全 文 ：藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌 A549细胞增殖的影响
杜庆聪1 　裴艳涛　杨国涛　孙雪飞　尹秋伟　吴铭生　(山东大学齐鲁医院胸外科 ,山东　济南　250012)
　　〔摘　要〕　目的　探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌 A549细胞生长增殖的作用机制。方法　体外培养肺癌 A549细胞 ,分别给予不同浓度
的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预 ,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后 A549 细胞形态学变化 , 四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT )检测藤梨
根乙酸乙酯提取物对 A549 细胞增殖活性的影响 ,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响 , 3H-掺入法检测藤梨根乙
酸乙酯提取物对 A549细胞 DNA合成的影响 ,免疫组化 SP法检测用药后 A549细胞 Ki-67抗原表达变化。结果　倒置显微镜下观察细胞形态学变
化 、MTT 实验 、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌 A549 细胞的生长 ,当药物浓度在 20 ～160 μg/ml
时 ,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性。并且 A549细胞 cpm 值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低 ,仍以 40 、80 、
160 μg/ml组作用明显 ,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P <0 .05)。结论　藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌 A549细胞的生长 、增
殖 ,其机制可能与抑制细胞 DNA合成 、降低 Ki-67抗原表达有关。
〔关键词〕　藤梨根提取物;肺肿瘤;Ki-67抗原;四甲基偶氮唑蓝比色法;DNA合成
〔中图分类号〕　R734 .1　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2011 )21-4180-04;doi:10.3969 / j .issn.1005-9202 .2011 .21.042
基金项目:山东省中青年科学家科研奖励基金项目(2007BS03061)
1　武警山东省总队医院
通讯作者:孙雪飞(1974-),男 ,副教授 ,副主任医师 ,硕士生导师 ,主要
从事肺癌的基础研究。
第一作者:杜庆聪(1982-),男 ,主治医师 , 在读硕士 ,主要从事胸部肿瘤
的基础研究。
　　藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕猴桃的根 , 味甘 、咸寒 、
微涩 , 具有清热解毒 、消肿疥 、祛风湿的功效。临床上常用于抗
肿瘤治疗 , 尤其对消化道肿瘤疗效较佳。近年研究发现 , 藤梨
根提取物体外对多种肿瘤有抑制作用。不同方法萃取的提取
物对肿瘤的抑制效果不同 ,有研究显示藤梨根乙酸乙酯提取物
抗肿瘤效果较佳 〔1〕。 有关藤梨根对肺癌的作用尚未见报道。
本研究以肺腺癌 A549 细胞系作为研究对象 , 观察藤梨根乙酸
乙酯提取物对肺腺癌 A549 细胞的生长抑制作用。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　细胞系与细胞培养　肺癌 A549 细胞系由山东省医学
