全 文 ： CHINA MEDICINE AND PHARMACY 11
2 0 1 2 年 7 月 第 2 卷 第 1 3 期 ·论 著·
苦参和复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷的定性定量分析
白水朋
1
    邓双炳
1
    张思巨
2
    李  琳
1
    王引珍
1
    厉博文
1
    海丽娜
1
    秦文杰
1
1. 北京振东光明药物研究院有限公司，北京 100120；2. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700
[ 摘要 ] 目的 建立苦参和复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷的定性、定量分析方法。 方法 采用 TLC 法对苦参和复方苦
参注射液中三叶豆紫檀苷作鉴别。采用 HPLC 法测定苦参和复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷的含量。 结果 TLC 图谱
中可检出三叶豆紫檀苷的特征斑点；三叶豆紫檀苷含测的进样量在 0.1 ～ 2.0 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系
（r=0.999 8），苦参和复方苦参注射液的平均回收率分别为 99.84%（RSD =2.11%），99.91%（RSD = 0.32%）。 结论 本研
究方法简便、结果准确可靠，适用于苦参和复方苦参注射液的质量控制。
[ 关键词 ] 苦参；复方苦参注射液；三叶豆紫檀苷；薄层色谱；高效液相色谱
[ 中图分类号 ] R917 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 2095-0616（2012）13-11-04
Qualitative and quantitative analysis of trifolirhizin from Sophora
flavescens Ait．and compound Kushen injection
BAI  Shuipeng
1
    DENG  Shuangbing
1
    ZHANG  Siju
2
    LI  Lin
1
    WANG  Yinzhen
1
    LI  Bowen
1
    
HAI  Lina
1
    QIN  Wenjie
1
  
1.Beijing Zhendong Guangming Pharmaceutical Research Institute Company Limited,Beijing 100120,China;2.Institute of Chinese
Meteria Medica,China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700,China
[Abstract] Objective To establish methods for qualitative and quantitative analysis of trifolirhizin from Sophora flavescens
Ait.and compound Kushen injection. Methods TLC was used for identification of trifolirhizin from Sophora flavescens Ait.
and compound Kushen injection.HPLC was used for determination of trifolirhizin from Sophora flavescens Ait. and compound
Kushen injection. Results The characteristic spot of trifolirhizin could be detected by TLC.Trifolirhizin was linear within
the range of 0.1 ～ 2.0 μg (r=0.999 8).The average recovery of trifolirhizin in Sophora flavescens Ait. was 99.84%(RSD
=2.11%),and compound Kushe injection was 99.91%(RSD =0.32%). Conclusion The methods are simple,accurate and
reliable,suitable for the quality control for Sophora flavescens Ait.and compound Kushen injection.
[Key words] Sophora flavescens Ait.;Compound Kushen injection;Trifolirhizin;TLC;HPLC
