全 文 ：HPLC测定蓝萼香茶菜中齐墩果酸和熊果酸的含量
沈晓丹1， 袁 杰3， 徐乃玉1， 李 宁1， 张 健1，2*
(1. 苏州大学药学院，江苏 苏州 215123;2. 苏州利元医药科技有限公司，江苏 苏州 215011;3. 安徽省食
品药品检定所，安徽 合肥 230051)
收稿日期:2009-11-10
基金项目:苏州大学科研预研基金资助(Q3132823);苏州市科技支撑计划社会发展项目(SS0933);苏州大学 2007 年校级大学生创新项目
(57315855)。
作者简介:沈晓丹(1986 －)，男，硕士生。
* 通讯作者:张 健(1975 －)，女，副教授，硕士生导师，从事天然药物化学的教学、科研工作。Tel:(0512)69564139 E-mail:jianzhang@
suda. edu. cn
关键词:高效液相色谱法;蓝萼香茶菜;齐墩果酸;熊果酸
摘要:目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定蓝萼香茶菜中齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法:采用 HypersilODS C18
(150 mm ×4. 6 mm，5 μm);甲醇 － 0. 1%磷酸溶液(80∶ 20)为流动相;检测波长 210 nm，流速 1. 0 mL /min，柱温 35 ℃。
结果:在上述色谱条件下蓝萼香茶菜中的齐墩果酸、熊果酸可完全分离，线性范围分别为齐墩果酸 2. 6 ～ 39. 0 μg (r =
0. 999 8)，熊果酸 1. 6 ～ 23. 4 μg (r = 0. 999 5);平均回收率分别为齐墩果酸 97. 21%，RSD = 0. 75% (n = 5)，熊果酸
98. 76%，RSD = 0. 92% (n = 5)。结论:该方法对齐墩果酸和熊果酸的分离效果好，重复性好，灵敏度高。
中图分类号:R284. 1 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2010)12-2182-02
蓝萼香茶菜 Rabdosia japonica var. glaucocalyx (Maxin.)
Hara为唇形科香茶菜属植物，为民间药，性味苦、寒，具有健
胃、清热解毒、活血等功能，用于治疗胃炎，脘腹胀痛，肝炎初
期，感冒发热等。蓝萼香茶菜叶中主要含有蓝萼甲素、蓝萼
丙素、ent-7β，14α，15β 三羟基-16-贝壳杉烯-3-酮等二萜类成
分;木栓酮、乙酰熊果酸、齐墩果酸、熊果酸、2α-羟基熊果酸、
2α，3α-二羟基熊果酸等三萜类化合物;及槲皮素、芦丁等黄
酮;β-谷甾醇、胡萝卜苷、果糖等其它类化合物。张元桐等采
用反相 HPLC测得蓝萼甲素含量为 1. 03%，但未对三萜类成
分-齐墩果酸和熊果酸进行含量测定［1-4］。齐墩果酸和熊果
酸具有较强的生理活性，齐墩果酸具有保肝、抗心律失常、降
血糖、降血脂、抗高血压、抗炎、抗病毒、免疫凋节、抑制血小
板聚集和抗氧化等多种药理作用;熊果酸具有镇静、抗炎、抗
菌、抗糖尿病、降血糖、抑制癌细胞和肿瘤细胞等作用［5-6］;为
此，有必要建立该植物的齐墩果酸和熊果酸的质量控制方
法。本实验采用高效液相色谱法建立了同时测定蓝萼香茶
菜叶中齐墩果酸和熊果酸含量的方法，为进一步有效控制蓝
萼香茶菜的质量提供依据。
1 仪器与试药
岛津 LC20A高效液相色谱仪(二元梯度 515 泵、智能柱
温箱、紫外可见检测器 SPD-M20A、化学工作站等)。齐墩果
酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110709-200304，
供含量测定用);熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，
批号 110742-200516，供含量测定用);甲醇为色谱纯;水为纯
化水;其余试剂均为分析纯;蓝萼香茶菜采自黑龙江省铁力
市桃山林业局白河林场(海拨 280. 4m;N 46°986′;E128°
688′)，经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为蓝萼香茶菜
Rabdosia japonica var. glaucocalyx (Maxin.)Hara;标本保存
在黑龙江中医药大学标本馆。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm);流动相:甲醇 － 0. 1%磷酸(80 ∶ 20);流速:
1. 0 mL /min;柱温:35 ℃;检测波长:210 nm。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取齐墩果酸、熊果酸
对照品，用甲醇超声溶解配成含 0. 13 mg /mL齐墩果酸、0. 78
mg /mL熊果酸的混合对照品溶液。
2. 3 样品溶液的制备 精密称取叶 1 g，置于 250 mL 园底
烧瓶，加入 25 mL 甲醇，回流提取 2 h，过滤，回收甲醇，溶解
于 10 mL水中，石油醚萃取两次，每次 20 mL，水层回收至
干，25 mL甲醇溶解，过滤，定容至 25 mL量瓶中，用 0. 45 μm
的微孔滤膜过滤，取续滤液作为样品溶液。
2. 4 系统适用性试验 取熊果酸和齐墩果酸对照品溶液、
样品溶液按上述色谱条件，进样 20 μL，测得其 HPLC 图谱，
如图 1 所示，齐墩果酸和熊果酸的保留时间分别为 24. 6 min
和 26. 8 min;理论塔板数分别为 13 592 和 12 096;分离度为
1. 453;符合定量分析的要求。