科学院基础所惠赠。培养在含 10%小牛血清 ,青霉素及链霉素
各 100 U /ml的 RPMI 1640 培养液中 , 37℃、5% CO2 饱和湿度
条件下培养 , 0 .25%胰蛋白酶消化传代。
1.1.2　藤梨根乙酸乙酯提取物的制备　将藤梨根 (购自济南
建联药店)500 g粉碎成 20 目的粗粉→加 8 倍水煮 2 次 , 每次
1 h;过滤浓缩→加入乙酸乙酯溶媒萃取 3 次 (每次 300 ml)→
回收溶媒 , 得浓缩物约 25 g(含三萜类物质)→蒸馏水热溶→过
滤→滤液供实验用(无菌)。
1.1.3　主要仪器和试剂　RPMI 1640 培养液 (美国 Gibco 公
司),小牛血清(美国 Hyclone公司), 四唑盐(MTT)、二甲基亚
砜(DMSO)、胰蛋白酶均购自美国 Sigma 公司。全自动 CO2 孵
箱(美国杜邦公司 Napoc6100 ), 倒置显微镜 (日产 Olympus ,
ZMT-413), 450 型酶标仪 (美国 BioRad 生产 )。鼠抗人Ki-67单
克隆抗体 、SP 免疫组化试剂盒 、正常山羊血清购自北京中山生
物技术有限公司;标记脱氧嘧啶核苷酸(3H-TdR)(北京原子能
研究所);LKB-1217 液体闪烁计数器(瑞典产品)。
1.2　方法
1.2.1　药物浓度及配制方法 　按照药物血浆峰值浓度
(PPC)和预实验结果 , 以 DMSO作为溶剂 , 将藤梨根乙酸乙酯
提取物在临用前用 RPMI 1640 培养液分别配制成不同的浓度 ,
实验中藤梨根乙酸乙酯提取物的工作终浓度分别为 10 、20、40 、
80 、160 、320 μg / ml , 并使其中 DMSO 的终浓度均不超过
0.04%。并设空白对照组(0.04%DMSO +细胞)。
1.2.2　倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后 A549
细胞形态学变化　取对数生长期的 A549 细胞 , 用 RPMI 1640
培养液制细胞悬液 , 计数 , 调整成细胞浓度为 1.0 ×105 个 /ml
的细胞悬液 ,分别接种于 25 ml培养瓶中 ,每瓶 3 ml。37℃常规
培养 24 h ,细胞贴壁后分组:对照组加入含 0.04%DMSO 的培
养液。实验组分别加入新配制的含不同浓度藤梨根乙酸乙酯
提取物的培养液 , 倒置显微镜下动态观察 A549 细胞用药后 24 、
48 、72 h 的细胞体积及细胞膜 、细胞核等形态变化。
1.2.3　MTT 检测藤梨根乙酸乙酯提取物对 A549 细胞增殖活
性的影响　取对数生长期的 A549 细胞 , 经 0.25%胰蛋白酶消
化后 , 吹打成单细胞悬液 , 调整细胞浓度为 5.0 ×104 个 / ml , 接
种于 96 孔培养板中 ,每孔 100 μl , 含细胞 5 ×103 ,培养 24 h 待
细胞贴壁生长良好时 , 弃原培养液。实验组分别加入新配制的
含不同浓度藤梨根乙酸乙酯提取物的培养液 , 每个浓度 24 复
孔 , 6 个复孔为一组。对照孔加入含 0 .04%DMSO 的培养液 ,另
设不加细胞孔为空白对照 , 37℃、5% CO2 饱和湿度下分别培养
24 、48 、72、96 h , 弃上清 , 每孔中加入 MTT 溶液 (5 g / L)20 μl ,
37℃继续孵育 4 h , 终止培养。小心吸弃孔内上清液 , 每孔加入
150 μl DMSO振荡 10 min 后比色 ,选择 490 nm 波长 , 在酶标仪
上测定各孔光吸收值(OD),以空白对照孔调零 , 记录结果。按
Bliss 法计算半数抑制浓度(IC50值)。
1.2.4　集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆
4180 中国老年学杂志 2011年 11月第 31卷
原细胞增殖的影响　取对数生长期的 A549 细胞 , 经 0.25%胰
蛋白酶消化后 , 调整细胞浓度为 500 个 /ml ,接种于 35 mm 培养
