全 文 ：(氨蒸气饱和)、三氯甲烷 -甲醇(氨蒸气饱和)、三氯甲烷 -甲醇
-氨水 、石油醚 -苯 -丙酮 -甲醇 、三氯甲烷 -无水乙醇(氨蒸
气饱和)等 ,结果分离效果以碱性硅胶 G板 、苯 -丙酮 -甲醇(8
∶3∶0.5)(氨蒸气饱和)为最佳。
3.2 　对显色剂进行了比较 在最佳薄层色谱条件下 , 分别喷碘
化铋钾试液 、稀碘化铋钾试液和改良碘化铋钾试液 , 结果碘化铋
钾试液喷后整块板颜色深 ,微量杂质不易观察;改良碘化铋钾试
液显色后 , 常褪色太快 , 不够稳定;稀碘化铋钾试液显色效果较
好 , 背景颜色浅 ,斑点清晰。但是无任用上述哪种显色剂 ,显色后
的斑点均易消褪 , 尤其是微量杂质斑点不易显现或显色后瞬间消
失 , 不利于观察比较 , 虽加大点样量 , 仍不能避免这种情况 , 致使
杂质斑点不易检出。经反复实验 , 采用了在稀碘化铋钾试液显色
后继续喷以 30%的硫酸乙醇溶液 ,结果斑点显色灵敏度增加 ,微
量的杂质斑点也能清晰可辨 ,而且稳定时间较长。
本法与高效液相色谱法 [ 4]比较 , 后法虽然灵敏度更高 , 但本
法设备简单 , 价廉 , 用自身对照法可以满足本品有关物质检查
要求。
参考文献:
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社 , 1997:396.
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及注射液的含量 [ J] .中国新药杂志 , 2007, 16(1):68.
收稿日期:2007-11-28;　修订日期:2008-01-29
基金项目:四川省中医药管理局重点项目(No.2002-59)
作者简介:范成杰(1956-),男(汉族),陕西万荣人 ,现任成都中医药大学
助理实验师 ,主要从事中药化学成分研究工作.
乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的
高效液相色谱含量测定
范成杰 ,刘友平 ,陈鸿平 ,石宇华
(成都中医药大学 ,四川 成都　611173)
摘要:目的 应用高效液相色谱(HPLC)法测定乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量 , 并以齐墩果酸和熊果酸为指标成
分建立乌梅肉的质量标准。方法 采用 HypersilODSC18(150 mm×4.6 mm, 5 μm);甲醇 -0.2%乙酸铵水溶液(83∶17)
为流动相;检测波长 210nm, 流速 0.8 ml/min, 柱温 25℃。结果 齐墩果酸的线性范围为 0.168 ～ 1.512 μg, r=0.999 6, 回
收率为 98.00%(RSD=0.53%);熊果酸的线性范围为 0.452 ～ 4.068μg, r=0.999 9, 回收率为 97.13%(RSD=1.17%)。
结论 该方法简便 、可靠 、准确 ,可用于乌梅药材中齐墩果酸和熊果酸的含量比较和乌梅肉的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;　乌梅肉;　齐墩果酸;　熊果酸
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)08-1843-02
DeterminationoftheUrsolicAcidandOleanolicAcidinthePulpofFructusMume
byHPLC
FANCheng-jie, LIUYou-ping＊ , CHENHong-ping, SHIYu-hua
(ChengduUniversityofT.C.M, Chengdu, Sichuan, 611173, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminetheursolicacidandoleanolicacidinthepulpofFructusMumebyHPLC.MethodsTheur-
solicacidandoleanolicacidwereseparatedonC
18
column.Methanol-0.2%Ammoniumacetatesolution(83∶17)wasusedas
mobilephaseandthedetectionwavelengthwas254nm.ResultsThelinearityofursolicacidandoleanolicacidwasintherangeof
0.168 ～ 1.512μg, 0.452 ～ 4.068μg, respectively;theaveragerecoveriesofursolicacidandoleanolicacidwere98.00%(RSD
=0.53%, n=5)and97.13%(RSD=1.17%, n=5).ConclusionThemethodissimple, quickandreproducible, anditcan
beusedforthequalitycontrolofthepulpofFructusMume.
