全 文 ：糯稻根颗粒剂制备及其游离氨基酸的鉴别与含量测定
唐爱莲 , 罗朝晖＊ , 唐桂兴 , 刘笑甫 , 欧贤红 (桂林医学院药学院 , 广西桂林 541004)
摘要:目的 制备糯稻根颗粒剂 , 并建立其质量标准。方法 将糯稻根水煎液加 ZTC 1+1 天然澄清剂处理后 , 浓
缩至稠膏 , 并制成颗粒剂。用 T LC 对游离氨基酸定性 , 用氨基酸分析仪测定其总含量。结果 糯稻根颗粒剂中含
有 15 种游离氨基酸 , 且总含量≥2.23 mg · g-1 。连续 3 个批号产品的各项指标均符合中国药典 2005 版一部附录颗
粒剂项下的规定。结论 糯稻根颗粒剂制备工艺合理 , 所建立的方法简便 、 准确 、 可靠。该制剂也是首次研制。
关键词:糯稻根颗粒剂;氨基酸;质量标准
中图分类号:R944.2 , R927.2 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2008)04-0398-03
Preparation and quality standard of Nuodaogen granules
TANG Ai-lian , LUO Zhao-hui＊;TANG Gui-x ing;LIU Xiao-fu;OU Xian-hong (Pharmacy School of Guilin Med-
ical School , Guilin Guang x i 541004)
Abstract:Objective To develop the pr epa ration and quality standa rd fo r nuodaogen g ranules.Methods Decoctions
were concentra ted to thick paste af te r being pr ocessed by ZTC 1+1 natural precipitator , and were used to make gr an-
ule s.Then thin- laye r chromato g raph w as used to identify the amino acid , and amino acid analy ze r w as used to deter-
mine the content of amino acid.Results F ifteen free amino acids we re de tected , and the to tal free amino acid w as no
less than 2.23 mg · g -1 .The indexes of 3 consecutiv e products acco rded w ith the China Pharmacopoeia (CHP.).
2005.Conclusion The preparation technique of nuodaogen g ranules is ra tional , and the method is convenient and accu-
rate.It is suitable fo r the quality standard o f the prepara tion.
Key words:nuodaogen;amino acid;quality standard
糯稻根为禾本科植物糯稻 (ory za.L.Var.Glictiono sa
mastum)的地下部分 , 全国都有种植。 糯稻根是待糯稻收
割之后 , 挖取其地下部分洗净晒干而得。具有化痰 、 滋阴养
胃 、 平肝 、 祛风湿 、 除寒安胎 、 退虚热 、 止汗等多种功
效[ 1 ,2] 。临床用于治疗热病 、 伤津 、 阴虚发热 、 自汗 、 盗汗 、
肝炎 、 消渴 、 久泄 、 脾虚腹泻 、 乳糜尿 、 驱马来丝虫等
症[ 1] 。谭文界等人从糯稻杆中成功的分离出 12 种氨基酸[ 3] ;
糯稻杆治疗急性黄疸肝炎 , 其有效率达 83.6%, 改善患者
的食欲尤为显著 , 且无毒性[ 3] ;其含有的氨基酸对改善患者
的蛋白质营养状况 , 促进肝脏的修补和恢复具有重要意
义[ 4] 。自 2002 年得到广西区教育厅资助之后 , 我们对糯稻
根的成分 、 制备工艺 、 药理都进行了深入的研究[ 5] 。我们采
用离子交换柱层析的方法 , 已从糯稻根中提取分离得到了
15 种氨基酸 、 黄酮 、 果糖等 , 并成功地研制成颗粒剂。
1 仪器与材料
835 氨基酸测定仪 (日本日立)。糯稻根 (采自桂林市
郊);糯稻根颗粒剂 (自制 , 批号:20070625);杞苓枣氨基
酸片 (南昌健民营养补品厂生产 , 批号:20070501);氨基
酸营养液 (广西南宁全通保健品有限公司生产 , 批号:
080102);15 种氨基酸对照品 (天门冬氨酸 、 苏氨酸 、 丝氨
