全 文 ：[ 作者简介] 　谭永红 ,女 ,学士 ,主管药师 ,电话:028-86570544
高效液相色谱法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸 、熊果酸的含量
谭永红1 ,姜云平1 ,曾仁杰1 , 蒲健2 ,段艳冰1　(1.成都军区总医院 , 四川 成都 610083;2.贵阳医学院药学系 98 级实
习生)
[ 摘要] 　目的:建立 HPLC 法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸 、熊果酸的含量。方法:以 SB-C18柱(4.6 mm×150 mm , 5 μm)为分
离柱 ,流动相:甲醇-水(85∶15),检测波长:220 nm。结果:齐墩果酸在0.36 ～ 1.80μg范围内线性关系良好 , r =0.9998 , 样品
中齐墩果酸的含量为3.68%(mg/ g),其回收率为:97.40%, RSD 为2.10%(n =5);熊果酸在0.36 ～ 1.44 μg范围内线性关系
良好 , r=0.9980 , 样品中熊果酸的含量为6.49%(mg/ g), 其回收率为101.21%, RSD为2.40%(n =5)。结论:本法简便 、准
确 、可靠。
[ 关键词] 　高效液相色谱法;胃炎停胶囊;齐墩果酸;熊果酸;含量测定
[ 中图分类号] R927　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)02-0071-02
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Weiyanting capsules by HPLC
TAN Yong-Hong , JIANG Yun-Ping , ZEN Ren-Jie , et al(General Hospital of Chengdu Command , Sichuan Chengdu
610083 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To establish a method fo r determination of oleano lic acid and ursolic acid in Weiyanting capsules by
HPLC.METHODS　In the method SB-C18 column as the stationary phase , methanol:water(85∶15)as mobile phase.the w ave-
length of detection was 220 nm.RESULTS　The linear rang of oleanolic acid was 0.36 ～ 1.80 μg(r =0.9998), the content of
oleanolic acid in samples was 3.68%(mg/g), the recovery was 97.40% with RSD 2.10%(n=5);The linear range of ursolic acid
was 0.36 ug ～ 1.44 ug(r=0.9980), the content o f urso lic acid in samples w as 6.49%(mg/ g), the recovery w as 101.21% with
RSD 2.40%(n=5).CONCLUSIONS　This method w as proved to be simple , accurate and reliable.
KEY WORDS:HPLC;Weiyanting;o leanolic acid;ursolic acid;quantitative determination
　　胃炎停胶囊处方系由白花蛇舌草 、半枝莲 、延胡索 、高良
姜 4 味中药组成 ,具有消炎止痛 、理气健胃的作用。其主要
原料白花蛇舌草为茜草科植物白花蛇舌草的干燥全草 , 其主
要成分齐墩果酸 、熊果酸可作为衡量原料与制剂质量优劣的
指标之一。本文采用高效液相色谱法测定方中白花蛇舌草
中齐墩果酸 、熊果酸的含量 , 为胃炎停胶囊制剂的质量标准
研究奠定基础。
1　仪器与试药
HP1100 型高效液相色谱仪 , B1315A 紫外可见光检测器
(HP chemstation plus),胃炎停口服液(自制 , 批号 010602),
胃炎停胶囊(自制 , 批号 010811), 白花蛇舌草 、半枝莲 、延胡
索 、高良姜(本院提供),齐墩果酸对照品 、熊果酸对照品(中
国药品生物制品检定所);甲醇为色谱醇;纯化水;其它试剂
均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件[ 1 ～ 4] 　色谱柱:SB -C18柱(4.6 mm ×
