全 文 ：收稿日期:2007-05-12;　修订日期:2007-11-27
作者简介:罗朵生(1983-),女(汉族),湖北通城人 ,现为广东药学院在读
硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事药物化学的研究工作.
＊通讯作者简介:郭　姣(1961-), 女(汉族),江西永修人 , 现任广东药学
院教授 , 主任医师 ,博士学位 ,主要从事代谢紊乱性疾病的防治及中药新
药的开发研究工作.
高效液相色谱法与薄层扫描法测定
女贞子中齐墩果酸含量的比较
罗朵生 , 郭　姣＊ , 何　伟 ,李　勇
(广东药学院 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 研究用高效液相色谱测定女贞子中齐墩果酸含量的方法 ,并与薄层扫描色谱法比较。方法 色谱柱为 kroma-
silC18(5 μm, 250 mm×4.6 mm);柱温 30℃;流动相甲醇 -水(85∶15);流速 0.7ml· min-1;检测波长为 204nm。结果
齐墩果酸在 0.645 6 ～ 4.304 μg范围内线性关系良好 , r=0.999 9(n=5), 平均回收率为 101.8%, RSD=0.75%。结论
高效液相色谱法比薄层扫描色谱法更灵敏 、简便 、准确 ,精密度好。
关键词:高效液相色谱法;　薄层扫描色谱法;　女贞子;　齐墩果酸
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)06-1411-02
AComparisonofHPLCwithTLCSinDeterminationofOleanolicAcid
LUODuo-sheng, GUOJiao＊ , HEWei, LIYong
(GuangdongPharmaceuticalUniversity, Guangzhou510006 , China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofthecontentofoleanolicacid, andcomparethere-
sultsbyHPLCandTLCS.MethodsWithakromasilC
18
(5 μm, 250 mm×4.6 mm)at30℃, methylalcohol-water(85∶15)
wasusedasthemobilephase, theflowratewas0.7ml/min, thewavelengthwas204nm.ResultsTheoleanolicacidhadagood
linearrelationshipwithHPLCintherangeof0.645 6～ 4.304μg, r=0.999 9.Theaveragerecoverywas101.8%andRSDwas
0.75%.ConclusionItisprovedthattheHPLCismorereliable, simple, accurateandreproduciblethanTLCSis.
Keywords:HPLC;　TLCS;　Oleanolicacid;　Comparison
　　女贞子系木犀科植物女贞 LigustrumlucidumAit.的干燥成熟
果实 , 主要成分为齐墩果酸 、熊果酸 、乙酰齐墩果酸 、女贞子苷
等 [ 1] 。具有补肝肾阴 、乌须明目的功能。 《中国药典》 2005年版
Ⅰ部只对女贞子中的齐墩果酸采用薄层色谱法进行定量控
制 [ 2] , 但因女贞子中同时还含有熊果酸 , 为齐墩果酸的同分异构
体 , 化学结构与性质极为相似 ,以薄层色谱扫描法定量时 ,齐墩果
酸与熊果酸两者无法分离导致含量测定不确。 本文对高效液相
色谱法与薄层色谱法测定女贞子中齐墩果酸含量进行了比较。
现将结果报道如下。
1　仪器与试剂
WATERS2695/2996 型高效液相色谱仪 (美国);CAMAG
TLCSCANNER3薄层色谱扫描仪(瑞士 CAMAG);UV-754型分
光光度计(上海精密科学仪器公司);ZF-2型三用紫外仪(上海
市安亭电子仪器厂);齐墩果酸(110790-200304购自中国药品
生物制品检定所 , 供含量测定用);硅胶 G(青岛海洋化工厂);女
贞子药材(购自广州致信中药饮片有限公司);乙腈 、甲醇为色谱
纯 , 纯净水 ,其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　高效液相色谱法
2.1.1　对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 10.76
mg,加甲醇溶解 , 制成每毫升含 0.538 mg的溶液 , 作为对照品
溶液。
2.1.2　供试品溶液的制备 取女贞子粗粉约 0.5 g(批号
200510170),精密称定 , 加乙醇 25 ml, 加热回流 30 min, 放冷 ,滤
过 , 药渣加乙醇同上重复回流两次 , 合并滤液 , 蒸干 , 残渣加无水
乙醇微热使溶解并转移至 10 ml量瓶中 , 加乙醇至刻度 , 摇匀 ,
即得。
2.1.3　最大吸收波长的选择 吸取齐墩果酸对照品溶液(0.538
mg· ml-1)1 ml, 置 10 ml量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 用紫外可
见分光光度计 ,从 200 ～ 400 nm全波长扫描 , 齐墩果酸最大吸收
波长为 204 nm。见图 1。
2.1.4　色谱条件与系统适用性实验 色谱柱为 kromasilC
18
(5
μm, 250mm×4.6 mm);流动相为甲醇 -水(85∶15);检测波长
为 204 nm;流速 0.7 ml· min-1;柱温:30℃。自动进样器进样。
在此色谱条件下 ,得色谱图见图 2 ～ 3。峰形对称 , 理论板数以齐
墩果酸峰计在 3 000以上。
2.1.5　线性关系的考察 吸取对照品溶液 1, 2, 5, 10, 15 μl, 注入
液相色谱仪中 ,按照上述色谱条件测定峰面积积分值。以齐墩果
酸微克数为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 , 求得直线方程为 Y