[ 基金项目 ] 科技部重大科技专项“重大新药创制”（2008ZX09202-009）；
国家十二五科技支撑计划（2011BA107B03）。
苦参为豆科槐属植物苦参 Sophora flavescens Ait. 的干燥根，
具有清热燥湿、杀虫利尿的功效，主治热痢、便血、黄疸尿闭、赤
白带下、阴痒阴肿、湿疹、皮肤瘙痒、疥癣麻风、外治滴虫性阴道
炎，为许多复方的重要组成药味。研究证明，苦参中含有的黄酮
和生物碱类成分具有抗肿瘤、镇痛、抗菌杀虫、抗病毒、抗炎、
抗肝纤维化等作用，为苦参发挥功效的主要物质基础。
复方苦参注射液具有清热利湿、凉血、解毒、散结、止痛的
功效，临床用于癌肿疼痛、出血等。复方苦参注射液的质量标
准中已制定了活性部位生物碱的含量测定；对中药注射剂而
言物质基础需十分清楚，三叶豆紫檀苷为具有抗肿瘤、抗真菌
等的黄酮苷 [1-2]，增添它的定性定量方法列入质量标准中是十
分必要的。近年有关三叶豆紫檀苷含测方法的文献报道 [1-4]，
供试品溶液制备方法选用了甲醇、稀乙醇为溶剂，提取主要采
用超声、回流（1.0、2.5 h）两种方法。本研究经方法学考察选
用甲醇为溶剂、回流提取 10 h 的方法；经多次对比实验证明，
在 1 ～ 10 h 内，随着回流时间的延长含量逐渐提高，至 10 h 止；
10 h 后含量不再增加，提取得以完全。提取完全是含量测定方
法准确与否的关键要素，该条件的确立是很有意义的。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（2695 型，2487 紫外检测器，Empower 工
作站，美国 Waters 公司）；电子分析天平（CP225D，德国赛多
利斯）；超声波清洗器（KQ5200DE，昆山超声仪器厂）；紫外
可见分光光度计（T6 新世纪，普析通用）。乙腈（色谱纯，J&K
SCIENTIFIC LTD 公司）；甲醇（色谱纯，天津四友公司）；硅胶
板（G，青岛海洋化工厂分厂）；水为娃哈哈纯净水；其它试剂
均为分析纯。苦参药材购自于山西长治、吉林、甘肃天水、内蒙、
山西黎城、河北祁新、陕西、哈尔滨、山西沁县、湖北，经山西振
东道地药材有限公司关扎根高级农艺师鉴定为豆科槐属植物
苦参 Sophora flavescens Ait. 的干燥根。三叶豆紫檀苷对照品，
自制，纯度大于 98%。复方苦参注射液（20090601，20110115，
20090602，20090913，20090911）由山西振东制药股份有限公
司提供。阴性对照液即按照复方苦参注射液制备工艺制备不
含苦参的注射液，自制。
2 三叶豆紫檀苷薄层色谱鉴别
2.1  苦参药材中三叶豆紫檀苷的薄层鉴别 
取苦参药材粉末（过 60 目筛）1 g，加 95% 乙醇 50 mL，回
流提取 3 h，滤过，回收溶剂，残渣加 95% 乙醇 5 mL 使溶解，作
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为供试品溶液。另取三叶豆紫檀苷对照品，加丙酮制成 2 mg/mL
的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液 2 μL，对照品溶液
4 μL，点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷 - 甲醇 -10% 冰
醋酸（5 ︰ 1 ︰ 0.1）为展开剂展开，取出晾干，以碘显色至斑点
清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同
颜色的黄棕色斑点，见图 1。

自左向右依次为 ：山西长治、吉林、内
蒙、对照品、陕西、河北祁新、山西黎城
图 1 苦参药材中三叶豆紫檀苷的薄层色谱图
2.2  复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷的薄层鉴别
取复方苦参注射液 2 mL 通过聚酰胺柱（30 ～ 60 目，2.5 g，
内径为 1 cm），以水 50 mL 洗脱，弃去，再用 50% 乙醇 50 mL 洗
脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加 50% 乙醇 0.5 mL 使溶解，作为供
试品溶液。另取三叶豆紫檀苷对照品，加丙酮制成 2 mg/mL
的溶液，作为对照品溶液。分别吸取上述两种溶液各 5 μL，
点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷 - 甲醇 -10% 冰醋酸
（5 ︰ 1 ︰ 0.1）为展开剂展开，取出晾干，喷以磷钼酸试液，加
热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位
置上，显相同颜色的墨绿色斑点，阴性对照无干扰，见图 2。
1 2 3 4 5 6 7 8
自左向右依次为 ：20090601、20110115、20090602、阴