150 mm , 5μm)流动相:甲醇-水(85∶15), 流速:0.8 m L·
min-1 ,检测波长:220 nm , 柱温:25℃, 数据处理为外标法峰
面积定量。分离图谱见图 1。
2.2　线性关系考察　精密称取齐墩果酸 、熊果酸对照品各
1.80 mg ,用甲醇定容成0.18 g·L-1的对照品溶液 ,精密吸取
2 , 4 , 6 , 8 , 10 μL 分别进样测定。 以对照品进样量(μg)为横
坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲线得回归方程。
熊果酸:Y =160.51 X+4.88 r=0.9980 , 在0.36 ～ 1.44 μg
图 1　齐墩果酸对照品(A)、熊果酸对照品(B)和样品(C)色谱图
1.齐墩果酸(t R1=10.69 min);2.熊果酸(tR2=11.61 min)
Fig 1　Ch romatograms of chemical reference substances of oleanolic acid
(A)、ursolic acid(B)and sample(C)
1.oleanolic acid(t R1=10.69 min);2.ursolic acid(tR2=11.61 min)
范围内线性关系良好;齐墩果酸 :Y =380.89 X-35.48 , r
=0.9998 ,在0.36 ～ 1.80 μg范围内线性关系良好。
2.3　精密度试验　分别精密吸取齐墩果酸 、熊果酸对照品
溶液 10 , 8 μL , 重复进样测定。结果齐墩果酸含量为1.79μg
(n =5), RSD为1.46%。熊果酸含量为1.38μg(n =5), RSD
为3.30%。
2.4　回收率测定　精密称取胶囊内容物(约 1 g),加入精密
称取的齐墩果酸 、熊果酸对照品各0.50 mg ,再将粉末置于索
氏提取器中 ,按样品的含量测定项下同法处理。最后 , 用甲
醇定容于 10 mL 容量瓶中 ,按上述色谱条件进行测定 , 进样
量 5 μL ,计算其回收率 , 结果齐墩果酸为97.4%, 熊果酸为
101.2%, RSD 分别为2.1%, 2.4%。
2.5　样品的含量测定　精密称取胶囊内容物(约 1 g)于索
氏提取器中 ,加入 200 mL 石油醚加热提取至无色 , 弃去石
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油醚再用 300 m L苯回流提取 5 h , 将苯提取液挥干 ,用甲醇
溶解 ,过滤 , 于 10 mL 容量瓶中定容。用上述色谱条件进行
测定 ,进样量 10 μL ,结果见表 1(按原药材计算含量)。
表 1　胃炎停胶囊中齐墩果酸 、熊果酸含量测定结果
Tab 1 　Results of determination of oleanolic acid and ursolic
acid in Weiyanting capsules
样品 含量/mg·g
-1
010811 010811 020215 011124 020215
x
mg·g-1
RSD
%
齐墩果酸 3.60 3.72 3.84 3.69 3.56 3.68 2.80
熊果酸 6.87 6.70 6.35 6.18 6.33 6.49 4.42
2.6　胃炎停胶囊和口服液中齐墩果酸 、熊果酸的含量考查
　取本室自制的 3 批胃炎停胶囊和 3 批胃炎停口服液 , 用上
法测定齐墩果酸 、熊果酸的含量。胶囊的含量测定依照“样
品的含量测定” , 结果见表 2。口服液的含量测定操作:取胃
炎停口服液 5 支 ,混合均匀 , 置分液漏斗中 , 用苯(20 , 20 , 15
mL)萃取 3次 ,合并萃取液 , 水浴蒸干 , 加甲醇适量使溶解 ,
定量转移置 10 mL 容量瓶中 , 定容。 按上述色谱条件进行
测定 ,进样量 10 μL ,结果见表 2。
表 2　胃炎停口服液与胃炎停胶囊中齐墩果酸 、熊果酸的含
量比较(mg·g-1)
Tab 2　Comparison of content of oleanolic acid and ursolic acid
in Weiyanting oral liquid and Weiyanting capsules
样品
样品 1/ % 样品 2/ % 样品 3/ % x RSD/ %
齐墩
果酸
熊
果酸
齐墩
果酸
熊
果酸
齐墩
果酸
熊
果酸
齐墩
果酸
熊
果酸
齐墩
果酸
熊
果酸
A 0.46 0.44 0.44 0.45 0.48 0.46 0.46 0.45 3.9 3.7
B 3.60 6.87 3.72 6.70 3.84 6.35 3.72 6.64 3.23 4.03
注:A 为胃炎停口服液 ,B为胃炎停胶囊
由表中数据可得出:胃炎停口服液中齐墩果酸 、熊果酸