=1 006 577.61X-58 700.91, r= 0.999 9。线性范围为 0.645 6
～ 4.304μg。
图 1　齐墩果酸最大吸收波长扫描图
2.1.6　精密度实验 吸取同一供试品溶液 10 μl, 注入液相色谱
仪中 , 测定峰面积积分值 , 连续 6次 , 齐墩果酸峰面积积分值 RSD
=0.75%(n=6)。结果表明仪器精密度良好。
2.1.7　稳定性实验 吸取供试品溶液 10 μl,注入液相色谱仪中,
测定峰面积积分值 ,然后分别在 2, 4, 8, 24h再进样测定。结果表
明 , 供试品在 24h内稳定性良好 ,齐墩果酸 RSD=0.39%(n=6)。
2.1.8　重复性实验 取同一批样品 (批号 20051017), 按
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.6 时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期
“ 2.1.2”项下的方法制备 6份供试品溶液 , 按上述色谱条件测
定 , 测得 RSD=0.75%(n=6)。
图 2　对照品色谱图
图 3　供试品色谱图
2.1.9 　回收率实验 精密称取已知含量的供试品 (批号
20051017)适量(相当于齐墩果酸 1.076mg), 加入齐墩果酸对照
品 2 ml, 依法操作 , 计算回收率。结果见表 1。 平均回收率为
101.8%, RSD为 0.75%。
表 1　加样回收率测定结果
编
号
取样量
m/g
样品中齐墩
果酸含量
m/mg
加入齐墩
果酸的量
m/mg
测得的齐墩
果酸量
m/mg
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.150 1 1.066 8 1.076 2.174 102.9
2 0.150 6 1.070 4 1.076 2.152 100.5
3 0.150 5 1.069 6 1.076 2.166 101.9
4 0.150 2 1.067 5 1.076 2.162 101.7 101.8 0.75
5 0.152 2 1.081 7 1.076 2.177 101.8
6 0.148 1 1.052 6 1.076 2.150 102.0
　　n=6
2.2　薄层扫描色谱法
2.2.1　色谱条件 展开剂为环己烷 -丙酮 -醋酸乙酯 -甲酸
(5∶2∶1∶0.1);显色剂为 10%硫酸乙醇溶液;扫描波长 λs=
530nm, λR=700nm。
2.2.2　供试品溶液的制备 与 “ 2.1.2”项下同。
2.2.3　对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 10.76 mg,
加甲醇溶解 , 制成每毫升含 1.076 mg的溶液 ,作为对照品溶液 。
2.2.4　线性关系的考察 吸取对照品溶液 2, 4, 6, 8, 10 μl点于
同一硅胶 G薄层板上扫描 , 按照上述色谱条件测定峰面积积分
值。以齐墩果酸微克数为横坐标 ,以吸收度积分值为纵坐标 ,计
算回归方程 Y=1620.7X+1280.7, r=0.9964, 线性范围为:2.02
～ 10.1 μg。
2.3　结果分析
2.3.1　HPLC法 取同一批样品(批号:20051017), 按照 “ 2.1.2”
项下的供试品制备方法制备供试品溶液 4份 ,分别精密吸取对照
品溶液与供试品溶液各 10 μl, 注入液相色谱仪 ,每份重复测定 2
次 , 计算。测定结果见表 2。
2.3.2　TLCS法 分别吸取各供试品溶液 6 μl, 对照品溶液 6, 8
μl交叉点于同一薄层板上 , 按上述方法展开 、扫描 , 测量供试品
与对照品吸收度积分值 , 测定 , 计算 , 即得。色谱图见图 4, 结果
见表 2。
1, 2, 3, 5, 6, 8, 9, 10供试品　 4, 7标准品
图 4　齐墩果酸薄层色谱扫描图
表 2　高效液相色谱法与薄层扫描色谱法含量测定结果比较
mg· g-1
序号
HPLC法
1 2
TLCS法
板 1　1　　　　2　 板 2　1　　　　2　
1 7.065 7.125 10.912 10.592 11.084 11.031
2 7.165 7.121 10.867 10.457 11.133 11.265
3 7.049 7.073 10.690 10.941 10.997 10.153
4 7.137 7.182 10.898 10.374 11.209 11.317
x 7.112 10.716 11.024
由表 2可以看出 , 对同一批样品的含量测定结果高效液相色
谱法小于薄层扫描色谱法。因齐墩果酸和熊果酸互为同分异构
体 , TLCS无法分开 ,导致定量不准确。且由于显色等诸多因素影
响 , 同板与异板间含量测定结果差别较大 , 所以高效液相色谱法
更为准确。
3　讨论
曾对甲酸-水(90∶ 10)、甲醇-水(85∶ 15)、乙腈-水(75∶
25)、乙腈-甲醇-水(64∶20∶16)等不同流动相做过对比研究 , 结
果发现以甲醇 -水(85∶15)作流动相即可得到满意的色谱峰
形 , 齐墩果酸与熊果酸峰形的分离度也较高。
《中国药典》 2005年版Ⅰ部对女贞子中的齐墩果酸采用薄层
色谱法进行定量控制 ,但因女贞子中同时还含有熊果酸 , 两者是
同分异构体 , 均为齐墩果烷型的五环三萜类化合物 ,理化性质极
为相似 , 以薄层色谱扫描法定量时 , 齐墩果酸与熊果酸只显示一
个斑点 ,两者无法分离从而导致定量不准确。而高效液相色谱法
测定女贞子中齐墩果酸含量 ,齐墩果酸峰与熊果酸峰分离度大于
1.5,理论板数以齐墩果酸峰计在 3 000以上。
将齐墩果酸对照品溶液在紫外可见分光光度计上从 200 ～
400 nm全波长扫描 , 结果齐墩果酸在 204 nm处有特征吸收 , 因
此确定 204 nm为齐墩果酸的检测波长。
参考文献:
[ 1 ] 　季宇彬.中药有效成分药理与应用 [ M] .哈尔滨:黑龙江科学技术
出版社 , 1995:322.
[ 2 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:31.
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.6