酸 、 谷氨酸 、 脯氨酸 、 甘氨酸 、 丙氨酸 、 缬氨酸 、 蛋氨酸 、
异亮氨酸 、 亮氨酸 、 酪氨酸 、 苯丙氨酸 、 赖氨酸 、 精氨酸 ,
批号:624-200104 , 均由中国药品生物制品检定所提供);
薄层层析用硅胶 G (青岛海洋化工厂);可溶性淀粉 (广东
台山化工厂);蔗糖 (汕头市光华化学厂);ZTC 1+1 天然
澄清剂 (北京正天成清技术有限公司);茚三酮 (上海化学
试剂厂生产);硅胶 G 板 (自制);乙醇 、 正丁醇 、 甲酸 、
丙酮 、 盐酸等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 糯稻根颗粒剂的制备
2.1.1 浸膏的提取 取糯稻根 10 kg , 洗尽泥沙 , 置多功能提
取器中 , 加水 80 000 mL , 加热至膨胀后 , 煎煮 3 次, 1 h·
次-1 , 合并滤液 , 浓缩至每 mL 相当于 1 g 生药量时 , 温度
80 ℃加入 ZTC 1+1 沉淀剂, 静置 24 h , 过滤, 滤液浓缩至相
对密度为 1.31 ～ 1.35 (25 ℃)的浸膏 , 备用。
2.1.2 颗粒剂的制备 取糯稻根提取物稠膏适量 、 可溶性
淀粉及蔗糖粉以 1∶1∶0.5 的比例混匀 , 研成粉末 , 过 50
目筛 , 加入 95%乙醇制成软材 , 过 14 目筛制粒 , 于 60 ℃
基金项目:广西教育厅资助项目 , [ 2002] 316和 200710MS137。
作者简介:唐爱莲 , 女 , 副教授 , 主要从事教学及天然药物的研究与开发 , Tel:13977327933 , E-mail:aa1029@163.com ＊通讯作
者:罗朝晖 , 男 , 高级实验师 , 主要从事仪器分析及药物分析研究 , Tel:13517532025 , (0773) 5890248 , E-mai l:lzhaoh@163.com
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C ent ral S outh Ph arm acy.August 2008 , Vol.6 No.4 中南药学 2008年 8月第 6卷第 4期
干燥 4 h , 取出 , 14 目筛 , 整粒。整粒后颗粒于 60 ℃干燥 2
h。即得棕褐色颗粒 , 气香 , 味甜。
2.2 薄层定性鉴别
2.2.1 对照品溶液的制备 将门冬氨酸 、 苏氨酸 、 丝氨酸 、
谷氨酸 、 脯氨酸 、 甘氨酸 、 丙氨酸 、 缬氨酸 、 蛋氨酸 、 异亮
氨酸 、 亮氨酸 、 酪氨酸 、 苯丙氨酸 、 赖氨酸 、 精氨酸 15 种
氨基酸标准品配制成 1 mg·mL -1的标准溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取本品颗粒剂 10 g , 加
纯水 40 mL , 加热溶解 , 过滤 , 取滤液置水浴上浓缩至 2
mL , 作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按 “ 2.1.2” 项的制备方
法 , 制成缺糯稻根的阴性样品 , 然后按 “ 2.2.2” 方法制备
阴性对照品溶液。
2.2.4 对照药品溶液①的制备 取杞苓枣氨基酸 1 片 , 刮
去糖衣 , 加 20 mL 水 , 温浸溶解 , 滤液浓缩至 2 mL , 作为
对照药品溶液①。
2.2.5 对照药品溶液②的制备 取氨基酸营养液 20 mL ,
浓缩至 2 m L , 作为对照药品溶液②。
2.2.6 对照混合溶液的制备 取天门冬氨酸 、 苏氨酸 、 丝
氨酸 、 谷氨酸 、 脯氨酸等 15 种氨基酸对照品各约 5 mg , 定
容到 5 m L容量瓶中备用。
2.2.7 氨基酸的薄层鉴别试验 按照中国药典 2005 年版[ 6]
一部附录 VIB薄层色谱法试验 , 用微量定量毛细管吸取上
述标准品溶液 , 供试品溶液 , 对照药品溶液①、 ②, 阴性对
照品溶液各 1 μL , 分别点于 20 cm×20 cm 的同一硅胶 G 薄
层板上 , 以丁酮-吡啶-冰醋酸-水 (70∶15∶2∶15)展开 ,
展距 18 cm , 取出烘干 , 用 0.2%的茚三酮乙醇溶液显色 ,
于红外灯下烘烤 15 min , 至斑点显色清晰 , 供试品 , 对照药
品溶液①、 ②与各标准对照品在相应位置有明显的斑点;而
阴性对照品无对应的特征斑点 , 其结果如图 1 及表 1。
图 1 薄层色谱图
Fig 1 Ch romatogram of TCL
1.天门冬氨酸 (aspartic acid);2.丙氨酸 (alanin e);3.亮氨酸
(l eucine);4.谷氨酸 (glu tamic acid);5.缬氨酸 (valine);6.苏
氨酸 (th reonine);7.丝氨酸 (serine);8.甘氨酸 (gly cine);9.