2. 5 线性关系考察 精密量取上述对照品混合溶液 0. 1、
0. 3、0. 7、1. 1、1. 5 mL 至 5 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，
摇匀，各取上述溶液 20 μL 注入高效液相色谱仪，按上述色
谱条件测定，记录峰面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为
纵坐标，得齐墩果酸线性回归方程为 Y = 7 756 267 X +
10 973，r = 0. 999 8;熊果酸线性回归方程为 Y = 7 951 888X
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2010 年 12 月
第 32 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
December 2010
Vol. 32 No. 12
AB
图 1 蓝萼香茶菜 HPLC图谱
A. 对照品 B. 样品 1. 齐墩果酸 2. 熊果酸
+ 17 163，r = 0. 999 5;表明当齐墩果酸进样量在 2. 6 ～
39. 0 μg，熊果酸进样量在 1. 6 ～ 23. 4 μg 之间时，进样量与
峰面积呈良好的线性关系。
2. 6 精密度实验 取同一对照品溶液，重复进样 5 次，每次
20 μL，按上述色谱条件测定齐墩果酸和熊果酸峰面积，计
算齐墩果酸峰面积的 RSD 为 1. 59%，熊果酸峰面积的 RSD
为 1. 69%，表明仪器精密度良好。
2. 7 重复性实验 按 2. 3 项样品溶液制备方法处理同一样
品 5 份，各吸取 20 μL，按上述色谱条件测定，分别测定齐墩
果酸和熊果酸峰面积，计算齐墩果酸峰面积的 RSD 为
1. 52%，熊果酸峰面积的 RSD为 2. 20%，表明实验方法重复
性良好。
2. 8 稳定性实验 取蓝萼香茶菜，依 2. 3 项制备供试品溶
液，在 0，2，4，8，12，24 h 各吸取 20 μL，按上述色谱条件测
定，测得齐墩果酸的峰面积 RSD为 1. 35%，熊果酸的峰面积
RSD为 1. 14%。实验表明，样品溶液在 24 h内基本稳定。
2. 9 加样回收率实验 称取 5 份已知含量的药材各 0. 5 g，
精密称定。分别精密加入含齐墩果酸、熊果酸的混合对照品
溶液 1 mL(含齐墩果酸 1. 3 mg，熊果酸 2. 3 mg)。5 份样品
按 2. 3 项样品溶液的制备方法处理，依上述色谱条件测定，
计算回收率，结果见表 1。
2. 10 样品含量测定 精密称取叶、茎各 1 g，分别置于 250
mL圆底烧瓶，各加入 25 mL 甲醇，回流提取 2 h，过滤，回收
甲醇，10 mL水溶解，石油醚萃取两次，每次 20 mL，水层回收
至干，再用 25 mL 甲醇溶解，过滤，定容至 25 mL 量瓶中，用
0. 45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液 。按
以上色谱条件进行测定，测得叶中齐墩果酸平均含量
0. 109 8 mg /g(n = 5，RSD = 1. 92%)，熊果酸平均含量
0. 143 92 mg /g(n = 5，RSD = 3. 04%);茎中齐墩果酸平均
表 1 回收率实验结果(n = 5 )
化合物 序号
加入量
/mg
回收量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
齐墩果酸 1 0. 118 0. 116 98. 16
2 0. 118 0. 115 97. 26
3 0. 118 0. 113 95. 52 97. 21 0. 75
4 0. 118 0. 115 97. 77
5 0. 118 0. 115 97. 34
熊果酸 1 0. 247 0. 245 99. 65
2 0. 247 0. 246 99. 61
3 0. 247 0. 244 98. 87 98. 76 0. 92
4 0. 247 0. 244 99. 05
5 0. 247 0. 238 96. 63
含量 0. 026 3 mg /g(n = 5，RSD = 1. 58% )，熊果酸平均含
量 0. 028 1mg /g(n = 5，RSD = 2. 66% )。
3 讨论
3. 1 样品液制备方法的优化 齐墩果酸、熊果酸的提取溶
剂主要有氯仿、乙醇、乙醚，提取方法有超声法、索式提取法、
回流提取法［7-8］。本实验用甲醇作为溶剂，采用超声法、回流
方法提取，结果表明回流法效果好，进一步考察去除叶绿素
的方法，分别考察石油醚萃取或石油醚先脱脂后提取，结果
表明石油醚萃取效果好，同时，采用正交设计，对提取溶剂体
积、提取次数、提取时间、石油醚萃取次数、石油醚用量进行
考察，确定最佳工艺。
3. 2 齐墩果酸、熊果酸互为同分异构体，极性相近，两者不
容易分开。本实验通过甲醇 － 0. 1%磷酸以不同比例(75∶
25、78 ∶ 22、80 ∶ 20)混合作为流动相，考察其分离度，结果
210 nm为检测波长，流速 1. 0 mL /min，甲醇:0. 1%磷酸(80
∶ 20)，样品中齐墩果酸、熊果酸分离较好，故本试验最终确
定此色谱条件。
参考文献:
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第 32 卷 第 12 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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