全 文 ：收稿日期:2012-08-27 接受日期:2012-11-29
基金项目:广西教育厅基金项目(201010LX340)
* 通讯作者 E-mail:yong-ye@ 163． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2013，25:245-248
文章编号:1001-6880(2013)2-0245-04
藤茶抗氧化活性研究
欧贤红1，2，叶 勇3，4* ，黄秋洁5，刘华钢3，宋云飞4
1泸州医学院，泸州 646000;2 桂林医学院药学院，桂林 541004;3 广西医科大学药学院，南宁 530021;
4桂林莱茵生物科技股份有限公司博士后工作站，桂林 541100;5 广西中医药大学药学院，南宁 530001
摘 要:本文建立体外二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)体系，并采用连苯三酚法在碱性溶液中自氧化反应产
生超氧阴离子自由基(O-·2 )和邻二氮菲-Fe
2 + /H2O2 体系产生羟自由基(·OH)法，在酶标仪上检测藤茶总黄
酮、二氢杨梅素和杨梅素对 DPPH·、O-·2 和·OH 的清除作用。结果表明:藤茶各提取物均有不同程度的体外
抗氧化效果，杨梅素对 DPPH·的清除作用最强 DPPH· IC50(2． 91 ± 0． 28)mg /L，二氢杨梅素对 O
-·
2 的清除作
用最强 IC50(3． 88 ± 0． 99)mg /L，对·OH的清除效果是杨梅素 ＞二氢杨梅素 ＞藤茶总黄酮。确定杨梅素和二氢
杨梅素为藤茶的主要抗氧化相关活性成分。
关键词:藤茶;二氢杨梅素;杨梅素;抗氧化
中图分类号:TS202． 3 文献标识码:A
Antioxidant Activity of Ampelopsis grossedentala
OU Xian-hong1，2，YE Yong3，4* ，HUANG Qiu-jie5，LIU Hua-gang3，SONG Yun-fei4
1Luzhou Medical Colloge，Luzhou 646000，China;2Guilin Medical University，Guilin 541004，China;3Guangxi Medical University，
Nanning 530021，China;4 Postdoctoral R＆D Workstations，Guilin Layn Natural Ingredients Corp，Guilin 541100，China;
5Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China
Abstract:In this study，the scavenging effect of total flavonoid，dihydromyricetin and myricetin of Ampelopsis grossedntata
on DPPH·，·OH，and O-·2 were investigated using ELISA Reader． The superoxide free radical (O
-·
2 )was generated
with auto-oxidation in alkalcsent solution with the help of pyrogallol and the hydroxyl free radical (·OH)was produced
with 1，10-phenathroline-Fe2 + /H2O2 ． The results showed that the activity of myricetin was the strongest in DPPH· sys-
tem (DPPH· IC50 2． 91 ± 0． 28 mg /L) ，and the activity of dihydromyricetin was the strongest in O
-·
2 system (IC50
3. 88 ± 0． 99 mg /L)． In ·OH system，myricetin displayed the strongest activity，followed by dihydromyricetin and the to-
tal flavonoid． Hence，dihydromyricetin and myricetin may be the main antioxidant components of A． grossedntata．