Keywords:HPLC;　PulpofFructusMume;　Ursolicacid;　Oleanolicacid
　　乌梅 , 别名酸梅 、黑梅 , 由蔷薇科植物梅 Prunusmume
(Sieb.)Sieb.etZucc.(ArmeniacamumeSieb.)的干燥近成熟果
实加工而成。关于乌梅的入药方式 , 历代本草记载有去核和连核
使用两种 , 现代研究证明乌梅中有效成分有机酸及水浸出物大多
集中在果肉中 , 核含量甚少 [ 1] , 且核仁含大量脂肪油成分 , 具滑
泄作用 , 与乌梅的固涩作用相驳;同时也有报道认为乌梅核特征
明显 , 有利于乌梅的鉴定 ,而且乌梅核还含有约 5%的有机酸 ,且
去核繁琐费时费工 [ 2] , 所以乌梅是否应分部位药用仍存在争议。
《中国药典》Ⅰ部(2005年版)中 , 净乌梅和乌梅肉都有收载 [ 3] 。
因此明确乌梅的入药方式 , 是建立乌梅规范的质量标准的前提。
本课题组前期对乌梅各部位的化学成分进行了初步比较研究 ,结
果表明乌梅各部位的药理作用不同 ,代表乌梅涩肠止泻作用的主
要药用部位为乌梅果肉。本实验以齐墩果酸和熊果酸为对照品 ,
建立了乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸的 RP-HPLC含量测定方
法 , 为乌梅肉的质量标准的规范奠定了基础。
1　仪器与试剂
1.1　仪器 岛津 LC-10A高效液相色谱仪 , 岛津工作站(日本
岛津公司);高效液相色谱柱 [ Hypersil-ODSC18(150 mm×4.6mm, 5 μm), 大连依利特公司 ] ;BP211D(十万分之一), BP121S
(万分之一)型电子分析天平(德国 Sartorius公司);BUG25 -12
超声波清洗机(25 kHz, 500 W, 上海必能信超声波有限公司)。
1.2　试剂 齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 ,供含量
测定 , 批号:709-8501), 熊果酸对照品(中国药品生物制品检定
所 , 供含量测定 ,批号:110742-200314)。甲醇为色谱纯 ,水为超
纯水;其余试剂均为分析纯。
1.3　样品 药材采或购自不同产地 , 均经鉴定。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.8 时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期
2　方法与结果
2.1 　色谱条件及系统适应性实验 色谱柱为 HypersilODSC18(150 mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇 -0.2%乙酸铵水溶
液(83∶17);检测波长为 210 nm;流速 0.8 ml/min, 柱温 25℃。
在此条件下分别精密吸取对照品溶液 、供试品溶液各 5 μl注入
液相色谱仪。结果 , 对照品采用峰面积归一化法计算 , 二者含量
>98%。在此色谱条件可将供试品溶液中齐墩果酸 、熊果酸与其
它成分峰分离 , 分离度达 1.2, 理论塔板数应不低于 3 000。对照
品溶液 、供试品溶液的色谱图见图 1 ～ 2。
图 1　齐敦果酸 、熊果酸标准品的色谱图　　图 2　乌梅果肉供试品的色谱图
2.2　对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 10.50 mg,
置 25 ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为齐墩果酸
对照品储备液。精密称取熊果酸对照品 11.31 mg, 置 10 ml量瓶
中 , 用甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 作为熊果酸对照品储备液。
分别从两种储备液中精密量取 1ml溶液 , 置同一 5 ml量瓶中 ,加
甲醇至刻度 , 摇匀 ,即得(每毫升含齐墩果酸 84 μg,含熊果酸 226
μg)。
2.3　供试品溶液的制备 取乌梅果肉粗粉约 4 g, 精密称定 ,置
具塞三角瓶中 , 精密加入甲醇 50 ml, 密塞 , 称定重量 , 超声处理
(25kHz, 500 W)50min, 放至室温 , 再称定重量 , 以甲醇补足减
失的重量 , 摇匀 ,滤过 , 精密量取续滤液 20 ml, 置蒸发皿中蒸干 ,
残渣加甲醇溶解并转移至 5 ml量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 ,
即得。
2.4 　标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液 2, 6, 10, 14, 18 μl
