制和相关的
其他研究工作提供了一个较好的定性和定量的分析手
段。
参考文献:
[ 1 ] 江苏新医学院.中药大词黄[ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
2000.1 472-1 473.
[ 2 ] JANE R HANRAHAN , MARY CHEBIB, NEIL M DAVLUCHERON , et
al.Semisynthetic preparation of amentoflavone:a negative modulator at
GABAA receptors [ J] .Bioorganic&medicinal chemistry letters , 2003, 13:
2 281-2 284.
[ 3] JIRI PATOCKA.The chemistry , pharmacology , and toxicology of the bio-
logically active constituents of the herb hypericum perforatum L.[ J] .Jour-
nal of applied biomedicine , 2003, 1:61-70.
[ 4 ] 王建新.天然活性化妆品 [M] .北京:中国轻工业出版社 ,
1997.227-229.
　　(下转第 135页)
·122·
分析与检测 　　　　　　　　　　　　日　用　化　学　工　业　　　　　　　　　　　　　　　　第 34 卷　
规的分离手段很难把二者分开 。
3　结论
通过实验得到合成叶青素较优的条件为:以对甲
苯磺酸做催化剂 、乙缩醛和苯甲醇为原料 , 且二者的
摩尔比为 7∶1 , 采用分水器内装无水氯化钙回流的方
式反应 4 h , 制得叶青素 , 产率为 66.6 %。该方法反
应条件温和 , 原料易得 , 操作简单 , 易于工业化 。
参考文献:
[ 1] R TER HEIDE, H SCHAAP , H J WOBBEN.The Quality of foods and
beverages-flavor constituents in rum [ M] .New York:Academic Press ,
Inc , 1981.183-200.
[ 2] JAVED IQBAL , RAJEEV RANJAN SRIVASTAVA , KIRAN BALA CUP-
TA.Cobalt (Ⅱ) chloride catalysed addition of alcohols on vinyl:a con-
venient synthesis of mixed acetals [ J] .Synthetic Communication , 1989, 19
(5～ 6):901-906.
[ 3] KADELKA JUERGEN , SCHWARZ HANS HELMUT.Procedure for
preparing1, 1-dioxy , 1-oxy-1-thioxy , and 1-amino-1-(thi)
oxy compounds [ J] .DE:3426730 , 1984-07-20.
[ 4] YUNG-SON HON , CHIA-FU LEE.An extremely efficient catalyst for
the protection and deprotection of alcohols as alkyl vinyl ethers [ J] .Tetrahe-
dron Letters , 1999, 40 (12):2 389-2 392.
[ 5] YUNG - SON HON , CHIA - FU LEE , RONG - JIUNN CHEN.
Acetonyltriphylphosphonium bromide and its polymer-supported analogues
as catalyst in protection and deprotection of alcohols as alkyl vinyl ethers
[ J] .Tetrahedron, 2001 , 57 (28):5 991-6 001.
[ 6] STEPHEN A GLOVER , ANDRE GOSSEN , STEPHEN L GOLDING.
Decarboxylations of 2-alkoxy-and a-aryloxyalkanoic acida:mixed ac-
etal synthesis [ J] .South African Journal of Chemistry , 1984, 37 (2):
35-40.
[ 7] 张典宁 , 俞华扬.乙醛混合缩醛的合成[ J] .江苏日化 , 1988 (3):
21-23.
[ 8] 丁德生 , 龚隽芳.实用合成香料[ M] .上海:上海科学技术出版
社 , 1991.254-255.
Preparation of cyanophyll
LIU Yu-ping , SUN Bao-guo , LIANG Meng-lan , ZHAO Jin , DONG Yu
(School of Chemical and Environmental Engineering , Beijing Technology and Business University , Beijing　100037 , China)
Abstract:Cyanophyll was prepared by the reaction of acetal and benzyl alcohol in the presence of toluene-p-sulfonic acid
as calalyst.Base upon orthogonal experimetal design , the effects on the yield against mole ratio of reactants and reaction time
was investigated and the optimized reaction condition were found as:mole ratio of acetal and benzyl alcohol is 7 to 1;
reactants for about 4 h with the removal of ethyl alcohol formed by anhydrous calcium chloride.The yield of cyanophyll is
66.6 %.The finished product was analyzed and confirmed by GC , IR and GC-MS.
Key words:essence;cyanophyll;acetaldehyde ethyl benzyl acetal;acetal;benzyl alcohol;preparation
　　(上接第 122页)
Determination of amentoflavone by high performance liquid chromatography
LI Wu-zhou1 , WANG Jian1 , JIANG Yong-hong1 , LU Yu-ting1 , LUAN Xin-hua1
(1.Xuzhou Lifukang Biochemical Product Co., Xuzhou　221008 , China;
2.Xuzhou City Supervising&Testing Center for Products Quality , Xuzhou　221000 , China)
Abstract:A method for determination of amentoflavone in extract of Selaginella tamariscina by high performance liquid chro-
matography was set up.Chromatographic analysis was carried out on a Kromasil C18 columm with methanol/0.1 %H3PO4
aqueous solution as mobile phase , and the flow rate was 0.80 mL/min.The detection wavelength was 337 nm.The linear
relationship of calibration curve of amentoflavone is good in the range of 41.2 mg/L ～ 206 mg/L , and the regression equation
was Y =547.028X+15.489 5 (r=0.999 9).The average recovery of amentoflavone was 99.42 %(n=3)and the RSD
was 0.79 %.
Key words:additives of cosmetics;high performance liquid chromatography;amentoflavone
·135·
　第 2 期　　　　　　　　　 　　　　　刘玉平等:叶青素的合成研究　　　　　　　　　　 　　　　　成 果 集 录