皿中 , 每皿 2 ml , 实验组加入新配制的含不同浓度藤梨根乙酸
乙酯提取物的培养液 , 对照组用含 0.04% DMSO的培养液 ,每
组 4 个培养皿 , 摇匀后置于 5% CO2 、37℃培养箱中常规培养
7 d , 弃去培养液 ,甲醛固定 , Giemsa染色 ,镜下计数每皿大于 50
个细胞以上的集落数目。计算集落形成率 、集落形成抑制率。
集落形成率(%)=(每皿集落数 /每皿接种细胞数)×100%。
集落形成抑制率(%)=(1 -实验组集落数 /对照组集落数 )×
100%。
1.2.5　3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对 A549 细胞
DNA合成的影响　取对数生长期的 A549 细胞 , 经 0.25%胰蛋
白酶消化后 , 吹打成单细胞悬液 , 调整细胞浓度为 4.0 ×104
个 / ml。接种于96 孔培养板内 , 每孔 200 μl。实验孔加入终浓
度分别为 20 、40 、80 、160 μg /ml 的含藤梨根乙酸乙酯提取物的
培养液 , 每组设 6 个平行孔 , 设对照孔(0 .04% DMSO +细胞 ),
分别处理 24 、48 、72 h。终止培养前 6 h , 每孔加入3H-TdR
37 kBq(37 kBq /ml);培养终止后 , 经清洗 、消化 、离心等步骤 ,
用液体闪烁计数器测定每分钟脉冲数(cpm)值;按下式计算不
同浓度藤梨根乙酸乙酯提取物作用不同时间对 A549 细胞 DNA
合成的抑制率:掺入抑制率(%)=(1 -实验孔平均 cpm 值 /对
照组平均 cpm 值)×100%。
1.2.6　免疫组织化学 (SP)法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对
A549 细胞 Ki-67 抗原蛋白表达的影响　将经多聚赖氨酸处理
的小载玻片预先置于 12 孔培养板中 ,取对数生长期的 A549 细
胞 , 0 .25%胰蛋白酶消化后 , 调整细胞浓度为1.0 ×105个 /ml ,
然后接种细胞于培养板。 待细胞贴壁生长良好时 , 弃原培养
液 , 分别加入终浓度为 20 、40 、80 、160 μg /ml的含藤梨根乙酸乙
酯提取物的培养液 3 ml , 每浓度设 6 个复孔 , 并设对照孔
(0.04%DMSO +细胞)。置于培养箱中分别培养 24 h、48 h ,倒
去孔内培养液 , 取出载玻片 , 晾干;用 4%多聚甲醛固定10 min
(4℃)。采用链霉素-生物素(SP)免疫组化技术检测 Ki-67 抗
原表达 , 全部操作过程严格按照 SP 试剂盒说明书完成。组织
抗原修复采用微波抗原修复法;Ki-67 抗原单抗工作浓度均为
1∶100。采用已知阳性对照片作阳性对照;以磷酸盐缓冲液
(PBS)代替一抗作阴性对照。 Ki-67 抗原阳性结果判定为细胞
核内出现棕黄色颗粒。 将其置于 Olympus 显微镜下 400 倍高
倍视野下观察 , 对所测部位进行准确定位后 , 由摄像系统提取
数值化细胞图像输入捷达801 系列形态学分析系统 , 每例选取
4 个视野进行阳性率测定。以 Ki-67 抗原阳性表达率为增殖指
数(proliferation index , PI)。
1.3　统计学方法　应用 SPSS10 .0 统计软件进行分析 , 数据资
料以 x ±s表示 , 组间差异比较采用 t检验。
2　结　果
2.1　藤梨根乙酸乙酯提取物对人肺癌 A549 细胞形态的影响
　倒置显微镜下见用药前细胞排布紧密 , 贴壁生长 , 细胞为多
边形 , 核分裂象多见 ,有细胞重叠 ,细胞圆亮 、饱满 ,细胞间连接
紧密。经过 10 、20 μg /ml浓度藤梨根乙酸乙酯提取物处理后
细胞数目减少 , 但形态学改变不明显。当藤梨根乙酸乙酯提取
物浓度达到 40 μg / ml时 ,出现一定程度的形态改变 ,表现为细