的含量均远低于胃炎停胶囊中齐墩果酸 、熊果酸的含量。
3　讨论
胃炎停胶囊处方中 , 白花蛇舌草为君药 , 其主要成分为
齐墩果酸和熊果酸 ,齐墩果酸 、熊果酸为五环三帖类化合物 ,
为同分异构体 ,二者分离较难 ,经查阅文献知复方中白花蛇
舌草中齐墩果酸 、熊果酸的含量测定未见报道。本方为复方
制剂 ,样品处理困难 。曾利用齐墩果酸 、熊果酸的弱酸性特
性 ,采用 1%的氢氧化钾处理苯提取液 , 也曾利用丙酮的亲
水性处理苯提取液 , 去除亲脂性杂质 ,结果均不理想。本文
直接采用石油醚脱脂 ,苯液提取后甲醇定容上样。结果样品
中齐墩果酸 、熊果酸分离较好。 齐墩果酸的回收率为
97.40%, RSD 为2.10%。熊果酸的回收率为101.21%, RSD
为2.40%。
胃炎停口服液系水提醇沉后的制剂 , 方中白花蛇舌草中
的齐墩果酸 、熊果酸不溶于水 , 而溶于氯仿 、苯等亲脂性溶
剂。理论上胃炎停口服液中不含齐墩果酸和熊果酸 , 但我们
测定过程中发现胃炎停口服液中仍含有齐墩果酸 、熊果酸 ,
含量很低 ,为0.46%, 0.45%, 这可能是由于中药成分复杂 ,
在药材水提过程中产生了助溶作用。
参考文献:
[ 1] 　袁苛 ,李根林 ,李俊芝 ,等.车前草中熊果酸 、齐墩果酸的 HPLC
测定[ J] .中草药 , 1999 , 30(12):901.
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[ 3] 　王玉萍 ,朱兆仪 ,王春兰 ,等. 木属植物总皂甙和齐墩果酸的
含量测定[ J] .中国中药杂志 , 1998 , 23(9):518.
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的含量[ J] .中国药事 , 1997 , 11(4):253.
[ 收稿日期] 2003-01-23
[ 作者简介] 　李朴 ,女 ,学士 ,实验师 ,电话:0379-4944489
糜蛋白酶应用于生物检材中地西泮含量的测定
李朴 ,周海梅 ,马锦琦　(河南科技大学法医学系 , 河南 洛阳 471003)
[ 摘要] 　目的:测定生物检材中地西泮的含量 ,提高地西泮的提取率。方法:兔肝经糜蛋白酶水解 、固相萃取法提取后 , 用气
相色谱-质谱联用仪分析地西泮的含量。结果:酶解后的肝脏中地西泮的检出量明显增加 , 每克肝组织添加 1000u 糜蛋白酶
时效果最佳。结论:糜蛋白酶的应用提高了生物检材中地西泮的提取率。
[ 关键词] 　酶解;糜蛋白酶;固相萃取;气相色谱-质谱联用分析;地西泮
[ 中图分类号] R991　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2004)02-0072-03
Determination of diazepam in biological samples by chymotrypsin hydrolysis
LI Pu , ZHOU Hai-Mei , MA Jin-Qi(Henan University of Science and Technology , Henan Luoyang 471003 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To determine the contents of diazepam in biological samples and to improve its rate of extraction.
METHODS　The samples were hydroly zed by chymotrypsin of different quantity , and diazepam was extracted by solid-phase
columns and its contents w ere analy zed by gas chromatog raphy-mass spectrometry(GC-MS).RESULTS　I t is shown tha t the con-
tents of diazepam increased w hen the amount of chymotrypsin was increased in the sample.CONCLUSIONS　This method improved
the ex traction rate of diazepam in biological samples.
KEY WORDS:enzyme hydrolysis;chymotrypsin;solid-phase extraction;GC-MS;diazepam
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