性、对照品、4-20110115、20090913、20090911
图 2 复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷的薄层色谱图
3 三叶豆紫檀苷的含量测定
3.1  色谱条件及系统适应性[1-4]
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈 - 水（24 ︰ 76）为
流动相；检测波长 310 nm；柱温 30℃ ；流速 1 mL/min。按上
述色谱条件测定，三叶豆紫檀苷峰与相邻峰分离度不低于 1.5，
理论塔板数按三叶豆紫檀苷计算不低于 3 000，见图 3。

A ：对照品 ；B ：苦参药材 ；C ：复方苦参注射液 ；D ：阴性对照
图 3 液相色谱条件考察色谱图
3.2  对照品溶液的制备
取经减压干燥至恒重的三叶豆紫檀苷 10 mg，精密称定，加
甲醇制成 0.1 mg/mL 的溶液，即得。
3.3  供试品溶液的制备[1-4]
3.3.1  药材提取方法考察 提取溶剂：考察了甲醇、乙醇、
80% 甲醇 3 种溶剂；提取溶剂量：考察了 50、100、150 倍 3 种
溶剂量；提取方法：考察了冷浸 16 h、超声 1 h、回流 3 h3 种方
法。结果表明以 50 倍量甲醇为溶剂、回流提取法提取率最高。
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在此基础上进行了提取时间的考察，数次对比实验证明三叶豆
紫檀苷随着回流时间的延长含量会逐渐增高，至 8 h 时渐趋平
缓，10 h 提取量相对较高，继续延长变化不大，故回流时间设为
10 h，见图 4。
图 4 回流时间考察
3.3.2  供试品溶液的制备 苦参药材供试品溶液的制备：取
苦参粉末（过 60 目筛）约 0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精
密加入甲醇 25 mL，密塞，称定重量，加热回流 10 h，放冷，再称
定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀后放置，取上清液滤过，
即得。复方苦参注射液供试品溶液的制备：取复方苦参注射液
滤过，即得。
3.4  线性关系考察
精密吸取对照品溶液 1、2、5、8、11、14、17、20 μL 注入液
相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量（μg）为
横坐标，得回归方程为 Y=918 632X-113 04，r=0.999 8，结果表
明，三叶豆紫檀苷在 0.1 ～ 2.0 μg 范围内进样量与峰面积呈良
好线性关系。
3.5  精密度试验
精密吸取对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样 6 次，结
果三叶豆紫檀苷峰面积的 RSD 为 0.14%，表明仪器精密度良好。
3.6  稳定性试验
取同一药材供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10、12 h 按上
述色谱条件进行测定，结果峰面积的 RSD 为 0.54%，表明药材
供试品溶液在 12 h 内稳定。
取 同 一 复 方 苦 参 注 射 液 供 试 品 溶 液，分 别 于 0、2、4、6、
8、10、12 h 按上述色谱条件进行测定，结果峰面积的 RSD 为
0.11%，表明复方苦参注射液供试品溶液在 12 h 内稳定。
3.7  重复性试验
取同一苦参药材粉末（过 60 目筛）6 份，每份 0.5 g，精密称
定，按 3.3.2 项下药材供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上
述色谱条件进行测定，结果三叶豆紫檀苷平均含量为 2.92 mg/g，
RSD 为 0.79%，表明该方法重复性良好。
取同一批复方苦参注射液 6 份，按上述色谱条件进行测定，
结果三叶豆紫檀苷平均含量为 0.21 mg/mL，RSD 为 0.15%，表
明该方法重复性良好。
3.8  加样回收率试验
苦参药材：取已知含量（2.92 mg/g）的同一批苦参粉末 0.25 g，精
密称定，共 9 份，3 份为 1 组。分别按已知含量的 80%、100%、
120% 3 个水平加入三叶豆紫檀苷对照品溶液，精密量取适量
甲醇，使每份样品加入甲醇全量为 25 mL，按 3.3.2 项下方法制
成供试品溶液 9 份。按上述色谱条件进样测定，计算回收率，
结果见表 1。
表1 苦参中三叶豆紫檀苷加样回收率试验
样品量
（g）
样品中含量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
0.250 1 0.730 3 0.600 0 1.340 0 102.50
99.84 2.11
0.250 5 0.731 5 0.600 0 1.320 0 98.57
