全 文 ：·研究论文·
[基金项目] 　安徽省 2001年度重点科研项目(编号:01023018)　[ 作者简介] 　唐丽琴 ,女 ,硕士 ,主管药师 ,电话:0551-2283379
高效液相色谱法测定枇杷叶提取物中齐墩果酸与熊果酸的含量
唐丽琴 ,刘圣 ,李矗 ,陈礼明　(安徽省立医院 , 安徽 合肥 , 230001)
[ 摘要] 　目的:建立同时测定枇杷叶提取物中齐墩果酸与熊果酸含量的方法。方法:采用 HPLC 法。选用 C18柱(250 mm×
4.6 mm , 5 μm);检测波长:220 nm;流动相:甲醇-水(94∶6 ,每100 mL加0.08 mL冰醋酸);流速:0.6 m L·min-1;柱温:25 ℃。
结果:齐墩果酸进样量在0.45 ～ 2.70 μg范围内 , 熊果酸进样量在0.46 ～ 2.76 μg范围内线性关系良好。齐墩果酸与熊果酸的
平均回收率分别为98.3%(RSD为3.15%)和97.7%(RSD为2.97%)。结论:该法方便 、快速 、准确 ,可作为枇杷叶提取物中
齐墩果酸与熊果酸含量测定方法。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;枇杷叶;齐墩果酸;熊果酸;含量测定
[中图分类号] R927.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)12-0725-02
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Eriobotrya japonica(Thumb.)Lindl extrac-
tive by HPLC
TANG Li-qin , LIU Sheng , LI Chu , CHEN Li-ming (Department of Pharmacy , Anhui P ro vincial Hospital , Anhui Hefei
230001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a method for determination of oleanolic acid and ursolic acid in Eriobotrya japonica(Thumb.)Lindl
extractive.METHODS　HPLC method was used.The samples were separated on a C18(250 mm×4.6 mm , 5μm)column with the mobile
phase of methanol-water(94∶6), which contained 0.08% lacial acetic acid.The detection wavelength was set at 220 nm.Flow rate was
0.6 mL·min-1.Column temperature was 25 ℃.RESULTS　The linear ranges of determination of oleanolic acid and ursolic acid were 0.45
-2.70 μg and 0.46-2.76μg respectively.The average recoveris of 98.3% with RSD of 3.15%, for oleanolic acid and 97.7% with RSD
of 2.97% for ursolic acid were obtained.CONCLUSION　The method is sensitive , rapid and accurate and suitable for the determination of
oleanolic acid and ursolic acid in Eriobotrya japonica(Thumb.)Lindl extractive.
KEY WORDS:HPLC;Eriobotrya japonica(Thumb.)Lindl;oleanolic acid;urso lic acid;assay
　　枇 杷叶为 蔷薇科 植物 枇杷 [ Eriobotrya japonica
(Thumb.)Lindl] 的干燥叶 , 含有多种萜类化合物 ,齐墩果酸
与熊果酸是其主要有效成分 , 其含量测定主要以薄层色谱
法[ 1 ～ 3] 。HPLC 法同时测定枇杷叶中两者的含量 , 尚未见报
道。本研究采用 HPLC 法测定枇杷叶不同浓度乙醇提取物
中齐墩果酸与熊果酸的含量 ,现报道如下。
1　仪器与试药
SSI高效液相色谱仪 , 525 双波长紫外/可见光检测器 ,
ANASTAR色谱数据处理系统(美国科学仪器公司);齐墩果