Key words:Ampelopsis grossedntata;dihydromyricetin;myricetin;antioxidant activity
藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄［Ampe-
lopsis grossedntata (Hand-Mazz)W． T． Wang］的茎叶，
该植物总黄酮含量丰富［1］。研究表明［2］，黄酮类化
合物的抗衰老、抗突变、抗动脉粥样硬化等作用都与
其抗氧化活性有关。藤茶总黄酮具有较强的抗氧化
活性，可清除氧自由基，并能预防性对抗超氧阴离子
自由基引起的氧化性损伤［2，3］。藤茶黄酮类化合物
包括杨梅素、二氢杨梅素、福建茶素、杨梅黄素、杨梅
苷等，其中二氢杨梅素含量较高［1］。据报道［3，4］，杨
梅素和二氢杨梅素清除 DPPH·的活性均强于芦
丁，其中二氢杨梅素的抗氧化活性还强于 Vit C 和
常用的人工合成抗氧化剂叔丁基对苯二酚(TB-
HQ)。张晓元等［5］采用 ESR 和自旋捕集技术测定
二氢杨梅素对·OH、O-·2 和 DPPH·的清除效果。
结果表明，二氢杨梅素清除自由基的能力是 O-·2 ＞
DPPH· ＞·OH。该研究结果与徐静娟等［6］采用氮
蓝四唑(NBT)光化还原法、抗坏血酸-Cu2 + -H2O2体
系法和亚油酸体系法的研究结果一致。此外，二氢
杨梅素对动物油和植物油均有很强的抗氧化作用。
而杨梅素无论对水溶性食品或脂溶性食品，均能发
挥很好抗氧化作用，作用明显强于合成抗氧化剂 3，
5-二叔丁基-4-羟基甲基苯(BHT)和芦丁［7］。因此，
二氢杨梅素和杨梅素可作为天然抗氧剂应用于食品
保藏。
DOI:10.16333/j.1001-6880.2013.02.006
以往研究杨梅素和二氢杨梅素的抗氧化活性大
多采用紫外分光光度法［4，6，7］。对藤茶总黄酮、杨梅
素和二氢杨梅素在 DPPH·、氧自由基(O-·2 )和羟自
由基(·OH)体系中的抗氧化活性尚未见报道。因
此，为进一步明确藤茶不同提取物藤茶总黄酮、二氢
杨梅素和杨梅素的抗氧化活性，本文采用酶标仪法
检测了藤茶总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素对·OH、
O-·2 和 DPPH·的清除效果并，比较它们清除自由基
的能力。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
酶标仪(型号 VersaMax)。
1． 2 药品与试剂
藤茶总黄酮、二氢杨梅素和杨梅素(均为自制，
含量分别为 74%、90%、83%，以 1% DMSO 超声溶
解成适宜浓度备用;DPPH·样品(Sigma 公司) ;邻
苯三酚、硫酸亚铁(FeSO4)、乙醇、盐酸(HCl)、磷酸
二氢钠、磷酸氢二钠、邻二氮菲(均为分析纯)。
2 实验方法
2． 1 DPPH·体系
参考文献［8］，并稍作改进:取 0． 5 mL 不同浓度
样品液于离心管中，加入 0． 5 mL 0． 08 mg /mL 的
DPPH·溶液(准确称取 20 mg DPPH·，加 60%乙
醇溶解于小烧杯中，移至 250 mL 容量瓶，定容) ，混
匀，取 200 μL置于 96 孔板中，共 3 孔，静置 30 min，
于 517 nm处测定吸光度 Ai;同时测定 0． 5 mL DPPH·
溶液与 0． 5 mL 60%乙醇混合溶液的吸光度 Ac;0． 5
mL提取液与 0． 5 mL 60%乙醇混合溶液的吸光度
Aj。采用维生素 C(Vit C)作为阳性对照药按照同法
进行测试。根据以下公式计算抑制率:抑制率 = {1
-(Ai-Aj)/Ac}× 100%，抑制率越大，则表示该试样
的抗氧化活性越强。实验重复 3 次。
2． 2 ·OH体系［9］
取 0． 1 mL 7． 5 mmol /L邻二氮菲溶液置于 1 mL
离心管中，加入 0． 2 mL 0． 2 mol /L pH 7． 4 的磷酸盐
缓冲液(PBS) ，混匀后加入 0． 1 mL 7． 5 mmoL /L 的
FeSO4 溶液，充分混匀后加入 0． 1 mL 0． 1% H2O2 溶
液，然后加双蒸水补足到 1 mL，混匀，取 200 μL 置
于 96 孔板中，共 3 孔，在 37 ℃水浴下反应 1 h 后，
以 536 nm波长下测定吸光度 A(损害)。同上法，不