0.250 5 0.731 5 0.600 0 1.320 0 98.78
0.250 4 0.731 2 0.730 0 1.460 0 99.81
0.250 0 0.730 0 0.730 0 1.480 0 103.74
0.250 4 0.731 2 0.730 0 1.450 0 99.29
0.250 3 0.730 9 0.880 0 1.620 0 100.49
0.250 3 0.730 9 0.880 0 1.590 0 97.21
0.250 7 0.732 0 0.880 0 1.600 0 98.15
复方苦参注射液：精密量取已知含量（0.21 mg/mL）的同
一批复方苦参注射液 5 mL，置 10 mL 量瓶中，共 6 份。分别按 1 ︰ 1
含量精密加入三叶豆紫檀苷对照品溶液（0.350 06 mg/mL），用纯
净水定容至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。按上述色谱条
件进样测定，计算回收率，结果见表 2。
表2 复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷加样回收率试验
样品中含量
（mg）
加入量
（mg）
测得量
（mg）
回收率
（%）
平均回收率
（%）
RSD
（%）
1.050 0 1.050 2 2.095 0 99.75
99.91 0.32
1.050 0 1.050 2 2.096 0 99.82
1.050 0 1.050 2 2.107 0 100.31
1.050 0 1.050 2 2.088 0 99.43
1.050 0 1.050 2 2.105 0 100.23
1.050 0 1.050 2 2.099 0 99.93
3.9  样品含量测定 
苦参药材：精密称取十批不同购置地的苦参药材 0.5 g，按
3.3.2 项下方法操作，制成供试品溶液。按上述色谱条件进样测
定，计算三叶豆紫檀苷含量，结果见表 3。
复方苦参注射液：取 5 批复方苦参注射液，每批样品均精
密吸取 5 μL（1 批 2 份）注入高效液相色谱仪，按上述色谱条
件进样测定，计算三叶豆紫檀苷含量，结果见表 4。
表3 十批苦参药材中三叶豆紫檀苷含量测定结果
编号 购置地 含量（%） 含水量（%） 干品含量（%）
1 山西长治 0.29 6.23 0.31
2 吉林 0.30 5.48 0.32
3 甘肃天水 0.38 5.84 0.40
4 内蒙 0.26 5.97 0.27
5 山西黎城 0.30 5.58 0.32
6 河北祁新 0.29 5.25 0.31
7 陕西 0.22 6.53 0.24
8 哈尔滨 0.48 5.42 0.51
9 山西沁县 0.31 5.90 0.33
10 湖北 0.31 5.50 0.32
（下转第 16 页）
16 CHINA MEDICINE AND PHARMACY
2 0 1 2 年 7 月 第 2 卷 第 1 3 期·论 著·
喉白斑病为喉黏膜上皮角化增生病变，与中医理论中痰瘀
致病特点相似。笔者前期研究表明，痰、瘀与喉白斑病的发生
发展密切相关，临床上采用活血化痰法治疗喉白斑病疗效确
切 [8-9]。金喉一方为笔者所在科室临床应用多年的经验方，由
贝母瓜蒌散合会厌逐瘀汤加减而来，具有活血化痰之功，主要
治疗咽喉增生类疾病，基本药物组成为：猫爪草、白花蛇舌草、
夏枯草、浙贝母、瓜蒌仁、海藻、昆布、红花、毛冬青、薏苡仁、土
茯苓、五指毛桃等。方中红花、毛冬青、猫爪草活血祛瘀，白花
蛇舌草、夏枯草解毒散结，浙贝母、瓜蒌仁、海藻、昆布化痰散结
软坚，土茯苓有清热除湿解毒之功，全方合用具有活血化痰散
结，扶正解毒的功效；而现代药理研究表明：薏苡仁含薏苡仁
酯、多糖体、氨基酸等，有增强免疫力、抑制癌细胞的作用；土茯
苓、五指毛桃可用于治疗多种肿瘤，有扶正固本，提高机体免疫
力的作用；白花蛇舌草、夏枯草、猫爪草等均有抗肿瘤作用。结
果表明：中西医结合治疗组及常规对照治疗组在治疗前及治
疗后 2 周组间症状、体征积分比较差异均无统计学意义（P ＞
0.05），治疗后 2 个月、6 个月组间症状、体征积分比较差异均
有统计学意义（P ＜ 0.05），说明应用金喉一方在缓解症状、改
善体征方面具有较好的远期疗效。两组患者复发率为 4.00％
（1/25）及 29.41％（5/17），复发率组间比较差异具有统计学意
义（P=0.031 8），说明金喉一方可延缓或减少喉白斑病术后复
发。两组恶变率分别为 0 及 11.76％（2/17），恶变率组间比较
差异无统计学意义（P=0.158）。另外，从本研究中复发及恶变
患者的病理来看，单纯鳞状上皮增生较少复发及恶变，异型增
生者复发及恶变机率相对较高。综上所述，金喉一方对喉白斑
病具有较好的远期疗效，可以延缓或减少患者复发，效果优于
常规对照治疗组。
[参考文献]
[1] 马丽晶，倪鑫 . 喉黏膜白斑病 [J]. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志，2007，31（5）：
249-252.
