全 文 ：血祛淤和利胆退黄等临床疗效 ,并且这些中药中富含各种生物
碱 、有机酸等有效成分及广谱抗菌抗病毒成分[ 5] 。本实验中使
用两种不同药物浓度的中药水提物抑制耐药性大肠杆菌。结
果表明 , 6 味中草药在浓度 1.0g/ ml时对耐药性大肠杆菌均有
一定的抑菌效果 , 但是抑菌效果有一定差异。夏枯草 、黄芩在
低浓度时抑菌效果也是很明显 ,而其他 4 味药物在高浓度时有
效 ,低浓度时无效。 显然 , 夏枯草和黄芩对耐药性大肠杆菌抑
菌效果比较明显 ,这对治疗耐药性大肠杆菌引起的疾病起到了
很好的指导作用。但是 , 夏枯草和黄芩中哪些成分起作用 , 如
何发生作用 ,如何快速提取有效成分是值得我们继续研究的内
容。
中草药的抑菌实验是目前研究的主要课题之一。如何筛
选效果良好的抑菌药物 ,以及提取中草药的有效成分并确定其
分子结构 ,探讨中草药作用机制 , 对研究中草药 ,帮助阐述中草
药的治疗理论有重要的意义。我们目前的研究只是药物的筛
选以及方法的探索 , 希望同行能给宝贵的意见 , 共同加快中草
药的研究进程 , 解决细菌耐药性难题。
参考文献:
[ 1] 　恒新 , 马颖 ,马瑞 ,等.开封市鼓楼区健康人群大肠杆菌耐
药性调查[ J] .中华适宜诊疗技术杂志 , 2005 , 23(3):11-
12.
[ 2] 　徐叔云 ,卞如濂 , 陈修.药理学实验方法[ M] .北京:人民卫
生出版社 , 1982.
[ 3] 　陈奇.中药药理研究方法学[ M ] .北京:人民卫生出版社 ,
1988:69-71.
[ 4] 　张卓然 , 忘世仪 , 田延东 , 等.医学微生物实验学[ M] .北
京:科学出版社 , 2003:26-27.
[ 5] 　李家邦 ,高鹏翔 , 刘义海 ,等.中医学[ M] .7 版.北京:人民
卫生出版社 , 2008:131-141.
收稿日期:2009-03-03
木菠萝水提物中多糖含量的测定①
邹勇芳1 ,苏玉凤1 ,李清容1 ,黄锁义2 ,潘乔丹2
(1.右江民族医学院 2004级临床医学本科 8班 ,广西 百色 533000;
2.右江民族医学院药学系化学教研室 ,广西 百色 533000)
摘　要:目的　用水提醇沉法从木菠萝粉末中提取木菠萝多糖。方法　Sevage法脱蛋白 , 用硫酸—苯酚法测定木菠萝
多糖含量。测定波长为 495nm ,正交试验设计选择得到木菠萝多糖的最佳显色条件。结果　在 10 ～ 60μg/ml 范围内吸
光度与被测物含量呈良好的线性关系 , r =0.9999。测得多糖含量为 5.53%,稳定性 RSD=2.26%,回收率为102.16%。
结论　该方法简便 、快速 、准确 、灵敏度高。
关键词:木菠萝;多糖类;苯酚—硫酸法
中图分类号:R624.42+1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-5817(2009)03-0369-02
doi:10.3969/ j.issn.1001-5817.2009.03.013
　　木菠萝又称“菠萝蜜” 、“树菠萝”(Artocapus heterophyllus.
Lam), 属桑科乔木树种 ,原产于印度和马来西亚 ,有“ 热带水果
之王”美称[ 1 , 2] 。木菠萝果肉爽脆 ,蜜甜 , 含有丰富的糖 、蛋白质
和微量元素 ,成熟果芳香味浓 , 香气独特 , 肉色橙黄鲜艳 , 营养
价值很高[ 1] , 研究表明木菠萝多糖在医药 、食品方面均有很好
的应用前景和开发价值[ 1] 。木菠萝叶合剂 , 具有清热解毒 、防
腐止痒 、杀菌收敛的作用 , 对山羊传染性脓疱口膜炎 , 对马 、牛 、
猪 、羊 、犬的湿疹 ,都有很明显治疗效果[ 3] 。而有关木菠萝多糖
方面的研究较少 , 目前测定木菠萝多糖含量的方法未见报道 ,
鉴于木菠萝多糖所具有的增强免疫力 、抗肿瘤 、抗病毒以及抗
衰老等特殊生物活性 ,对木菠萝这一名贵植物的多糖类物质有
待于进一步开发与利用。因此 , 笔者采取苯酚—硫酸法对木菠
萝多糖含量进行测定 , 为木菠萝新药和食品的开发奠定基础 ,
以期为进一步开发利用木菠萝多糖提供科学依据。
1　仪器与试剂
UV-755B 型紫外可见分光光度计:上海分析仪器总厂;电
子天平:上海精科天平;电热恒温鼓风干燥箱:上海精宏实验设
备有限公司。
木菠萝为广西百色市右江区木菠萝湿包类型的干燥成熟
果实;葡萄糖对照品:上海化学试剂有限公司;95%乙醇 、浓硫
酸 、苯酚 、三氯甲烷 、正丁醇 、石油醚 、丙酮 、乙醚等其他试剂均
