全 文 ：收稿日期:2010-03-01; 修订日期:2010-06-16
基金项目:湖北省卫生厅青年人才基金项目(No． QJX2008 － 60)
作者简介:李华荣(1972-) ，男(汉族) ，湖北松滋人，现任华中科技大学同
济医学院附属荆州医院副主任药师，硕士学位，主要从事药物临床试验研
究工作．
资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定
李华荣，高逢喜，任贻军
(华中科技大学同济医学院附属荆州医院，湖北 荆州 434020)
摘要:目的 建立以 RP － HPLC法测定资木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法 色谱柱:Agilent Eclipse XDB － C18
(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相:甲醇 － 0． 2%磷酸水溶液(90∶ 10) ，流速 0． 57 ml·min －1，检测波长 210 nm。结果 齐
墩果酸和熊果酸进样浓度分别在 6． 4 ～ 256． 0 μg·ml －1和 6． 32 ～ 252． 8 μg·ml －1范围内具有良好的线型关系，r 分别为
0． 999 6和 0． 999 9，平均加样回收率分别为 97． 4%和 96． 7%，RSD 分别为 2． 6%和 2． 2%(n = 6)。结论 该方法简便、准
确、重现性好，可用于控制资木瓜的质量。
关键词:高效液相色谱法; 资木瓜; 齐墩果酸; 熊果酸
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 063
中图分类号:R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)10-2563-01
木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠 Chaenomeles speciosa (Sweet)
Nakai的干燥近成熟果实，中医认为具有平肝舒筋，和胃化湿等功
效，用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，吐泻转筋，脚气水肿［1］。
资木瓜因主产于湖北长阳资丘而得名，与浙江淳木瓜、安徽宣城
木瓜齐名，同为皱皮木瓜三大道地药材，是鄂西南特有的一种道
地中药材，主要分布在恩施土家族苗族自治州以及宜昌市的长
阳、五峰县一带。木瓜中含有的齐墩果酸和熊果酸具有抗癌、提
高免疫力、降血脂和降血糖等功效［2］。本文建立了 RP － HPLC
法测定资木瓜药材中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，为资木瓜的
质量控制提供依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Agilent1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦) ，含在线
脱气机、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器、化学工作站;
CPA124S型电子天平(德国赛多利斯) ;CQ － 80 型超声波清洗
机。
1． 2 试药 齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
110709 － 200505) ;熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批
号:110742 － 200516) ;甲醇为色谱纯，注射用水(四川科伦药业股
份有限公司，批号:H090519) ，其余试剂均为分析纯;资木瓜分别
采自湖北省宣恩县长潭河侗族乡易家坪村和湖北省长阳县资丘
镇水帘村。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适应性试验 色谱柱为 Agilent Eclipse
XDB － C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇 － 0． 2%磷酸
水溶液(90∶ 10) ;柱温 27℃;检测波长 210 nm;流速 0． 57 ml·
min －1;进样量 10 μl。在此色谱条件下，齐墩果酸、熊果酸和前后
色谱峰可达到基线分离，齐墩果酸和熊果酸的分离度大于 1． 5。
见图 1。
2． 2 对照品贮备液的制备 分别精密称取齐墩果酸对照品 16． 0
mg和熊果酸对照品 15． 8 mg，置 25 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀
