全 文 ：表明 ,缓释微丸的外观 、含量 、有关物质和体外释放
度与 0 d相比基本保持稳定。
3　讨论
3.1　速释微丸的溶出　将速释微丸(相当于含氧
氟沙星 100 mg)灌装胶囊 ,采用中国药典[ 5] ,以 900
mL经脱气的纯化水为溶出介质 , 转速为 50 r·
min-1 ,温度为(37 ±0.5)℃,依法操作 ,进行溶出度
试验 ,与市售氧氟沙星胶囊对比 ,结果见表 8。
表 8　速释微丸与市售胶囊的溶出度对比
Tab8　Dissolutionbetweenthefast-releasepelletsandcommer-
cialcapsules
样品 溶出度 /%
5 min 10 min 20 min 30 min
速释微丸 20.68 53.77 85.94 96.79
市售胶囊 18.54 49.86 83.71 95.37
　　根据微丸释药的叠加原则[ 6] ,缓释微丸的释药
行为是速释微丸和包衣微丸的释药行为总和 ,速释
微丸的存在能够使缓释微丸达到在体内迅速释药 ,
很快到达有效治疗浓度从而发挥药效的目的。从表
8可见 ,速释微丸与市售胶囊的释放速度相当 ,符合
速释微丸的设计要求 。
3.2　热处理对包衣微丸衣膜的影响　本实验采用
聚合物水分散体包衣技术制备氧氟沙星缓释微丸 。
由于水分散体中聚合物是以胶态粒子形式存在 ,因
此成膜机制与传统的有机溶剂包衣方法有显著区
别 。水分散体包衣成膜时必须经过膜愈合过程 ,使
聚合物粒子相互融合才可形成连续的衣膜 ,膜愈合
往往随包衣过程进行 ,但大多数水分散体包衣结束
之后衣膜尚未愈合完全 ,通常采用包衣后进行热处
理促使衣膜进一步愈合[ 7] 。
本实验考察了 60 ℃条件下热处理不同时间对
缓释微丸释放度的影响 ,结果表明随着热处理时间
的延长 ,缓释微丸的释药速率趋于减慢 , 18 h后稳
定 ,说明衣膜愈合完全。
3.3　稳定性　本缓释微丸经过影响因素 、加速试
验和长期试验稳定性试验 ,结果表明缓释微丸在模
拟市售包装的条件下 ,外观 、含量 、有关物质和释放
度等指标均保持稳定 ,说明制备工艺可靠 ,质量可
控。
缓释微丸是一种剂量分散型制剂 ,与缓释片相
比则具有提高药物在胃肠道表面分布的面积进而提
高生物利用度 ,不受食物输送节律的影响 ,批间差异
小 ,工艺更加稳定等优点 [ 8] 。本实验采用聚合物水
性包衣技术 ,成功研制了氧氟沙星缓释微丸 ,水性包
衣技术具有防燃防爆 ,操作安全 ,降低成本 ,减少污
染等传统有机溶剂包衣技术所不具备的优势 ,近年
来在国内外制药工业中的应用日益广泛 。
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[收稿日期 ] 2007-03-20
[基金项目 ] 中国科学院知识创新工程项目(编号:CXLY-2002-9)。　[作者简介 ] 刘小兰 ,女 ,硕士研究生　[通讯作者 ] 陶燕铎, 电话:0971-
6117264, E-mail:xiaolan 80@163.com
高效液相色谱法测定翼首草中齐墩果酸和熊果酸的含量
刘小兰 1, 2 ,周剑波 1, 2 ,陶燕铎 1 ,邵赟 1 　(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 青海 西宁 810008;2.中国科学院研究生
院 , 北京 100049)
[摘要 ] 　目的:建立用高效液相色谱法同时测定翼首草药材中齐墩果酸和熊果酸的含量。方法:色谱柱为 PhenomenexKro-
masilODS-C18(5μm, 250mm×4.6mm);流动相为甲醇-0.1%磷酸(85∶15);流速 1.0 mL· min-1;柱温 30 ℃;检测波长 215
nm。结果:在上述色谱条件下翼首草中的齐墩果酸 、熊果酸可完全分离 , 齐墩果酸 、熊果酸的含量分别为 10.6, 38.16mg·g-1。
结论:该方法操作简便快速 、结果可靠 、重复性好 , 可为有效控制翼首草药材及其制剂的质量提供依据。
[关键词 ] 　翼首草;高效液相色谱法;齐墩果酸;熊果酸
[中图分类号 ] R927.2　　[文献标识码 ] A　　[文章编号 ] 1001-5213(2008)07-0546-03
·546· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 7期 ChinHospPharmJ, 2008 Apr, Vol28, No.07
DeterminationofoleanolicacidandursolicacidinYishoucaobyHPLC
LIUXiao-lan1, 2 , ZHOUJian-bo1, 2 , TAOYan-duo1 , SHAOYun1(NorthwestInstituteofPlateauBiology, ChineseAcademyof
Sciences, QinghaiXining810008, China;2.GraduateSchoolofChineseAcademyofSciences, Beijing100049, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishamethodfordeterminationthecontentofoleanolicacidandursolicacidinYishoucaoby
HPLC.METHODS　PhenomenexKromasilODS-C
18
(250 mm×4.6mm, 5 μm);wasusedthemobilephaseconsistedofmethanol-
0.1% H3PO4(85∶15)columntemperaturewas30 ℃;Theflowratewas1.0mL·min-1 , andtheUVdetectionwavelengthwasat215
nm.RESULTS　ThecontentofoleanolicacidandursolicacidinYishoucaobyHPLCwere1.06% and3.81%.CONCLUSION　
Themethodissimple, accurate, rapid, reliableandreproducible, andcanbeusedtocontrolthequalityofYishoucaoeffectively.