脯氨酸 (p roline);10.精氨酸 (arginin e);11.酪氨酸 (t yro-
sine);12.异亮氨酸 (i soleucine);13.赖氨酸 (lysine);14.苯
丙氨酸 (ph enylalanine);15.蛋氨酸 (methionine);16.混合对照
品 (cont rol art icle);17.糯稻根颗粒剂 (nuodaogen granule);18.
杞苓枣氨基酸片 (amino acids tablet);19.氨基酸营养液 (amino
acid s nu t ri ti ve m edium);20.阴性对照 (negative cont rol art icle)
表 1 糯稻根颗粒剂中各氨基酸的 TLC Rf 值
Tab 1 TLCRf of every amino acid in Nuodaogen
名称 (name) Rf 名称 (name) Rf 名称 (n ame) Rf
门冬氨酸 Asp 0.08 甘氨酸 Gly 0.14 亮氨酸 Leu 0.42
苏氨酸 T hr 0.22 丙氨酸 A la 0.25 酪氨酸 Ty r 0.40
丝氨酸 Ser 0.17 缬氨酸 V la 0.28 苯丙氨酸 Phe 0.33
谷氨酸 Glu 0.11 蛋氨酸 M et 0.1 赖氨酸 Lys 0.03
脯氨酸 Pro 0.18 异亮氨酸 Lle 0.36 精氨酸 Arg 0.06
TLC 结果显示:在单剂量相同的情况下 , 糯稻根颗粒
剂中氨基酸的种类比其他 2个保健品氨基酸多。
2.3 颗粒剂中游离氨基酸总含量的测定
精密称取糯稻根颗粒剂样品 (批号:20070625)10 g ,
加纯水 40 m L加热溶解 , 过滤 , 滤液加 ZTC 1+1 澄清剂去
除淀粉 , 过滤 , 滤液浓缩至 10 mL , 备用。取上述样品备用
液 1 mL , 置 25 mL 量瓶中 , 加纯水稀释至刻度。取样 , 用
氨基酸分析仪 , 按照 GB/ T5009.124-2003 的方法测定 , 其
结果见表 2。
表 2 游离氨基酸测定结果 (mg/ 100 g)
Tab 2 Determination free amino acid (mg/ 100 g)
名称
(name)
含量
(conten t)
名称
(name)
含量
(con tent)
名称
(n ame)
含量
(conten t)
门冬氨酸 Asp 39.3 甘氨酸 Gly 13.5 亮氨酸 Leu 25.1
苏氨酸 T hr 14.3 丙氨酸 A la 25.2 酪氨酸 Ty r 10.3
丝氨酸 Ser 14.2 缬氨酸 V la 17.1 苯丙氨酸 Phe 7.09
谷氨酸 Glu 17.4 蛋氨酸 M et 1.52 赖氨酸 Lys 7.18
脯氨酸 Pro 11.6 异亮氨酸 Lle 8.79 精氨酸 Arg 10.9
糯稻根颗粒剂每小包为 10 g , 含氨基酸的平均总量为
22.5 mg 。
采用以上方法对氨基酸片和氨基酸营养液也进行了游离
氨基酸的测定 , 其中杞苓枣氨基酸片中每片的游离氨基酸平
均含量为 20.3 mg , 氨基酸营养液中每 10 mL 中的游离氨基
酸平均含量为 18.6 mg 。
3 讨论
3.1 制备工艺的确定
在糯稻根颗粒剂的制备过程中 , 选择了乙醇沉淀法 、 柱
层析法 、 ZTC 1+1 沉淀法 3 种方法除提取物中的杂质 , 试
验证明 , 乙醇法沉淀制得的颗粒剂色泽较深 , 氨基酸的总含
量较低;柱层析法去杂质效果好 , 氨基酸的含量高 , 但操作
麻烦 , 成本高;ZTC 1+1 沉淀法 , 沉淀剂与母液比例以
4∶100 (v/ v)的量加入 , 能使杂质沉淀较完全。 代替醇沉
工艺 , 成本低 , 操作简单方便。节省费用 20%, 因此 , 制
备糯稻根颗粒剂采用 ZTC 1+1沉淀剂去杂质。
3.2 展开剂的选择
采用硅胶薄层层析法对糯稻根提取物及颗粒剂中氨基酸
种类的定性检查 , 采用合适的展开剂至关重要。实验发现 ,
用甲醇 、 乙醇 、 丙酮作展开剂 , 斑点易扩散 , 用丁酮-吡啶-
冰醋酸-水 (70∶15∶2∶15)为展开剂 , 对各种氨基酸的分
离较为理想 , 故本品定性实验选择其为展开剂。
3.3 应用前景
本实验通过与市场同类产品杞苓枣氨基酸片 、 氨基酸营
养液作了 TLC 比较及含量测定 , 发现糯稻根颗粒剂氨基酸
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中南药学 2008年 8月第 6卷第 4期 Cent ral S outh Ph armacy.Augu st 2008 , Vol.6 No.4
的含量较高 , 种类较多。可作为氨基酸的天然资源。
参考文献
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(收稿日期:2008-04-03;修回日期:2008-05-19)
UPLC-MS-MS法测定健康人血浆中阿托伐他汀
浓度及药物代谢动力学研究
胡晓玲1 , 2 , 李焕德1＊ (1.中南大学湘雅二医院临床药学研究室 , 长沙 410011;2.长治医学院附属和平医院药剂科, 山西
长治 046000)
摘要:目的 建立超高效液相色谱-串联质谱法测定健康人血浆中阿托伐他汀浓度 , 用于药动学研究。 方法 采用
