全 文 ：doi:10． 3969 / j． issn． 1002 －7386． 2011． 13． 001 ·论著·
峨参石油醚提取物对肺癌细胞 A549 和
H460 增殖的抑制作用观察
马超英 涂显琴 牛顺子 高雅蓉 唐静 耿耘 蒋合众
基金来源:国家自然科学基金资助项目(编号:81073036) ;中央高
校基本科研业务费专项研究资助项目(编号:SWJTU09ZT29)
作者单位:610031 成都市，西南交通大学生命科学与工程学院
(马超英、涂显琴、高雅蓉、唐静、耿耘、蒋合众) ;石药集团恩必普药业有
限公司(牛顺子)
【摘要】 目的 探讨不同浓度的峨参石油醚提取物对体外培养的人肺癌细胞 A549、H460 的增殖及
凋亡的抑制作用。方法 不同浓度的峨参石油醚提取物作用于肺癌细胞 A549 和 H460，48 h后 MTT法观
察药物对肺癌细胞 A549 和 H460 生长的抑制效应;用倒置显微镜观察细胞形态学的改变，应用 DAPI染色
法观察不同浓度峨参石油醚提取物作用于癌细胞 24 h后对细胞凋亡的影响。结果 峨参石油醚提取物对
肺癌细胞 A549 和 H460 的半数有效抑制浓度 IC50 值分别为 6． 13 μg /ml和 0． 97 μg /ml;通过倒置显微镜可
观察到细胞的形态学改变，细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞，表现为细胞生长明显受到抑制，荧光增
加，有明显的细胞核断裂和皱缩。结论 峨参石油醚提取物对肺癌细胞增殖具有明显的抑制及诱导凋亡
的作用。
【关键词】 峨参石油醚提取物;肺肿瘤;细胞凋亡
【中图分类号】 R 734． 2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002 － 7386(2011)13 － 1925 － 02
The observation for the inhibitory effect of petroleum ether extract of Anthriscus on the cell proliferation
of lung cancer cell A549 and H460 MA Chaoying* ，TU Xianqin* ，NIU Shunzi，et al． * School of Life Science
and Engineering，Southwest Traffic University，Chengdu 610031，China
【Abstract】 Objective To observe the inhibitory effect of petroleum ether extracts of Anthriscus sylvestris
(L．)Hoffm． on the cell proliferation of lung cancer cell A549 and H460．Methods The cells of A549 and H460
were treated by different concentrations of petroleum ether extracts of Anthriscus，after 48 hours，the inhibitory
effects on the cell growth of lung cancer cell A549 and H460 were detected by MTT，and the changes of cell
morphology were observed under inverted microscope，24 hours after the cells were treated with the petroleum ether
extracts of Anthriscus，and its effects on the apoptosis of cancer cells were detected by DAPI staining． Results
The IC50 for the lung cancer cells A549 and H460 was 6． 13μg /ml and 0． 97μg /ml respectively，and the
morphological changes were found under inverted microscope，and obvious apoptotic cells were observed after cells
staining，and cell growth was inhibited obviously，fluorescence was increased，with visible nuclear fracture and
collapse． Conclusion The petroleum ether extracts of Anthriscus have obvious inhibitory effect on the proliferation
of lung cancer cell，which can induce the cells’apoptosis．
【Key words】 extracts of Anthriscus;lung cancer cell;cell apoptosis
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，它严重影响人类生
命健康，目前已成为世界上发病率和病死率最高的恶性肿瘤之
一。峨参是伞形科峨参属植物，与峨蕊、雪磨芋历来被人们认
为是峨眉山的三大特产而闻名远近。中医认为峨参有健脾益
气，活血化瘀的作用。有文献报道从峨参根中提取出一种具有
抗肿瘤活性的有效成分，结构研究表明是去氧鬼臼毒素(峨参
内酯) ，对人体子宫颈腺癌传代细胞系的作用具有生物活性［1］，
而对肺癌的作用笔者尚未见文献报道。本文主要研究峨参石
油醚提取物对肺癌细 A549 和 H460 增殖与凋亡的影响。
1 材料与方法
1． 1 材料 人肺癌细胞株 A549 和 H460 购自于四川大学华西
国家重点实验室。
1． 2 药品与试剂 RPMI-1640 和胰蛋白酶均采用 Gibco 进口