[2] Mehanna H，Pale r i V，Robin A，et a l .Consensus s t a t emen t by
otorhinohtryngologists and pathologists on the diagnosis and management of
laryngeal dysplasia[J].Clin Otolaryngol，2010（35）：170.
[3] 李春芳，忻耀杰，张弢 . 喉白斑和喉乳头状瘤的中医治疗 [J]. 中国中西医
结合耳鼻咽喉科杂志，2006，14（1）：43-44.
[4] 罗克强，张小伯，王娜亚，等 . 喉显微手术及中西医结合治疗喉癌前病变临
床观察 [J]. 中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2005，13（5）：262-264.
[5] 贝政平，舒怀，周梁 . 眼、耳鼻咽喉科疾病诊断标准 [M]. 第 2 版 . 北京：科
学出版社，2007：342.
[6] Barnes L，Eveson JW，Reichart P，et al.World Health Organization
classification of tumours:pathology and genetics of head and neck tumours[M].
LARC Press：Lyon，2005：140-145.
[7] 庄佩耘，周莉，郝玲，等 . 返流性喉炎与声带白斑关系的初步探讨 [J]. 听力
学及言语疾病杂志，2010，18（5）：448-452.
[8] 卢标清，李云英，孙一帆 . 等 . 基于文献的 259 例喉癌前病变中医证候特
点研究 [J]. 中医杂志，2010，51（S2）：268-270.
[9] 彭桂原，李云英 . 喉癌前病变气滞血瘀证与 VEGF 的相关性研究 [J]. 新中
医，2007，39（7）：43-44.
（收稿日期：2012-05-21）
（上接第 13 页）
表4 5批复方苦参注射液中三叶豆紫檀苷含量测定结果
编号 复方苦参注射液批号 含量（mg/mL）
1 20090601 0.32
2 20110115 0.21
3 20090602 0.31
4 20090913 0.23
5 20090911 0.21
4 讨论
三叶豆紫檀苷薄层色谱鉴别的展开剂中加入冰醋酸，能使
斑点清晰、不拖尾。显色剂考察了三氯化铝试液、碘、香草醛硫
酸试液、磷钼酸试液，最终确定苦参中选用碘显色，显色效果较
好；复方苦参注射液中由于成分较多，碘显色清晰度较差，最终
选用磷钼酸试液显色。
按 2.2 项下方法制备了阴性对照溶液，阴性对照色谱中，在
与对照品色谱相应的位置上无斑点。表明阴性无干扰，方法专
属性良好。
有关三叶豆紫檀苷含测的文献中，供试品溶液制备方法均
选用甲醇和稀乙醇为溶剂，几乎都是采用超声和回流（1.0、2.5 h）
两种提取方法。笔者通过方法学考察确认甲醇为溶剂，又经多
次对比实验证明该物需要回流 10 h 提取才较完全；查阅了中
国药典和若干杂志、文献，很难见到需用 10 h 回流提取的方法
制备供试品液，故进行了 4 次重复试验，结果一致。另又用苦
参中含有的三叶豆紫檀苷单乙酸酯做 10 h 回流的比较研究、发
现其含量变化不大，排除了三叶豆紫檀苷单乙酸酯加热转化的
可能性。提取完全与否是含量测定方法准确性的关键要素，该
条件的确立是十分必要的。
[参考文献]
[1] 赵慧娟，王答其，孙文基 .HPLC 测定消银片中三叶豆紫檀苷的含量 [J]. 中
成药，2005，27（5）：523.
[2] 徐超，朱丽君，刘斌，等 .HPLC 测定不同地区苦参市售饮片中四种黄酮类
成分的含量 [J]. 中药新药与临床药理，2008，19（3）：212.
[3] 赵慧娟，王答其，孙文基 .HPLC 法测定苦参中三叶豆紫檀苷的含量 [J]. 药
物分析杂志， 2005，25（2）：176.
[4] 赵慧娟，王答其，孙文基 . 不同部位不同产地苦参中三叶豆紫檀苷的 HPLC
测定 [J]. 中草药，2005，36（9）：1405.
（收稿日期：2012-04-28）