全 文 ：收稿日期:2007-04-07;　修订日期:2007-06-12
基金项目:国家 “ 863”计划重点资助项目(No.2002AA2Z3217)
作者简介:刘　洪 (1963-),男(汉族),江西吉安人 ,现任宜春学院助理实
验师 ,主要从事实验教学与管理研究工作.
＊通讯作者简介:邹盛勤 (1970-),男(汉族),江西奉新人 ,现任江西省天
然药物活性成分研究重点实验室副教授,学士学位 ,主要从事天然药物成
分提取与分析研究工作.
石榴皮中乌索酸和齐墩果酸含量的
反相高效液相色谱测定
刘　洪 , 陈　亮 , 邹盛勤＊
(宜春学院 ,江西 宜春　336000)
摘要:目的 建立反相高效液相色谱法同时测定石榴皮中乌索酸和齐墩果酸的含量 ,并进行方法学考察。方法 色谱柱
为 KromasilC18分析柱 (4.6mm×250 mm, 5μm),流动相为甲醇 -水 -磷酸(88∶12∶0.1), 流速 0.8ml· min-1 , 光电二
极管阵列检测器(PAD),检测波长 210 nm,柱温 28 ℃。结果 在选定色谱条件下线性范围良好 , 乌索酸和齐墩果酸的样
品加样回收率分别为 99.3%和 98.5%, RSD为 2.20%和 1.78%。结论 方法测定快速 ,结果准确 、可靠 , 可用于石榴皮中
乌索酸和齐墩果酸含量的定量分析。
关键词:石榴皮;　高效液相色谱法;　乌索酸;　齐墩果酸;　光电二极管阵列检测器
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)12-2884-02
DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinCortexGranatibyRP-HPLC
LIUHong, CHENLiang, ZOUSheng-qin＊
(YichunColege, Yichun, Jiangxi336000 , China)
Abstract:ObjectiveTodevelopaquantitativemethodforsimultaneousdeterminationofursolicacidandoleanolicacidinCortex
GranatibyRP-HPLC.MethodsHPLCwithphotodiodearraydetector(PAD)wascarriedoutonKromasilC18 column(4.6mm×250mm, 5μm)at28℃ usingmethanol-water-phosphoricacid(88∶12∶0.1)asmobilephasewithaflowrateof0.8 ml
· min-1 anddetectedwavelengthwasat210 nm.ResultsThegoodlinearrelationshipwasobtainedundertheoptimumcondi-
tions.Therecoveriesofthestandardsaddedforursolicacidandoleanolicacidwere99.3% and98.5%, respectively, whilethe
relativestandarddeviationswas2.20% and1.78%.ConclusionThemethodisrapidandprecise.Itcanbeusedtodetermine
theursolicacidandoleanolicacidinCortexGranati.
Keywords:CortexGranati;　HPLC;　Ursolicacid;　Oleanolicacid;　Photodiodearraydetector
　　石榴皮是石榴科植物石榴 PunicagranatumL.的干燥果皮 ,
味酸 、涩 ,性温 , 具有涩肠止泻 、止血 、驱虫之功效 ,可用于久泻 、久
痢 、便血 、虫积腹痛等的治疗 , 为历版 《中国药典》所收录 , 含量测
定项以鞣质为定量标准 [ 1] 。石榴皮含多种化学成分 , 如没食子
酸 、石榴皮亭 A、石榴皮亭 B、鞣云实精 、鞣花酸 、安石榴林等 [ 2] 。
安明等 [ 3]研究了石榴中乌索酸的最佳提取工艺条件 , 并按 《中国
药典》 1995年版Ⅰ部山茱萸项下方法测定了石榴中乌索酸的含
量 , 但石榴皮中乌索酸和齐墩果酸的成分鉴定研究和含量测定均
未见文献报道。本实验采用反相高效液相色谱法同时测定了石
榴皮中乌索酸和齐墩果酸的含量 ,并进行了定性鉴别 ,为药材的
质量控制和评价提供实验依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器 高效液相色谱仪(515型泵 , 2996光电二极管矩阵检
测器 , 柱温箱 , Empower中文色谱工作站 ,美国);CP225D分析天
平(德国 Sartorius公司);KS-1500超声提取仪器(宁波科盛仪器
厂)。
1.2　试药 甲醇 ,色谱纯(上海陆忠试剂厂);95 %乙醇 ,分析纯
(江西同盟试剂厂);水为高纯水;乌索酸和齐墩果酸对照品(中
国药品生物制品检定所 , 批号:110742 -200314、 110709 -
200304,供含量测定用)。石榴皮 , 市售。
2　方法与结果
2.1　检测波长的选择 取对照品和石榴皮样品溶液进样 , 使用
PAD检测器在 190 ～ 600 nm波长范围进行光谱扫描 , 流动相中乌
索酸和齐墩果酸的紫外光谱吸收特征一致 , 最大吸收波长均为
202.2nm(见图 1)。为了消除流动相在短波长处的末端干扰 ,
提高信噪比 , 提取不同波长的色谱图进行比较 , 选择 210 nm为检
测波长时信噪比高 ,基线平稳。
图 1　对照品(a)和石榴皮样品(b)乌索酸和齐墩果酸紫外光谱
2.2　色谱条件 色谱柱:KromasilC18柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm);流动相:甲醇 -水 -磷酸(88:12:0.1);检测波长:210 nm;