胞间连接减少 、胞突回缩 , 细胞体积变小 , 变圆形;核分裂象减
少 , 核固缩出现 ,核颜色加深;重叠生长现象减少 , 细胞数目减
少;胞质透亮度下降 , 颗粒感增强 , 折光性增强;细胞脱落呈悬
浮状 , 并见细胞碎片。上述变化随藤梨根乙酸乙酯提取物作用
时间的延长和浓度的增加而明显。 尤其经过浓度为 160 、
320 μg / ml的藤梨根乙酸乙酯提取物处理后细胞形态学改变明
显 , 细胞形态极度不规则 , 细胞崩解形成碎片 , 见较多死亡细
胞。见图 1。
图 1　倒置显微镜下藤梨根乙酸乙酯提取物
对 A549 细胞形态变化的影响(×100)
2.2　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌 A549 细胞增殖活性的影
响　结果显示一定浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物对人肺癌
A549 细胞的生长有明显的抑制作用 , 且呈剂量依赖性。 当藤
梨根乙酸乙酯提取物浓度为 10 μg /ml 时抑制不明显;浓度在
20 μg /ml时即表现一定的抑制;此后随着藤梨根乙酸乙酯提取
物浓度的增加 , 实验孔内吸光值逐渐降低 , 浓度在 160 μg /ml
时对 A549 细胞的生长抑制效果最佳 , 而浓度在 320 μg / ml时
抑制作用无明显增加;并且在同一浓度 , 随着作用时间的延长 ,
抑制作用逐渐增大 , 呈现出明显的时间和剂量依赖性。浓度 >
40 μg /ml时 ,藤梨根乙酸乙酯提取物作用各时段吸光值与对照
组比较差异均有统计学意义 (P <0.05);浓度为 20 μg /ml时 ,
作用 72 h、96 h 后的吸光值与对照组比较才有统计学意义(P <
0.05)。藤梨根乙酸乙酯提取物作用 48 h 、72 h 、96 h 的 IC
50
分
别为 129.36 μg /ml 、75 .42 μg / ml 、58.88 μg /ml。见表 1。
表 1　不同浓度藤梨根乙酸乙酯提取物作用后
各组细胞吸光值变化(x ±s , n =6)
组别 剂量(μg /ml) 24 h 48 h 72 h 96 h
对照组 - 0.344 ±0.089 0.521 ±0.068 0 .872 ±0 .074 1 .337 ±0 .059
实验组 10 0.339 ±0.065 0.509 ±0.080 0 .851 ±0 .079 1 .300 ±0 .082
20 0.326 ±0.013 0.465 ±0.019 0 .694 ±0 .0231 )0 .997 ±0 .0211)
40 0.267 ±0.0351 )0.368 ±0.0461 )0 .557 ±0 .0511 )0 .742 ±0 .0441)
80 0.237 ±0.0431 )0.308 ±0.0271 )0 .417 ±0 .0421 )0 .527 ±0 .0361)
160 0.192 ±0.0521 )0.216 ±0.0481 )0 .258 ±0 .0391 )0 .273 ±0 .0351)
320 0.189 ±0.0481 )0.209 ±0.0371 )0 .241 ±0 .0311 )0.266 ±0.0431 )
　与对照组比较:1 )P <0 .05;下表同
2.3　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响　
集落形成实验结果显示 , 当藤梨根乙酸乙酯提取物浓度为
4181 杜庆聪等　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响　第 21 期
10 μg /ml时 , 对 A549 细胞的集落形成无明显的抑制作用;当藤
梨根乙酸乙酯提取物浓度 >20 μg / ml时对 A549 细胞集落形成
均有抑制作用 , 并且随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增高 ,