加入 H2O2 和样品溶液测定 A(未损害)。方法同
2. 1，分别加入不同浓度的样品溶液 0． 1 mL 后加
H2O2，测 536 nm 时的吸收值，即得 A 样。重复 3
次。采用等浓度的 Vit C 作为阳性对照药按照同法
进行测试。按下式计算·OH 清除率:·OH 清除率
(S%)= (A 样-A 损害)/(A 未损害-A 损害)×
100%。
2． 3 O-·2 体系
［9］
取 2． 7 mL PBS(pH 8． 2) ，加 0． 2 mL蒸馏水，邻
苯三酚 0． 1 mL。混匀，于 25 ℃保温，4 min 后加入
10 mol /L HCl一滴终止反应。取 200 μL置于 96 孔
板中，共 3 孔，于 325 nm 处测吸光度 A0。测定样品
清除能力时，取 2． 7 mL PBS，加 0． 2 mL不同浓度的
样液，0． 1 mL的邻苯三酚，混匀于 25 ℃保温，4 min
后加入 10 mol /L HCl一滴终止反应。于 325 nm 处
测吸光度 Aj。采用等浓度的 Vit C 作为阳性对照药
按照同法进行测试。清除率计算公式:S =［1-(Aj-
Ai)/A0］× 100 %，Ai 为样液吸光度。实验重复 3
次。
2． 4 数据统计方法
数据以均值 ± 标准差(x ± s)表示，采用 SPSS
11． 0 软件进行统计处理，组间比较采用 t检验。
3 实验结果
3． 1 对 DPPH·的清除活性
以水溶性抗氧化剂 Vit C 作对照，研究了藤茶
总黄酮、二氢杨梅素、杨梅素对 DPPH·的清除作
用，结果见图 1。由图 1 可知，藤茶总黄酮、二氢杨
梅素、杨梅素对 DPPH·具有很明显的清除作用，三
者的清除效果均比同浓度的 Vit C 效果好，且呈量
效关系。由表 1 可以看出，藤茶总黄酮、二氢杨梅
素、杨梅素清除 DPPH·的 IC50值为均大于 Vit C，其
中杨梅素的 IC50值比藤茶总黄酮、二氢杨梅素的小，
提示杨梅素的清除 DPPH·效果优于藤茶总黄酮、
二氢杨梅素。
图 1 藤茶不同提取物对 DPPH·的清除作用
Fig. 1 DPPH· scavenging activities of different extracts of A．
grossedntata
642 天然产物研究与开发 Vol. 25
3． 2 对·OH的清除活性
由图 2可知，在 10 ～ 80 mg /L浓度范围内，藤茶
各提取物的抗氧化活性大小为:杨梅素 ＞二氢杨梅素
＞藤茶总黄酮 ＞ Vit C。但在 200 ～ 400 mg /L浓度范
围内藤茶各提取物对·OH的清除活性弱于 Vit C。
图 2 藤茶不同提取物对·OH的清除作用
Fig. 2 ·OH scavenging activities of different extracts of
A． grossedntata
3． 3 对 O-·2 的清除活性
如图 3 和表 1 所示，藤茶不同提取物藤茶总黄
酮、杨梅素和二氢杨梅素清除 O-·2 的作用明显强于
Vit C，且二氢杨梅素的清除作用优于藤茶总黄酮和
图 3 藤茶不同提取物对 O-2·的清除作用
Fig. 3 O-2·scavenging activities of different extracts of A．
grossedntata
表 1 藤茶不同提取物的抗氧化活性(x ± s，n = 3)
Table 1 Antioxidant activities of different extracts of A． gross-
edntata(x ± s，n = 3)
样品
Samples
IC50(mg /L)
DPPH·体系
DPPH· System
O-·2 体系
O-·2 System
藤茶总黄酮 Total flavonoid 3． 32 ± 0． 181) 5． 22 ± 3． 751)
杨梅素 Myricetin 2． 91 ± 0． 281，2，3)5． 02 ± 0． 091，3)
二氢杨梅素 Dihydromyricetin 3． 76 ± 0． 081) 3． 88 ± 0． 991)
Vit C Control 5． 63 ± 1． 15 －
注:与 Vit C比较，1)P ＜ 0． 05;与藤茶总黄酮比较，2)P ＜ 0． 05;与二
氢杨梅素比较，3)P ＜ 0． 05;“-”无法计算 IC50
Note:Compare with Vit C，1)P ＜ 0． 05;Compare with total flavonoid，2)P