释至刻度，作为对照品贮备液(其浓度分别为 640． 0μg·ml －1和
632． 0 μg·ml －1)。
2． 3 供试品溶液的制备 取资木瓜粉末(过 120 目筛)约 1． 0 g，
精密称定，置 50 ml量瓶中，再加入甲醇 40 ml 超声提取 90 min，
放冷，再加入甲醇至刻度，摇匀，用 0． 45 μm 微孔滤膜过滤，取续
滤液作为供试品溶液。
2． 4 线性关系考察 精密吸取对照品贮备液 0． 10，0． 20，0． 50，
1． 00，2． 00 和 4． 00 ml，分别置于 10 ml 量瓶中，加流动相稀释至
刻度，摇匀，得到不同浓度的对照品溶液。精密吸取上述 6 种溶
液各 10 μl，按上述色谱条件，分别进样，测定。以对照品浓度 X
(μg·ml －1)为横坐标，峰面积 Y为纵坐标进行线性回归，得回归
方程。齐墩果酸:Y = 37． 52X － 19． 75(r = 0． 999 6) ，线性范围 6． 4
～ 256． 0 μg·ml －1;熊果酸:Y = 12． 56X － 25． 02(r = 0． 999 9) ，线
性范围 6． 32 ～ 252． 8 μg·ml －1。结果表明，齐墩果酸和熊果酸分
别在相应进样量范围内具有良好的线性关系。
a －对照品 b －供试品 1．齐墩果酸 2．熊果酸
图 1 高效液相色谱图
2． 5 重复性实验 取同一批样品(样品 4)6 份，按“2． 3”项下制
备并进样测定。结果表明，齐墩果酸和熊果酸含量的 RSD 分别
为1． 74%和 1． 26%，表明本方法重复性好。
2． 6 稳定性实验 取“2． 5”项下同批样品在 4，8，12 h分别进样
测定，结果，12 h内齐墩果酸和熊果酸色谱峰面积无明显变化，
RSD分别为 0． 66%和 0． 54%，表明被测样品在 12 h 内稳定性良
好。
2． 7 精密度实验 精密吸取对照品溶液(齐墩果酸和熊果酸浓
度分别为 64． 0 和 63． 2 μg·ml －1) ，在上述色谱条件下连续进样
6 次。结果，齐墩果酸和熊果酸色谱峰面积的 RSD分别为0． 32%
和 0． 47%，表明本方法精密度良好。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL ． 21 NO． 10 时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期
2． 8 加样回收率实验 取已知含量的样品(样品 4，齐墩果酸和
熊果酸含量分别为:5． 21 mg·g －1和 3． 16 mg·g －1)适量，约 0． 5
g，共 6 份，精密称定，分别精密加入对照品贮备液 1． 0，2． 0 和
4． 0 ml，按上述方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。结
果表 1。
2． 9 样品含量测定 分别取不同批次资木瓜样品按供试品溶液
制备法制备并进行进样、测定。结果见表 2。
表 1 加样回收率实验结果
样品种类
取样量
m /g
样品含量
m /mg
加入量
m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
齐墩果酸 0． 501 2 2． 61 0． 64 3． 22 95． 12
0． 499 8 2． 60 0． 64 3． 21 94． 69
0． 502 3 2． 62 1． 28 3． 91 101． 02
0． 505 4 2． 63 1． 28 3． 88 97． 41 97． 4 2． 6
0． 498 3 2． 60 2． 56 5． 16 100． 15
0． 503 8 2． 62 2． 56 5． 09 96． 30
熊果酸 0． 501 2 1． 58 0． 63 2． 18 94． 64
0． 499 8 1． 58 0． 63 2． 21 100． 10
0． 502 3 1． 59 1． 26 2． 81 97． 04 96． 7 2． 2
0． 505 4 1． 60 1． 26 2． 79 94． 68
0． 498 3 1． 57 2． 53 3． 99 95． 47
0． 503 8 1． 59 2． 53 4． 08 98． 34
n =6
3 讨论
熊果酸和齐墩果酸为同分异构的五环三萜酸，由于结构相似
导致其性质极为相近，在进行液相分离时其保留时间十分接近而
很难分离。考虑到流动相比例、柱温及流动相流速对二者分离影
响较大，经多次试验，发现选择甲醇 － 0． 2%磷酸水溶液(90 ∶
10)为流动相，柱温 27℃，流速 0． 57 ml·min －1时齐墩果酸和熊
果酸能较好分离，分离度大于 1． 5。
表 2 样品含量测定结果
产地
齐墩果酸