抑制作用逐渐明显 , 集落形成率逐渐降低 , 集落抑制率逐渐增
高 , 但 160 μg / ml和320 μg /ml两种浓度的抑制作用相似 ,无明
显差别;浓度 >20 μg /ml时 , 各组集落形成数与对照组比较差
异显著 , 有统计学意义(P <0 .05)。见表2。
2.4　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌 A549 细胞 DNA合成的影
响　结果显示藤梨根乙酸乙酯提取物对人肺癌 A549 细胞的
DNA合成有明显的抑制作用 , 且随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓
度的增加和作用时间的延长 , 抑制作用逐渐增强。 给药 24 h
后 , 80 、160 μg /ml组 cpm 值下降 , 与对照组比较差异有统计学
意义(P <0 .05);给药 48 h 后 40 μg /ml 组 cpm 值与对照组比
较差异有统计学意义 (P <0.05);而20 μg /ml组则与对照组比
较 cpm 值始终无显著差异。见表3。
表 2　藤梨根乙酸乙酯提取物作用后肺癌
A549 细胞的集落形成情况(x ±s , n =4)
组别 剂量(μg/ml) 集落形成数
集落形成率
(%)
集落形成
抑制率(%)
对照组 - 613 .24 ±23 .67 61 .32 -
实验组 10 597 .68 ±27 .18 59 .77 2 .54
20 482 .31 ±22 .62 1) 48 .23 21 .35
40 346 .73 ±23 .45 1) 34 .67 43 .46
80 246 .61 ±15 .89 1) 24 .66 56 .85
160 141 .54 ±14 .24 1) 14 .15 76 .92
320 140 .19 ±10 .32 1) 14 .02 77 .14
表 3　不同浓度藤梨根提取物对肺癌 A549 细胞3H-掺入率的影响(x ±s , n =6)
组别 剂量(μg /ml )
24 h
cpm(×103 )　　　　　IR(%)
48 h
cpm(×10 3)　　　　　IR (%)
72 h
cpm(×103 )　　　　　IR(%)
对照组 - 3 .678 ±0 .342 0 5 .475 ±0 .324 0 7 .325 ±0.364 0
实验组 20 3 .461 ±0 .325 5 .90 4 .861 ±0 .296 11 .21 5 .734 ±0.317 21 .72
40 2 .858 ±0 .217 22 .29 3.756 ±0 .237 1 ) 31 .40 4 .358 ±0 .2491 ) 40 .51
80 2 .461 ±0 .1921 ) 33 .09 2.995 ±0 .251 1 ) 45 .30 3 .164 ±0 .2231 ) 56 .81
160 1 .916 ±0 .1851 ) 47 .90 2.046 ±0 .167 1 ) 62 .63 2 .118 ±0 .1561 ) 71 .09
2.5　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌 A549 细胞 Ki-67 抗原表达
的影响　Ki-67 抗原阳性表现为细胞核显示棕黄色颗粒。藤梨
根乙酸乙酯提取物对 A549 细胞的 Ki-67 抗原表达有明显的抑
制作用 , 随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加和作用时间的
延长 , 细胞 PI逐渐降低 , 仍以 40、80 、160 μg /ml 组作用明显 , 与
对照组比较差异显著 ,有统计学意义(P <0.05)。见表 4 , 图 2。
图2　藤梨根乙酸乙酯提取物作用后
A549 细胞 Ki-67 抗原表达(SP , ×200)