为分析纯。
2　实验方法
2.1　木菠萝多糖提取工艺[ 4] 　木菠萝去核 、取湿包于 60℃下
真空干燥 , 称取干燥的木菠萝约 12.0g , 粉碎后 , 用热水浸提 , 抽
滤 , 合并滤液并进行减压浓缩。在浓缩液中加入 2 倍体积的石
油醚脱脂 2 次 , 滤出溶剂 , 残渣风干 , 以 80%乙醇回流 2 次 , 每
次 3h。回收乙醇 , 将浓缩液置于 250ml三角瓶中 ,加入浓缩液 5
倍体积的氯仿—正丁醇[ V(氯仿)∶V(正丁醇)=4∶1]混合液 , 振
摇 10min ,在 4 000r/ min 离心 10min , 分离除去沉淀 , 以上步骤
重复 5 次以除去游离蛋白质。 上清液以 5 倍体积 95%乙醇沉
淀 2 次 ,抽滤 ,固形物依次以丙酮 、乙醚 、无水乙醇洗涤 , 得木菠
萝粗多糖置真空干燥 , 备用。
2.2　苯酚溶液的配制　称取苯酚 100g ,加铝片 0.1g 和碳酸氢
钠 0.05g ,常压蒸馏 , 收集 182℃馏分 , 精密称取该馏分 15.00g ,
置于 250ml棕色容量瓶中 , 加蒸馏水溶解并稀释至刻度(6%苯
酚溶液),摇匀 , 放入冰箱中备用。
2.3　葡萄糖标准溶液的配制　精密称取 105℃烘干至恒质量
的葡萄糖 100mg , 加蒸馏水溶解 , 定容至 100ml , 得到浓度为
1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
2.4　最大吸收波长的选择[ 5] 　精密量取 1mg/ml葡萄糖标准
溶液 0.2ml置于 10ml具塞试管中 , 加入 6%苯酚1.4ml , 迅速加
入浓硫酸 7.0ml ,混匀 , 放置 5min , 置沸水浴中加热 15min ,取出
后置冷水中冷却 15min。并用蒸馏水配成 20ml溶液 , 以蒸馏水
为空白对照 , 于 380～ 600nm 波长范围内测定吸收度 , 测得葡萄
糖的最大吸收波长为 495nm。
2.5　正交法选择显色条件[ 5] 　以显色剂 6%苯酚用量 、硫酸用
—369—
2009年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第 3期
① 本文荣获广西高校第九届化学化工类论文及设计竞赛奖。
量及反应时间为参考因素 , 每个因素各取 3 个水平 , 按 L9(33)
正交设计法确定最佳的显色条件 ,因素与水平见表 1。
表 1　L 9(33)正交实验因素水平
水平 因素
6%苯酚(ml)A 浓硫酸(ml)B 反应时间(min)C
1 1.0 5.0 10
2 1.2 6.0 15
3 1.4 7.0 20
2.6　标准曲线的绘制[ 5] 　精密吸取 1mg/ ml标准葡萄糖溶液
0.2ml 、0.4ml 、0.6ml 、0.8ml 、1.0ml 、1.2ml , 在最大吸收波长下
用 2.4所述方法测定各组溶液的吸光度 A , 以葡萄糖浓度为横
坐标 、吸光度为纵坐标绘制标准曲线 , 并进行回归处理。
2.7　换算因子的测定　精确称取干燥恒重的木菠萝多糖
10.0mg ,定容于 50ml容量瓶 ,精密吸取一定量的提取液稀释一
定倍数后按 2.4所述方法精密吸取此溶液置于 20ml具塞试管
中 ,测定吸光度 , 并按下式计算换算因子。
换算因子 f=m/ C
式中:m 为称取多糖的质量(mg), C 为多糖液中葡萄糖的
含量(mg/ ml)。
2.8　样品中木菠萝多糖含量的测定
2.8.1　样品溶液的制备　精密称取干燥的木菠萝粉末 6.00g ,
加水 80 ml , 800C 水浴提取 1.5h ,过滤 , 合并两次滤液 ,浓缩 , 冷
冻干燥 ,得棕红色木菠萝水提物样品固型物 5.15g 。加体积分
数 80%乙醇 50ml , 于 80℃回流提取 0.5h ,趁热过滤 , 重复 3 次 ,
得滤渣 , 加丙酮—石油醚(体积比 1∶1)混合液 50ml脱色 0.5h ,
过滤 , 滤渣烘干 ,得灰白色样品粉末 0.3320g , 精确称取灰白粉
末 20.0mg ,加水定容至 50ml ,得样品溶液。
2.8.2　样品溶液中木菠萝多糖的含量测定　精密吸取一定量
的 2.8.1 所得的样品溶液直于 20ml具塞试管中 ,按照 2.4 的方
法测定吸光度 ,由回归方程计算供试液中葡萄糖含量 , 按下式
计算样品中多糖的含量。
多糖含量=Cf/m
式中:C 为样品溶液中葡萄糖的含量(mg/ml), f 为换算因
子 ,m 为样品质量(mg)。