进样 , 分别以齐墩果酸 、熊果酸峰面积积分值(Area)为纵坐标 ,
其含量(Amt)为横坐标 , 绘制标准曲线。 计算回归方程 , 齐墩果
酸的回归方程为 A=493 338(Amt)+10 620, 相关系数为 r=
0.999 6,齐墩果酸含量在 0.168 ～ 1.512μg范围内与峰面积积分
值呈良好的线性关系。熊果酸回归方程为 A=524917 (Amt)+
9640.4,相关系数为 0.999 9,熊果酸含量在 0.452 ～ 4.068 μg范
围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5　稳定性实验 取乌梅肉药材 ,依法制备供试品溶液 , 室温放
置 , 在 0, 4, 8, 12, 24 h分别进样 5 μl, 测得齐墩果酸的含量 RSD
为 1.25%,熊果酸的含量RSD为 1.46%。实验表明:样品溶液在
24 h内基本稳定。
2.6　精密度实验 取同一对照品溶液 , 重复进样 5次 ,每次 5μl,
齐墩果酸峰面积积分值的 RSD为 0.53%, 熊果酸峰面积积分值
的 RSD为 1.17%。表明精密度符合要求。
2.7　重复性实验 取样品适量 , 精密称取 5份 , 分别按 “ 2.3”项
下的方法操作 , 分别测定齐墩果酸 、熊果酸含量 ,测得齐墩果酸的
含量 RSD为 2.10%, 熊果酸的含量 RSD为 1.57%。
2.8　 加样回收率实验 取乌梅果肉粉末 5份 ,每份约 2 g, 精密
称定 , 精密加入齐墩果酸对照品 0.464 mg, 熊果酸对照品 1.895
mg,以后按供试品溶液制备方法制备供试液 , 精密吸取续滤液 5
μl,对照品溶液 5 μl, 分别注入液相色谱仪 , 测定含量 , 计算加样
回收率(本品另同时测定 , 含齐墩果酸 0.2451 mg/g, 熊果酸
0.885 5 mg/g)。平均回收率齐墩果酸为 98.00%, 熊果酸为
97.13%。
2.9　乌梅不同入药部位的测定 分别取乌梅核壳和种子粉末各
约 4 g, 按供试品溶液的制备方法制成供试液 ,按上述色谱条件分
别精密吸取乌梅果肉供试品溶液 、乌梅核壳供试品溶液 、乌梅种
仁供试品溶液各 5μl注入液相色谱仪。 测定。结果核壳和种子
样品在齐墩果酸 、熊果酸相对应的保留时间未出峰 ,与果肉样品
HPLC图谱比较 , 三者有明显区别。乌梅果肉供试品溶液 、乌梅
核壳供试品溶液 、乌梅种仁供试品溶液的色谱图见图 2 ～ 4。
图 3　乌梅核壳供试品溶液色谱　　图 4　乌梅种仁供试品溶液色谱图
2.10　不同产地样品测定 按前述方法制备各供试品溶液 ,按上
述色谱条件测定 ,计算含量。结果见表 1。
表 1　不同产地及品种乌梅肉样品中齐墩果酸 、熊果酸含量测定结果
mg· g-1
样品编号 产地 齐墩果酸含量 熊果酸含量 总和
1 自采于大邑县斜源镇 0.285 6 1.031 9 1.317 5
2 福建 0.237 9 1.011 6 1.249 5
3 大邑(一级品) 0.260 4 0.866 6 1.127 0
4 大邑(统装) 0.323 4 1.299 1 1.622 5
5 浙江(市售) 0.386 4 1.854 3 2.240 7
6 浙江长山县 0.196 0 0.842 0 1.038 0
7 成都市荷花池药材市场 0.294 0 0.993 9 1.287 9
8 阿坝洲(统装) 0.360 6 1.534 5 1.895 1
9 自采于大邑县斜源镇(红梅) 0.208 3 0.660 0 0.868 3
10 自采于大邑县斜源镇(青梅) 0.259 4 1.064 3 1.327 3
11 自采于大邑县斜源镇(日本引种)0.628 3 0.470 7 1.099 0
根据 11批乌梅果肉样品中齐墩果酸和熊果酸含量测定结
果 , 其中 10批样品齐墩果酸和熊果酸的总量在 1.0 mg/g以上。
3　讨论
关于乌梅的入药方式一直存在争议。本课题组首先对乌梅
各部位即果肉 、核壳 、种仁的药理作用进行了初步比较研究 ,结果
表明乌梅各部位药理作用不同 [ 4] 。本实验采用 HPLC法对乌梅
果肉 、核壳和种仁的化学成分进行了比较 , 结果表明齐墩果酸和
熊果酸仅存在于果肉部位 ,这为乌梅各部位药理作用的差异提供
了物质基础依据 ,进一步证明了乌梅应分部位药用的必要性 。提
示应分别建立各部位的质量控制标准 , 保证临床用药的安全
有效。
有文献报道乌梅仅含熊果酸而不含齐墩果酸 [ 5] 。本研究首
次发现乌梅果肉中齐墩果酸和熊果酸两者同时存在 ,因此本研究
以齐墩果酸和熊果酸为对照品 ,建立了用乌梅果肉中齐墩果酸和
熊果酸的反相 HPLC含量测定方法。
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.8