表4　藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌细胞
Ki-67 抗原表达的影响(x ±s , %, n =6)
组别 剂量(μg /ml ) 24 h 48 h
对照组 - 78.14 ±3 .42 82 .45 ±4 .23
实验组 20 72.25 ±6 .45 67 .95 ±5 .83
40 65 .34 ±5 .78 1) 56 .38 ±4 .821 )
80 54 .63 ±6 .12 1) 38 .66 ±3 .451 )
160 40 .54 ±4 .39 1) 26 .40 ±5 .271 )
3　讨　论
　　目前肺癌的治疗除手术之外 , 仍以化疗 、放疗为主。这些
治疗的副作用较大 ,在杀灭肿瘤细胞的同时常对正常组织产生
损伤 ,如骨髓抑制 、肝肾损害等 。中药抗肿瘤已有悠久的历史 ,
中药的低毒 、安全 、有效已是人们普遍接受的事实 , 从中药及其
他天然药物中寻找新的抗肿瘤药物已成为目前研究的热点。
藤梨根(Radix Actinidiae )为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕猴桃的
根 ,近年实验研究也表明复方藤梨根制剂对高转移性人肺腺癌
细胞(PG)有较强的杀伤作用 ,抑制其生长 , 呈量效关系 ,抑制率
最高达 63.67%,可使细胞阻滞于 G0 / G1 期和细胞内 〔Ca2 +〕升
高 ,并且上调细胞间隙连接通讯 (GJIC)功能;增强多药耐药
(MDR)细胞株内阿霉素(ADR)的积聚 ,减少 ADR的外排 , 部分
逆转耐药株 K562 / ADR 和 K562 /长春新碱(VCR)细胞的 MDR;
在转录水平下调 MDR1 mRNA的表达 , 从而降低 MDR 细胞内
P-糖蛋白(P-gp)的表达 〔2 ～6 〕。因此其抗肿瘤药理研究和临床验
证受到广泛关注。本文自制藤梨根乙酸乙酯提取物 ,观察其对
肺癌细胞生长增殖的影响 , 并探讨其可能的作用机制。
　　本研究结果显示藤梨根乙酸乙酯提取物对体外培养的
A549 细胞有明显的生长抑制和杀伤作用 , 此作用与藤梨根乙酸
乙酯提取物浓度和作用时间有关。当浓度≤20 μg / ml时 , 作用
不明显;当浓度 ≥40 μg / ml 时 , 抑制作用增强;当浓度 ≥
160 μg /ml时 , 效果趋于平缓。随着作用时间的延长 , 抑制作用
逐渐增加 ,呈现出明显的时间依赖性。证实藤梨根乙酸乙酯提
取物具有抗肺癌的作用。
　　克隆原细胞是指具有持续分裂和自我更新能力的细胞 ,肿
瘤的生长 、转移 、复发均以克隆原细胞的增殖为基础。集落形
4182 中国老年学杂志 2011年 11月第 31卷
成实验反映肿瘤细胞中具有增殖活性的克隆原细胞的增殖能
力和潜力 , 本实验结果显示当藤梨根乙酸乙酯提取物浓度 >
20 μg /ml时对肺癌克隆原细胞具有较强的抑制作用 , 可抑制
A549 细胞的集落形成率 , 并存在剂量-效应关系。表明藤梨根
乙酸乙酯提取物可以抑制肺癌克隆原细胞的生长 , 也证实其具
有抗肺癌活性。
　　以上实验显示当剂量 <20 μg / ml时抑制作用不明显 , 而 >
160 μg / ml时抑制作用无明显增强。故进一步实验采用 20 、40 、
80 、160 μg /ml等四个浓度进行 , 并通过3H-TdR 掺入试验检测
细胞 DNA合成 、免疫组化 SP法检测 Ki-67 抗原表达的方法 , 对
藤梨根乙酸乙酯提取物抗肺癌作用机制进行初步探讨。结果
显示随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加和作用时间的延
长 , A549 细胞的 cpm值及 PI 逐渐降低。表明藤梨根乙酸乙酯
提取物对 A549 细胞的 DNA 合成有明显的抑制作用 , 可下调
A549 细胞 Ki-67 抗原表达强度 , 从而降低细胞增殖活性 , 使细
胞增殖受到抑制 , 此为藤梨根乙酸乙酯提取物抑制肺癌细胞增