KEYWORDS:Yishoucao;HPLC;oleanolicacid;ursolicacid
　　藏药翼首草为川续断科植物匙叶翼首花 Ptero-
cephalushookeri(CBClarke)Hoeck的干燥全草 ,藏
名又称榜孜毒乌 。其性寒味苦 ,具有清热解毒 ,祛风
通痹的作用 ,民间常用于治疗感冒发烧 、痹症 、痢疾 、
风湿性关节炎等症[ 1] 。翼首草不仅是 《中华人民共
和国卫生部药品标准(藏药)(第一册)》中单独列出
的一种藏药材而且还是一些藏药制剂如迏斯玛保
丸 、十二味奇效汤散 、二十五味余甘子丸等的组成成
分之一 。目前 ,有关翼首草的化学成分的报道较多
并指出其成分主要是三萜皂苷及其苷元齐墩果酸 、
熊果酸等[ 2] 。齐墩果酸不仅具有保肝 、护胃 、强心 、
抗心律失常 、降血糖 、降血脂 、抗高血压的生物活性
外 ,还具有抗炎 、抗病毒 、免疫凋节 、抑制血小板聚集
和抗过氧化等多种药理作用 [ 3] 。熊果酸具有镇静 、
抗炎 、抗菌 、抗糖尿病 、降血糖 、抑制癌细胞和肿瘤细
胞等作用 [ 4] 。库进良等[ 5]曾测定了翼首草根中熊
果酸的含量 ,但未对翼首草全草及其另一有效成分
齐墩果酸做含量测定 。本实验采用高效液相色谱法
建立了同时测定翼首草全草药材中齐墩果酸和熊果
酸含量的方法 ,为进一步有效控制翼首草药材及其
制剂的质量提供依据 。
1　材料
Waters600E高效液相色谱仪 (二元梯度 515
泵 、智能柱温箱 、二极管阵列 2996检测器 、化学工作
站等);齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定
所 ,批号 110709-200304,供含量测定用);熊果酸对
照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号 110742-
200415,供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为纯化
水;其余试剂均为分析纯;翼首草全草药材采自青
海省大通县 ,由本实验室梅丽娟高级工程师鉴定为
匙叶翼首花 Pterocephalushookeri(CBClarke)Ho-
eck。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:PhenomenexKromasil
ODS-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -
0.1%磷酸 (85∶15);流速:1.0 mL· min-1;柱温:30
℃;检测波长:215 nm。
2.2　对照品溶液的制备　分别精密称取齐墩果
酸 、熊果酸对照品 ,用甲醇超声溶解配成含 1.6 g·
L-1齐墩果酸 、1.0 g·L-1熊果酸的混合对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备　精密称取翼首草药材
0.5 g(过 4号筛)置于具塞三角瓶中 ,加入 25 mL甲
醇 ,密塞 ,称定重量 。超声处理 30 min,放冷 ,用甲醇
补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 。精密量取续滤液 5
mL,定容至 10 mL量瓶中 。过 0.45 μm微孔滤膜后
作为供试品溶液。
2.4　线性关系考察　精密量取上述对照品混合溶
液 0.04, 0.4, 0.8 , 1.2, 1.6, 2.0 mL至 2 mL量瓶中 ,
用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 。各取上述溶液 10 μL注
入高效液相色谱仪 ,色谱图见图 1,记录峰面积 ,以
对照品浓度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制坐标曲
线。结果表明齐墩果酸在 0.032 ～ 1.6 g·L-1 ,熊果
酸在 0.02 ～ 1.0 g·L-1线性关系良好 ,其回归方程分
别为齐墩 果酸:Y= 2 984 002X-881 (r=
0.999 96), 熊果酸:Y=1983 096X-801 (r=
0.999 98)。
2.5　精密度试验　分别精密吸取上述混合对照品
溶液 10 μL,按上述色谱条件连续进样 5次 ,分别记
录齐墩果酸 、熊果酸的峰面积 。计算 RSD分别为
1.28%和 0.96%,表明仪器精密度良好。
2.6　重复性试验　按样品溶液制备方法处理同一
样品 5份 ,各吸取 10 μL,按上述色谱条件测定 ,分
别记录齐墩果酸 、熊果酸的峰面积 。计算 RSD分别
为 1.64%和 1.35%,实验方法的重复性良好。