2.9　稳定性实验　取木菠萝样品溶液适量 , 按 2.4 所述方法
分别于 0 、30min 、60min、90min 、120min 、150min 、180min 测定吸
光度。
2.10　精密度实验　取上述样品进行 6 次测定 , 计算相对偏
差 ,考察该方法的重现性。
3　结果与讨论
3.1　多糖提取结果　木菠萝多糖为棕黄色粉末 ,易溶于水 , 难
溶于高浓度的乙醇 、乙醚 、氯仿 、丙酮等有机溶剂。 与斐林
(Fehling)试剂作用呈红色 , 与硫酸-苯酚试剂作用显棕红色反
应 ,均表明产品中含有葡萄糖。在 190 ～ 400nm 进行紫外扫描
在 280nm 处无吸收峰 , 表明多糖中不含蛋白质。
3.2　显色条件选择　硫酸—苯酚法测定木菠萝多糖含量时的
显色条件测定结果 ,见表 2。从表 2 中 R 值的大小可以确定各
因素对显色反应的影响按大小次序来说应当是浓硫酸浓度>
苯酚浓度>反应时间 , 最优显色条件为 6%苯酚用量 1.4ml 、
98%浓硫酸用量 7.0ml、反应时间 15min。
3.3　标准曲线　吸光度 A 对葡萄糖的含量 C 回归 , 得回归方
程 A =12.9743C+0.0364 , r =0.9999(n =5), 表明在 10 ～
60μg/ ml范围内葡萄糖的含量与吸光度呈良好的线性关系 , 见
表 3。
3.5　木菠萝干粉中多糖含量的测定结果　测得的吸光度代入
回归方程算出木菠萝干粉中葡萄糖的含量 ,其含量为 5.53%。
表 2　正交实验结果分析
实验号 因素
A B C
吸光度
A
1 1 1 1 0.461
2 1 2 2 0.501
3 1 3 3 0.572
4 2 1 2 0.478
5 2 2 3 0.561
6 2 3 1 0.600
7 3 1 3 0.548
8 3 2 1 0.547
9 3 3 2 0.672
k1 0.511 0.496 0.536
k2 0.546 0.536 0.550
k3 0.589 0.615 0.560
R 0.078 0.119 0.024
表 3　分光光度法测定葡萄糖对照液吸光度
C(mg/ ml) 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
A 0.172 0.292 0.423 0.553 0.684 0.819
3.4　换算因子的测定结果
f =0.9569
3.6　稳定性实验结果　实验结果(见表 4)表明 , 样品溶液在显
色 3h 内 ,吸光度 A 值无明显变化 ,显色稳定 , RSD=2.26%。
表 4　稳定性实验结果
测定时间(min) 0 30 60 90 120 150 180
吸光度 A 0.230 0.228 0.226 0.226 0.223 0.221 0.214
3.7　回收实验　精密吸取精制的木菠萝多糖溶液 5 份 , 测定
其加样回收率 , 结果平均回收率为 102.16%, RSD=2.08%。
4　结论
通过水提醇沉法从木菠萝干粉中提取了多糖 , Sevage法除
蛋白得到灰白色粉末状木菠萝多糖 ,用硫酸-苯酚比色法测定
木菠萝干粉中多糖含量 , 最大吸收波长为 495nm , 最佳显色条
件为:6%苯酚用量 1.4ml 、98%浓硫酸用量 7.0ml、反应时间
15min。多糖浓度在 10 ～ 60μg/ml范围内与吸光度呈良好的线
性关系 , 测得木菠萝干粉中多糖含量为 5.53%。该法显色稳
定 、重现性好。对分析木菠萝的有效成分含量以及测定方法提
供了实验依据 , 对进一步挖掘木菠萝的临床价值具有重要意
义。
参考文献:
[ 1] 　孙宁.木菠萝酸奶加工工艺[ J] .食品工业 , 2002 , 23(1):31
-32.
[ 2] 　罗凯.木菠萝的利用方向探讨[ J] .广西园艺 , 2001(4):18.
[ 3] 　黎德明.木菠萝叶合剂治疗家畜湿疹[ J] .中兽医医药杂
志 , 2005 , 24(4):37-38.
[ 4] 　李俊 , 黄锡山 ,陈海燕 ,等.罗汉果多糖提取工艺及组成分
析[ J] .广西师范大学学报:自然科学版 , 2007 , 25(1):70-
73.
[ 5] 　陈燕青 ,陈思浩 , 丁德润.玛咖多糖含量的测定[ J] .食品科
技 , 2007 , 32(2):231-233.
收稿日期:2009-01-13;修订日期:2009-03-09
—370—
2009年　　　　　　　　　　　　　右江民族医学院学报　　　　　　　　　　　　　　第 3期