殖的机制及靶点。而藤梨根乙酸乙酯提取物中的三萜类化合
物 , 可能是其抗肺癌作用的物质基础 〔7 〕。
　　总之 , 应用现代药理 、药学的理论及方法深入研究藤梨根
有效成分的药用价值和作用机制 ,对藤梨根的开发应用具有极
为重要的经济和社会意义。本研究说明藤梨根乙酸乙酯提取
物在体外对肺癌细胞有较强的抑制作用 , 且呈现出时间与剂量
依赖性 , 抗肺癌作用与抑制肺癌细胞 DNA 合成 、下调 Ki-67 抗
原表达强度 、降低癌细胞增殖活性有关 , 表明藤梨根乙酸乙酯
提取物在治疗肺癌方面将具有良好的临床应用和开发前景 ,但
其具体抗肺癌机制有待进一步研究。
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〔2011-08-08 收稿　2011-09-03 修回〕
(编辑　袁左鸣 /徐　杰 )
蒺藜皂苷对抗 D-半乳糖致小鼠皮肤衰老的影响
朱辛为　李质馨1 　徐　冶2 　田洪艳1 　沈　楠　王　爽　温　娜　陈　为　窦肇华1 　
(吉林医药学院医学实验中心 ,吉林　吉林　132013)
　　〔摘　要〕　目的　探讨蒺藜皂苷对 D-半乳糖所致小鼠皮肤衰老的影响。方法　健康昆明种小鼠 40只 ,随机分为正常对照组 、衰老模型组 、蒺
藜皂苷组和维生素 E组 ,每组 10只。颈背部皮下注射 5%D-半乳糖连续 6 w ,建立小鼠亚急性衰老模型。给药组同时灌胃给予蒺藜皂苷和维生素E ,
正常对照组和衰老模型组给予等体积纯净水。检测全血中过氧化氢酶(CAT )、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px )活力;检测皮肤组织匀浆中超氧化物
歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量。结果　蒺藜皂苷可提高全血CAT及 GSH-Px活力 ,提高皮肤 SOD 活力 ,降低皮肤 MDA含
量 ,提高 Hyp含量。结论　蒺藜皂苷具有抗D-半乳糖所致小鼠皮肤衰老的作用。
〔关键词〕　蒺藜皂苷;皮肤;衰老;小鼠
〔中图分类号〕　R322 .56　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2011 )21-4183-03;doi:10 .3969 / j.issn.1005-9202 .2011 .21 .043
基金项目:吉林省教育厅科学技术研究项目(No .2009505)
1　吉林医药学院组织胚胎学教研室　2　吉林医药学院科研实验室
通讯作者:李质馨(1962-),女 ,教授,主要从事衰老与生殖研究。
第一作者:朱辛为(1959-),女 ,副教授 ,主要从事衰老与生殖研究。
　　蒺藜皂苷是从中药蒺藜中提取分离的有效成分。研究表
明蒺藜皂苷能有效对抗小鼠多项衰老指标的出现 ,促进衰老小
鼠学习记忆能力 〔1 〕。蒺藜皂苷可提高小鼠红细胞超氧化物歧
化酶(SOD)活性 , 降低丙二醛(MDA )含量 〔2 〕 ,降低小鼠脑组织
中过氧化脂质(LPO)含量 〔3 〕。蒺藜皂苷能够通过提高衰老小
鼠 Na +-K +-ATPase的活性 , 抵抗自由基的反向作用 , 达到延缓
衰老的作用 〔4 〕。 目前蒺藜皂苷对皮肤衰老的影响报道尚少。
本实验采用 D-半乳糖衰老小鼠模型 ,通过研究蒺藜皂苷对皮肤
老化相关酶 、老化代谢产物的影响 , 探讨蒺藜皂苷在对抗皮肤
衰老过程中的作用机制及其意义。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物及分组　清洁级健康雄性昆明种小鼠 , 40
只 , 体重(20 ±2) g(吉林大学动物实验中心 )。随机分为正常
对照组 、衰老模型组 、蒺藜皂苷组和维生素 E 组 (阳性对照 ),
每组 10 只 , 分笼饲养 , 饲养温度为 18℃ ～ 22℃, 相对湿度
4183 朱辛为等　蒺藜皂苷对抗 D-半乳糖致小鼠皮肤衰老的影响　第 21 期