含量
C /mg·g － 1
RSD
(%)
熊果酸
含量
C /mg·g － 1
RSD
(%)
长阳县资丘镇水帘村 4 组 9． 38 2． 85 1． 69 1． 57
长阳县资丘镇水帘村 3 组 8． 74 2． 13 2． 65 1． 88
宣恩县长潭河侗族
乡易家坪村 1 组
4． 11 1． 87 4． 22 2． 14
宣恩县长潭河侗族
乡易家坪村 4 组
5． 21 2． 04 3． 16 1． 59
n =3
由表 2 可知，4 批药材中均含有齐墩果酸和熊果酸，但不同
产地资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量差别较大，是否与资木瓜
炮制方法或采收时间不一致有关还有待进一步研究。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典，Ⅰ部［S］． 北京:化学工业出版社，
2005:41．
［2］ Liu J． Pharmacology of oleanolic acid and ursolic acid［J］． J Ethnophar-
macol，1995，49(2) :57．
收稿日期:2009-11-09; 修订日期:2010-06-06
基金项目:黑龙江省科技攻关资助项目(No． GC08C322)
作者简介:付 克(1955-) ，男(汉族) ，吉林榆树人，现任黑龙江中医药大
学中医药研究院副研究员，硕士研究生导师，学士学位，主要从事中药及
复方质量标准和新药研究工作．
柴芩清肝汤高效液相色谱指纹图谱研究
付 克，张 丽，闫广利
(黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江 哈尔滨 150040)
摘要:目的 对柴芩清肝汤的 HPLC指纹图谱进行研究，建立其质量评价体系。方法 采用 HPLC 梯度洗脱技术进行分
离。色谱柱为 Diamonsil C18(5 μm，250 mm ×4． 6 mm) ，保护柱为 Diamonsil C18，流动相为乙腈 － 0． 1%磷酸水溶液梯度洗
脱，检测波长 230 nm，柱温 25℃。结果 确定了 19 个共有峰，并对各共有峰进行了初步归属。10 批样品指纹图谱的相似
度均在 0． 90 以上。结论 该方法准确可控，可用于柴芩清肝汤的质量控制。
关键词:柴芩清肝汤; 高效液相色谱; 指纹图谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2010． 10． 064
中图分类号:R284． 1;R283 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)10-2564-02
柴芩清肝汤的原方是由柴胡、黄芩、白芍、甘草等制成的中药
制剂，经多年的临床实践证明，其对慢性肝炎等疾病有较好的疗
效。该方剂是集中医理论、现代研究和临床经验为一体的良好组
合，具有疏肝解郁、消热解毒之功效。由于中药复方成分复杂，仅
对某个成分进行定性、定量分析并不能有效控制其质量，中药指
纹图谱作为目前公认的中药和天然药物质量控制的有效手段，其
研究着眼于对象的宏观特征及内在规律，具有整体性和模糊性等
基本特点，符合中药药效模式［1，2］。本实验运用 HPLC 法对柴芩
清肝汤进行研究，确立其色谱条件，建立指纹图谱共有模式，从而
从整体上控制柴芩清肝汤的质量。
1 仪器与试药
Waters600 － 2487 型高效液相色谱仪 Empower 色谱工作站
(美国．沃特斯公司) ;AG 135 型电子天平(瑞士 METTLER － TO-
LEDO公司) ;KQ － 300VDE型双频数控超声泼清洗器(昆山市超
声仪器有限公司)。
柴胡、黄芩等药材均购于哈尔滨市宝丰大药堂，经检验符合
《中国药典》规定。
乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18(5 μm，250 mm × 4． 6
mm) ，保护柱为 Diamonsil C18;流动相为乙腈(A)－ 0． 1%磷酸水
溶液(B) ，见表 1;流速 1． 0 ml /min;柱温 25℃;检测波长 230 nm;
进样量 10 μl。
2． 2 对照品溶液的制备 取黄芩苷、芍药苷和甘草苷各 5 mg，精
密称定，分别置 5 ml容量瓶中，加甲醇适量使溶解，定容，即得。
2． 3 供试品溶液的制备 取柴胡、黄芩、白芍、甘草药材，制成柴
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时珍国医国药 2010 年第 21 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2010 VOL． 21 NO． 10