酸(0709-9803)、熊果酸(742-200111)(中国药品生物制品
检定所);D-101 净品型大孔吸附树脂(天津农药股份有限公
司树脂分公司 , 批号 001104);甲醇为色谱纯 , 水为纯化水 ,
枇杷叶提取物为自制 ,其他试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　SUNTEK 色谱柱:C18(250 mm ×4.6 mm ,
5 μm);检测波长:220 nm;流动相:甲醇-水(94∶6), 且每
100 mL中加0.08 mL冰醋酸;流速:0.6 mL·min-1;柱温:
25 ℃;齐墩果酸的 t R=21.6 min;熊果酸 t R=22.6 min。
2.2　对照品溶液的配制　分别精密称取减压干燥至恒重的
齐墩果酸与熊果酸对照品4.5 mg和4.6 mg , 分别置10.0 mL
量瓶中 , 加甲醇溶解并定容。取上述溶液各 5.0 mL放入
10.0 m L量瓶中 ,制成对照品混合溶液 , 齐墩果酸与熊果酸
的浓度分别为0.225 , 0.230 g·L-1 。
2.3　枇杷叶提取物的制备　称取枇杷叶适量 , 用乙醚脱脂 ,
分别用不同浓度乙醇回流提取2次 ,合并提取液 ,加0.5%活性
炭脱色 ,滤过 ,回收乙醇 、浓缩 ,浓缩物过大孔吸附树脂柱, 先
用水洗至流出液澄清 , 弃去流出液 , 再用 90%乙醇为洗脱液
进行洗脱 ,收取流出液, 回收乙醇 ,浓缩 , 70 ℃真空干燥即得。
2.4　工作曲线的建立　取对照品混合溶液2.0 , 4.0 , 6.0 ,
8.0 , 10.0 , 12.0 μL进样 , 按上述色谱条件测定峰面积 , 以峰
面积值为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,经回归得直线方程为:
Y 齐墩果酸=4.286 ×10-6 × A -4.328 ×10-2(r =
0.998 4)
Y熊果酸=5.191×10-6×A-5.805×10-2(r =0.997 5)
结果表明 ,齐墩果酸进样量在0.45 ～ 2.70μg范围内 , 熊
果酸进样量在0.46 ～ 2.76 μg范围内线性关系良好。
2.5　精密度试验　精密吸取对照品混合溶液10.0 μL , 在上
述色谱条件下重复进样 4 次 ,分别测定峰面积值。结果齐墩
果酸 、熊果酸平均峰面积分别为628 100 , 548 483;RSD 分别
为2.88%, 2.69%。
2.6　稳定性试验　结果样品12 h内稳定 , 供试品中齐墩果
酸 、熊果酸含量的 RSD 分别为2.62%和1.76%(n=4)。
2.7　加样回收率试验　精密称取减压干燥至恒重的齐墩果
酸与熊果酸对照品适量 , 加甲醇制成各含0.045 g·L-1 ,
·725·中国医院药学杂志 2004年第 24卷第 12期 Chin Hosp Pharm J , 2004 Dec , Vol 24 , No.12
0.230 g·L-1的混合对照品溶液。另精密称取 4 份已知含量
的枇杷叶提取物约20 mg , 分别加入对照品溶液5.5 mL , 甲
醇溶解并定容至25 mL量瓶中 , 0.45 μm滤膜过滤 ,在给定的
色谱条件下分别进样20 μL分析 , 计算回收率。结果平均回
收率齐墩果酸 、熊果酸分别为98.3%, 97.7%;RSD 分别为
3.15%, 2.97%。
2.8　样品测定　精密称定用不同浓度乙醇提取的枇杷叶提
取物适量 , 在给定的色谱条件下进样分析 , 用外标法计算样
品中齐墩果酸与熊果酸的含量。结果齐墩果酸 、熊果酸平均
含量分别为0.96%, 6.47%;RSD分别为3.46%, 1.03%。对
照品和样品液相色谱图见图 1。
图 1　对照品与样品的 HPLC图谱
A.对照品;B.样品;1-齐墩果酸;2-熊果酸
Fig 1　HPLC chromatograms of two samples and standard
A.standard;B.sam ple;1-oleanolic acid;2-ursolic acid
3　讨论
齐墩果酸与熊果酸均属三萜类化合物 , 结构相似 , 两者
极性几乎无差别。在采用HPLC法同时测定枇杷叶中的该两
种成分时 , 曾按文献方法[ 4.5] , 用甲醇-水 、甲醇 、甲醇-水-乙
腈等各种不同比例的流动相 ,均不能有效地将齐墩果酸和熊
果酸分离 ,以甲醇-水(94∶6),且每100 m L中加0.08 mL冰醋
酸为流动相 ,则较好地将两者分离。经过正交优选提取工艺
后 ,采用最佳提取条件:95%乙醇 、10 倍量提取 3 次 , 每次
90 min进行提取 , 枇杷叶提取物的得率约为 6%。
参考文献:
[ 1] 　冀春茹 ,袁珂 , 胡润 ,等.冬凌草中熊果酸 、齐墩果酸的薄层扫
描测定[ J] .中医药学报 , 1997 ,(6):43.