分装，MTT购自宝信生物有限公司。峨参饮片购自于四川省峨
眉山市仙山中药饮片公司，经本院宋良科副教授鉴定为四川峨
眉山产伞形科峨参属植物峨参的干燥块根。其余试剂均采用
分析纯。
1． 3 主要仪器 CO2 恒温孵箱(3110 型，美国 Thermo 公司)、
细胞培养板、培养瓶(美国 Coster公司)、酶标仪(Elx-800 型，美
国 Bio-Tek公司)、离心机(L420 型，长沙湘仪离心机有限公
司)、倒置相差显微镜(日本索尼公司)、荧光显微镜(日本奥林
巴斯公司)、超净工作台(BSW-880，江苏苏净集团有限公司)、
闪式提取器(JHBE-50 型，河南金鼎科技有限公司)、旋转蒸发
仪(上海亚荣生化仪器厂)。
1． 4 实验方法
1． 4． 1 峨参石油醚提取物的制备:将峨参切断，粉碎成细小颗
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粒，过 20 目筛，烘干，用 8 倍量 80%乙醇浸泡 24 h，利用闪式提
取器，分别间断提取共 3 min(15 000 r /min，1 800 W) ，抽滤，得
到滤液，旋转蒸发仪回收溶剂，得到浸膏。再用石油醚萃取，得
石油醚提取物，用旋转蒸发仪回收溶剂，得浸膏，使用前用 RP-
MI-1640 调整至实验所需浓度，DMSO(浓度 ＜ 0． 05%)助溶。
1． 4． 2 细胞株培养:将肺癌细胞 A549 和 H460 接种于含 10%
新生牛血清的 RPMI-1640 培养基的培养瓶中，37℃、5% CO2、
饱和湿度条件下常规培养，每 2 天换液传代培养，取对数生长
期细胞用于实验。
1． 4． 3 峨参石油醚提取物对肺癌细胞 A549、H460 增殖抑制作
用的检测:取对数生长期细胞接种于 24 孔培养板内，2 ×
104 个·ml －1·孔 － 1。细胞贴壁后加入不同浓度的峨参石油醚
提取物，共设 7 个药物浓度梯度，分别为 1． 25、2． 5、5、10、20、40
和 80 μg /ml，每个浓度 3 个复孔，每孔体积 500 μl，培养 48 h
后，每孔加入 1 mg /ml MTT 工作液 500 μl，37℃放置 4 h，弃上
清，每孔加入 500 μl 0． 4%酸化异丙醇，220 r /min 摇床震荡
5 min溶解结晶，经充分震荡后，吸取 200 μl 至 96 孔酶标板于
全自动酶标仪检测 570 nm 波长处的各孔吸光度(OD 值) ，
0． 1% DMSO作为阴性对照，根据 0． 1% DMSO 值绘制曲线，比
较不同浓度峨参石油醚提取物对 2 个细胞株增殖的影响［2］。
1． 4． 4 DAPI染色:将洁净无菌盖玻片置于 6 孔板内，种入细
胞培养过夜，使为 60% ～ 80%。设对照组、2． 5 μg /ml、5 μg /ml
峨参石油醚提取物组(A549)和对照组、1． 25 μg /ml、2． 5 μg /ml
峨参石油醚提取物组(H460) ，分别继续培养 24 h，吸弃废液，
然后用 4%多聚甲醛固定细胞爬片 35 min，1 × PBS 冲洗 3 次，
每次 2 min，加入 2 μl DAPI染色液，染色 15 min，1 × PBS冲洗 2
次，取出爬片用封片液封片，荧光显微镜可检测到呈蓝色的细
胞核。激发波长在 350 nm左右，发射波长在 460 nm左右。
1． 5 统计学分析 应用 SPSS 17． 0 统计软件，计量资料以 珋x ± s
表示，实验组及对照组比较采用单因素方差分析，P ＜ 0． 05 为
差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 峨参石油醚提取物对肺癌细胞 A549 和 H460 增殖的抑制
作用 结果显示，随着药物浓度的升高，细胞存活率不断下降，
峨参石油醚提取物对肺癌细胞 H460 的抑制作用比对细胞
A549 明显。经计算得出，峨参石油醚部位提取物对肺癌细胞
A549 和 H460 的 IC50 值分别为 6． 13 μg /ml 和 0． 97 μg /ml，见
图 1。
2． 2 峨参石油醚提取物对肺癌细胞 A549 和 H460 凋亡的影响
倒置显微镜观察到，经峨参石油醚提取物处理 48 h 后，肺癌
细胞 A549 和 H460 的生长明显受到抑制，细胞体积缩小，连接
消失，与周围的细胞脱离，细胞由梭形变成圆形细胞脱落，浮悬
于培养液中［3］。荧光显微镜观察到，经峨参石油醚提取物处理
24 h后，肺癌细胞 A549 和 H460 生长明显受到抑制，荧光增加，
有明显的细胞核断裂和皱缩，随剂量增加，细胞凋亡现象越明
显，见图 2。
图 1 不同浓度峨参石油醚提取物对肺癌细胞 A549 和 H460 生长的抑
制作用
图 2 峨参石油醚提取物处理后细胞形态(× 400)
3 讨论
本实验应用 MTT比色法检测峨参石油醚提取物对肺癌细
胞 A549 和 H460 增殖的抑制作用，经计算得出其 IC50 值分别
为 6． 13 μg /ml和 0． 97 μg /ml，且抑制率与浓度呈明显的效应
关系，随着药物浓度的增加，细胞存活率不断下降。用倒置显
微镜观察到，经峨参石油醚提取物处理肺癌细胞 A549 和 H460
后，癌细胞生长明显受到抑制，细胞体积缩小，连接消失，与周
围的细胞脱离，细胞由梭形变成圆形细胞脱落，浮悬于培养液
中。不同浓度的峨参石油醚提取物作用于 A549 和 H460 细胞，
24 h后用 DAPI染色，荧光下可见细胞核发生明显皱缩和断裂。
综上所述，本实验通过对峨参石油醚提取物对肺癌细胞
A549 和 H460 的影响，为峨参抗肿瘤的研究提供了实验依据，
其抗肿瘤机制有待于进一步研究。
参考文献
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lotoxin isolated from Anthriscus sylvestris:Induction of G2 /M cell cycle
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(收稿日期:2011 － 03 － 14)
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