＜ 0． 05;Compare with dihydromyricetin，3)P ＜ 0． 05;“ －”IC50 cannot be
calculated
杨梅素，其 IC50为 3． 88 ± 0． 99 mg /L。
4 讨论
藤茶总黄酮、杨梅素和二氢杨梅素具有较强的
抗氧化活性。藤茶总黄酮清除黄嘌呤(黄嘌呤氧化
酶系统产生的 O-·2 的 IC50为 14． 7 mg /L
［3］。在 0． 5
～ 10． 0 mg /mL范围内，藤茶总黄酮的抗活性氧能力
呈量效关系，70 mg /mL藤茶总黄酮的抗氧化能力超
过维生素 E和 Vit C［2］。本文采用邻苯三酚自氧化
法测得藤茶总黄酮清除 O-·2 的 IC50为(5． 22 ± 3． 75
)mg /L，在 1． 0 ～ 20． 0mg /L范围内，对 O-·2 的抑制率
高于同等浓度的 Vit C，并呈量效关系。此外，本文
结果显示藤茶总黄酮清除 DPPH·的 IC50为 (3． 32
± 0． 18)mg /L，在 2． 0 ～ 10． 0 mg /L范围内，对 DP-
PH·的抑制率高于同等浓度的 Vit C，并呈量效关
系;在 10 ～ 200． 0 mg /L范围内，对·OH 的抑制作
用呈量效关系，其抑制率高于同等浓度的 Vit C。据
报道［3，4］，杨梅素和二氢杨梅素清除 DPPH·的 IC50
值分别为 18． 34、10． 70 μg /mL，它们的抗氧化活性
均强于阳性药芦丁(IC50 = 31． 32 μg /mL) ，其中二
氢杨梅素还强于 Vit C 和常用的人工合成抗氧化剂
叔丁基对苯二酚(TBHQ)。但是，本实验测得杨梅
素和二氢杨梅素清除 DPPH·的 IC50 值分别为
(2. 91 ± 0． 28)、(3． 76 ± 0． 08)mg /L，它们的抗氧化
活性均强于阳性药 Vit C。张晓元等［5］采用 ESR 和
自旋捕集技术测定二氢杨梅素对·OH、O-·2 和 DP-
PH·的清除效果。结果表明，二氢杨梅素清除 O-·2 、
·OH和 DPPH·的 IC50分别为 7． 4、297． 8 和 12． 4
μg /mL，表明二氢杨梅素对 O-·2 的清除作用更强。
该研究结果与徐静娟等［6］采用 NBT光化还原法、抗
坏血酸-Cu2 + -H2O2体系法和亚油酸体系法的研究结
果一致(二氢杨梅素对不同自由基的清除能力是
O-·2 ＞·OH ＞脂过氧自由基 ROO·)。为进一步明
确藤茶不同提取物藤茶总黄酮、二氢杨梅素和杨梅
素的抗氧化活性，我们采用酶标仪检测了藤茶总黄
酮、二氢杨梅素和杨梅素对·OH、O-·2 和 DPPH·的
清除效果并比较它们清除自由基的能力，结果二氢
杨梅素对 DPPH·和 O-·2 的清除作用强于·OH，杨
梅素对不同自由基的清除能力是 DPPH· ＞ O-·2 ＞
·OH;不同藤茶提取物对 O-·2 清除能力是二氢杨梅
素 ＞杨梅素 ＞藤茶总黄酮，对·OH 清除能力是杨
梅素 ＞二氢杨梅素 ＞藤茶总黄酮，对 DPPH·清除
742Vol. 25 欧贤红等:藤茶抗氧化活性研究
能力是杨梅素 ＞藤茶总黄酮 ＞二氢杨梅素。O-·2 是
生成其它活性氧自由基的前体，清除 O-·2 就意味着
能控制其它活性氧自由基的形成［10］，因此，本文实
验结果提示杨梅素和二氢杨梅素是藤茶总黄酮中主
要抗氧化活性成分。
二氢杨梅素对动物油和植物油均有很强的抗氧
化作用。杨梅素无论对水溶性食品(饮料、冷饮、维
生素 C)或脂溶性食品(食用油脂、乳脂、人造奶油、
蛋黄酱、维生素 D) ，均能发挥很好抗氧化作用，特别
在护色、防止油脂酸败和香气劣化等方面，具有很强
优越性，作用明显强于合成抗氧化剂 3，5-二叔丁基-
4-羟基甲基苯(BHT)和芦丁［7］。因此，二氢杨梅素
和杨梅素可作为天然抗氧剂应用于食品保藏。但
是，二氢杨梅素在藤茶中含量高，且广泛存在于多种
药食同源的植物中，提取方法简单［1］，比杨梅素更
易获得，因此二氢杨梅素比杨梅素更具经济开发价
值。
本文明确了二氢杨梅素、杨梅素的抗氧化作用，
今后将进一步研究它们的抗氧化作用机制。
致谢:桂林医学院 2009 级药学本科学生莫慧俊
和韦桂兰同学参与了本文的部分研究工作，在此表
示感谢!
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櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵櫵
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