[ 2] 　张秋红 ,刘素清 ,熊绍银.齐墩果酸成分薄层分析条件综述[ J] .
时珍国药研究 , 2000 , 11(5):467.
[ 3] 　伍丕娥, 邓晓鸿.薄层扫描法测定降糖颗粒中熊果酸的含量
[ J] .中成药 , 1997 , 19(6):12.
[ 4] 　王忠壮 , 陈琰 , 宋洪杰.等.太白木葱中齐墩果酸的含量测定
[ J] .第二军医大学学报 , 2000 , 21(5):473.
[ 5] 　袁珂 ,李根林 ,李俊林 ,等.车前草中熊果酸 、齐墩果酸的 HPLC
测定[ J] .中草药 , 1999 , 30(12):901.
[ 收稿日期] 2004-03-25
[基金项目] 　广西自然科学基金项目(编号:桂科自 9912038)　[ 作者简介] 　焦杨 ,女 ,博士 ,讲师　[ 通讯作者] 　黄仁斌 ,男 ,博士 , 教授 ,电
话:0771-5358272 , E-mail:huangrenbin518@sohu.com
玉郎伞提取物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
焦杨1 ,段小群1 ,孔晓龙2 ,蒋伟哲2 ,黄仁彬1　(1.广西医科大学药理学教研室 ,广西 南宁 530021;2.广西医科大学第一
附属医院 ,广西 南宁 530021)
[ 摘要] 　目的:研究玉郎伞(YLS)对心肌缺血再灌注损伤(M IRI)的影响。方法:以 Wistar大鼠制备 MIRI 模型(结扎冠状动
脉5 min后再灌注30 min),观察 YLS 对心肌梗死面积及心肌组织丙二醛(MDA)含量 、超氧化物歧化酶(SOD)活力及血清中
乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活性生化指标的影响。结果:YLS 明显降低心肌梗死范围 、提高心肌组织中 SOD 活
力 、降低其 MDA 含量 ,同时降低血清中 CK 和 LDH 活力(P<0.01或 P <0.05)。结论:YLS 对大鼠心肌缺血再灌注损伤具
有显著的保护作用。
[ 关键词] 　玉郎伞;心肌缺血再灌注损伤;心肌梗死面积;超氧化物歧化酶;乳酸脱氢酶
[中图分类号] R282　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)12-0726-02
Protective effect of Yulangsan extractive on myocardial ischemia reperfusion injury in rats
JIAO Yang
1 ,DUAN Xiao-qun1 ,KONG Xiao-long2 , JIANG Wei-zhe2 ,HUANG Ren-bin1(1.Department of Pharma-
cology , Guangxi Medical University , Guangxi Nanning 530021 , China;2.The First Affiliated Hospital , Guangxi Medical University ,
Guangxi Nanning 530021 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the effect of YLS on myocardial ischemia reperfusion injury in rats.METHODS　An experi-
mental M IRI(Co ronary artery lig ation for 5 min follow ed by reperfusion fo r 30 min.)in wistar rats were used for the determination
of the area of myocardial ischemia, the activities of superoxide dismutase(SOD), lactate dehydrogenase(LDH)and creatine kinase
(CK), and the content of MDA in myocardium or serum follow ing the pretrea tment w ith YLS.RESULTS　YLS could significantly
decrease the content of MDA and the activity of CK and markedly reduce the area of myocardial ischemia and increase the activity of
SOD(P<0.01 or P <0.05).CONCLUSION　YLS has a significant pro tective effect on myocardial ischemia reperfusion injury in
rats.
KEY WORDS:Yulangsan;myocardial ischemia reperfusion injury;myocardial ischemia area;superoxide dismutase;lactate dehydroge-
nase
·726· 中国医院药学杂志 2004年第 24卷第 12期 Chin Hosp Pharm J , 2004 Dec , Vol 24 , No.12