流速:0.8 ml/min;柱温:28℃;进样量:20 μl。 外标法定量分析 ,
乌索酸和齐墩果酸分离度为 1.95, 理论塔板数均大于 13 000。
乌索酸 、齐墩果酸对照品和石榴皮样品溶液色谱见图 2。
2.3　峰纯度分析 采用 Empower色谱软件适应性模块对此波长
的色谱峰进行纯度分析 ,对照品和样品中乌索酸和齐墩果酸色谱
峰的纯度角值均小于阈值 , 纯度角线均位于自动阈值线下方 , 证
实色谱峰为单一组分吸收率。 乌索酸和齐墩果酸的色谱峰纯度
分析见图 3。
2.4　溶液配制
2.4.1　对照品溶液 分别精密称定乌索酸 、齐墩果酸对照品
3.59 mg和 1.74mg,置于 10ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻
度 , 摇匀 ,制成对照品混合溶液 ,备用。
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.12　
2.4.2　石榴皮样品溶液 精密称取约 5 g烘干的石榴皮(粉碎过
80目筛)置具塞三角烧瓶中 , 分别加入 40 ml乙醇超声提取 90
min,过滤 , 滤渣用乙醇洗涤 2次 ,合并滤液 ,转移至 50 ml容量瓶
中 , 定容。滤液离心后用微孔滤膜(0.45 μm)过滤 , 取续滤液作
为样品溶液。
2.5　线性关系考察 分别精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品混
合溶液中 1, 4, 8, 12, 16 μl进样分析 , 按色谱条件测定峰面积 ,以
对照品进样量(μg)为横坐标 , 峰面积(μV· s)为纵坐标 , 进行线
性拟合 , 得乌索酸线性回归方程为:Y=6.44 ×105X-5.83 ×104
(r=0.999),齐墩果酸线性回归方程为:Y=7.54×105X-3.70 ×
104(r=0.999)。表明当乌索酸进样量在 0.359 ～ 5.744 μg,齐墩
果酸进样量在 0.174 ～ 2.784 μg时 ,线性关系良好。
a-对照品　b-样品　 1-齐墩果酸　2-乌索酸
图 2　乌索酸 、齐墩果酸混合对照品及石榴皮样品溶液的 HPLC色谱图
图 3　乌索酸和齐墩果酸的色谱峰纯度分析
2.6　精密度实验 精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照品混合液
进样分析 , 平行 5次 , 测得乌索酸峰面积相对标准偏差 RSD为
0.47%(n=5),齐墩果酸峰面积 RSD为 0.66 %(n=5)。表明进
样方法和仪器系统精密度良好。
2.7　重现性实验 精密称取同一批石榴皮样品 5份 , 制备样品溶
液 , 进样分析。测得乌索酸峰面积 RSD为 1.49 %(n=5), 齐墩
果酸峰面积 RSD为 2.05%(n=5), 表明重现性良好。
2.8　加样回收率实验 精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的
石榴皮样品 6份 , 分高 、中 、低 3种浓度分别加入乌索酸和齐墩果
酸对照品适量 , 样品同时处理 , 制备石榴皮样品溶液 ,进样分析 ,
测定样品中乌索酸和齐墩果酸的含量 ,计算加样回收率。乌索酸
和齐墩果酸的平均加样回收率分别为 99.3%(RSD=2.20%)和
98.5%(RSD=1.78%)。
2.9 　样品含量的测定 取不同石榴皮样品溶液在上述色谱条件
下进样分析 ,平行 3次 ,测定峰面积 ,按外标法计算乌索酸和齐墩
果酸平均含量。不同石榴皮样品中乌索酸和齐墩果酸存在较大
差异 , 但两者相对含量较为稳定 , 乌索酸含量约为齐墩果酸的 2.5
倍。结果见表 1。
表 1　石榴皮中乌索酸和齐墩果酸的含量
编号 乌索酸含量 C/g· mg-1　RSD(%)
齐墩果酸
含量 C/g· mg-1　RSD(%)
1 0.569 1.01 0.242 0.65
2 0.382 0.86 0.151 0.97
3 0.483 0.79 0.190 0.65
　　n=3
3　讨论
采用二极管阵列检测器扫描分离组分的紫外吸收光谱快速 、
简便 , 可快速确定被检测组分在色谱流动相中的最大吸收波长 ,
提取不同波长的色谱进行比对 ,能在有效消除背景干扰时保证检
测的灵敏度 [ 4] 。
HPLC法定量分析 , 一般采用紫外检测器 , 以保留时间定性 ,
峰面积定量。但由于色谱方法的定量能力强而定性能力弱 ,对于
成分复杂的中药样品来说 ,往往有不同的组分在同一时间或极相
近的时间出峰 , 甚至两组分完全叠加 ,因而只用保留时间定性可
能会造成分析结果产生意外误差。二极管阵列检测器可以同时
在设定波长区域内的各波长下进行立体数据采集 ,既可以察看各
波长下的色谱图又可以察看各时间下的光谱图 ,在比对保留时间
的基础之上 , 加以光谱确认 , 因而可以克服仅以保留时间一项指
标定性的缺点 ,增强了定性的确定性。此外 ,二极管阵列检测器
与 Empower色谱工作站系统适应性软件联用 ,可分析组分色谱峰
峰纯度 ,进一步增强色谱方法的定性能力 [ 5] 。
乌索酸和齐墩果酸为同分异构体 , 属五环三萜类化合物 , 结
构和极性相似 , 紫外分光光度法和薄层色谱法均难以使 2组分有
效地分离 ,测定的结果为乌索酸和齐墩果酸的总含量。采用本文
建立的 HPLC法测定时乌索酸和齐墩果酸达基线分离 , 分离度大
于 1.95。经光谱归一化和峰纯度积分分析 , 乌索酸和齐墩果酸
色谱峰均为单一组分峰 [ 5]。
参考文献:
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[ 5 ] 　邹盛勤 ,陈　武.高效液相色谱 -光电二极管检测器法测定栀子中
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.12 时珍国医国药 2007年第 18卷第 12期