Acquity UPLCT M BEH C18色谱柱 (2.1 mm×50 mm , 1.7 μm), 柱温:40 ℃, 以乙腈- 0.05%甲酸 (60∶40 , v/v)
为流动相 , 流速:0.25 m L · min -1 ;质谱采用电喷雾电离源正源 (ESI+), 选择离子监测 (SIR), m/ z 440.0
(ATV), m/ z 129.6 (格列齐特)血浆样品经磷酸酸化后 , 采用叔丁基甲醚提取 , 氮气挥干 , 内标法定量 , 并用于
24 名健康男性志愿者单剂量口服 10 mg 阿托伐他汀钙片的药动学研究。结果 阿托伐他汀浓度在 0.385 ～ 15.400
ng ·mL-1线性关系良好 , r2 为 0.997 4。日内 、 日间 RSD 符合方法学要求 , 单次服用 10 mg 阿托伐他汀钙片后药
动学参数 AUC0 ～ 48 、 A UC0～ ∞、 Cmax 、 tmax 、 t1/2分别为 (49.6±40.6)ng· h·m L-1 、 (54.7±42.0)ng · h·mL-1 、
(5.8 ±3.4)ng·mL -1 、 (1.4±0.7) h、 (14.8±6.5)h。结论 该方法稳定 、 灵敏度高 、 专属性强 、 操作简单 ,
适用于阿托伐他汀血药浓度测定及药动学研究。
关键词:超高效液相色谱-串联质谱;阿托伐他汀;药动学
中图分类号:R917 , R969.1 , R945 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2008)04-0400-04
Determination of atorvastatin in human plasma by UPLC-MS-MS
and pharmacokinetics in healthy subjects
HU Xiao-ling1 , 2 , LI H uan-de1＊ (1.Pharmacy Department , Second X iangya Hospital , Central South University ,
Changsha 410011;2.Pharmaceutical Preparation Section , Peace Hospital Attached To Changz hi Medical Col lege ,
Changz hi Shan xi 046000)
Abstract:Objective To establish an U ltr a Perfo rmance Liquid Chroma to g raphy -tandem MS method for the de te rmi-
nation o f ator vastatin in human plasma.Methods UPLC separ ation was perfo rmed on Acquity UPLCTM BEH C18 co l-
umn (2.1 mm×50 mm , 1.7μm), and the column temperature was 40 ℃.The mobile phase consisted o f 60% aceto-
nitrile , and 40% formic acid (0.05%).The compound was ionized in the electro spray ioniza tion (ESI+) ion source
of the mass spect rometer and detected in the se lected ion recording (SIR)model.H uman plasma samples we re ex tr ac-
ted with chlo rfo rm:methy l t-butyl ethe r after pho sphoric acidification.The internal standard method was used to
quantify ato rva sta tin.The assay w as valida ted and applied to pharmacokinetic study of ator vastatin in 24 healthy vo l-
unteers following a single o ral do se o f 10 mg a to rv astatin ca lcium tablets.Results The linear range w as 0.385 ～
15.400 ng mL-1 with co rre lation coefficient of 0.997 4.The RSD of the intr a-day and inter-day validation w as less
作者简介:胡晓玲 , 女 , 硕士研究生 , 主管药师 , 主要从事临床药学研究 , T el:13453558913 , E-mai l :xiaolin ghu2006@126.com
＊通讯作者:李焕德 , 男 , 教授 , 博士生导师 , 主要从事体内药 (毒)物分析与临床药物代谢研究 , T el (Fax):(0731) 4436720。
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