·547·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 7期 ChinHospPharmJ, 2008 Apr, Vol28, No.07
图 1　HPLC图谱
A.对照品;B.样品;1 -齐墩果酸;2 -熊果酸
Fig1　HPLCchromatograms
A.Referencesubstances;B.sample;1 -oleanolicacid;2 -ursolicacid
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液分别在 0, 2 ,
4, 8, 16 h按上述色谱条件测定 , 分别记录齐墩果
酸 、熊果酸的峰面积 ,计算各共有峰的相对保留时间
和相对峰面积。结果表明 ,各共有峰相对保留时间
和相对峰面积稳定 , 计算 RSD分别为 1.79%和
1.06%,表明样品溶液至少在 16 h内稳定 。
2.8　加样回收率试验　称取 5份已知含量的翼首
草药材各 0.5 g,精密称定。分别精密加入含 1.6 g·
L-1齐墩果酸 、1.0 g·L-1熊果酸的混合对照品溶液
1.0 mL。 5份样品按供试品溶液的制备方法处理 ,
依上述色谱条件方测定 ,计算回收率 。结果见表 1。
表 1　回收率试验结果(n=5)
Tab1　Theresultsoftherecoverytest(n=5)
化合物 序号
加入量
/mg
回收量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
齐墩果酸 1 1.600 1.582 98.87
2 1.600 1.574 98.37
3 1.600 1.580 98.75 99.02 1.18
4 1.600 1.590 99.37
5 1.600 1.596 99.75
熊果酸 1 1.000 1.002 100.20
2 1.000 1.010 101.00
3 1.000 1.011 101.10 101.02 0.98
4 1.000 1.013 101.30
5 1.000 1.015 101.50
2.9　样品含量测定　精密吸取供试品溶液各 10
μL注入液相色谱仪中 ,按上述色谱条件测定 ,测得
峰面积 ,代入回归方程 。计算翼首草药材中齐墩果
酸 、熊果酸的含量 。测得翼首草药材中齐墩果酸 、熊
果酸的含量分别为 10.6, 38.16 mg·g-1 (n=5)。
3　讨论
3.1　提取溶剂和方法的选择　提取齐墩果酸 、熊
果酸的溶剂主要有氯仿 、乙醇 、乙醚 ,提取方法有超
声法 、索式提取法 、回流提取法 [ 6-8] 。本实验以 80%
的乙醇做溶剂 ,用超声法 、索式提取法 、回流提取法
对其进行了提取并做了含量测定 ,结果表明超声法
效果最好 。同时 ,我们又分别用氯仿 、80%乙醇 、
95%乙醇 、乙醚 、甲醇做溶剂超声提取样品 ,甲醇定
容后测定齐墩果酸和熊果酸的含量 ,其齐墩果酸的
含量分别 0.94%, 0.97%, 0.93%, 1.06%,熊果酸的
含量分别为 2.89%, 3.53%, 3.43%, 3.81%。甲醇
超声提取效果最好。本着准确 、简便 、快速的原则 ,
本试验采用了甲醇超声提取法 。
3.2　色谱条件的优化 　齐墩果酸 、熊果酸同为三
萜类化合物 ,互为同分异构体 ,极性相近 ,故要把二
者很好的分开 ,色谱条件尤为重要 。我们考察了齐
墩果酸和熊果酸在 190 ～ 400 nm波长下的紫外吸收
情况 ,结果在 205 nm处有最大吸收 ,但在此处基线
不稳定 ,为了使基线稳定 ,选择了 215 nm做为检测
波长 。测定齐墩果酸 、熊果酸所用的流动相有甲醇 -
水-冰醋酸 、甲醇-四丁基溴化铵 -三乙胺和甲醇 -水 -
冰醋酸 -三乙胺系统等[ 5-8] ,本实验通过摸索甲醇与
不同浓度的磷酸溶液按一定比例混合作为流动相 ,
考察其分离度 ,结果以甲醇 -0.1%磷酸为流动相 ,流
速 1.0 mL·min-1 ,柱温 30 ℃的色谱条件下样品中齐
墩果酸和熊果酸能达到良好的分离;故本试验最终
确定此色谱条件。
3.3　样品测定结果 　结果表明 ,翼首草全草中熊
果酸含量明显高于库进良等 [ 5]曾测定的其根中熊
果酸含量 。但因本实验样本偏少 ,要对翼首草全草
中齐墩果酸和熊果酸的含量控制做出最低限度规
定 ,还需进一步增加样本量。
本实验建立了翼首草药材中齐墩果酸 、熊果酸
的 HPLC含量测定方法 。该方法操作简便 、结果可
靠 、重复性好 ,可为控制翼首草药材及其制剂的质量
提供依据 。
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·548· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 7期 ChinHospPharmJ, 2008 Apr, Vol28, No.07