全 文 ：一 5 0 2 一 药物分析杂志 C h i nJ P ha rmA na l2 00 5 , 2 5 ( 5 )
H P L C 法测定绵马贯众中绵马贯众素的含量 ’
肖国君 ’ , 叶利明2 ` ’ , 吴纯洁’ , 叶茂’ , 万军 ’
( 1
. 西南农业大学 重庆 40 24 60 ;2 . 四川大学华西药学院 成都 61 X(] 4 1 ;3 . 成都中医药大学 成都 61 0 7 5)
摘要 目的 :建立绵马贯众中绵马贯众素的含量测定方法 。 方法 : 用 H P Lc 法 ,色谱柱为 v P 一 O D (S 4 . 6 ~ x 巧0 ~
,
5 林m ) ,
流动相为乙睛 一 氯仿 一 异丙醇 一 0 . 3% 磷酸 一 0 . 1% 十二烷基硫酸钠 ( 50 : 10 : 35 : or : 5 ) ,流速为 1 . o mL · ha n 一 ` ,检测波长为
28 6
n
m
。 结果 :绵马贯众素进样量在 0 . 04 一 1 . 28 林g 范围内线性关系良好 , ; = 0 . 9 998 。 平均回收率为 10 . 6% ( n = 9 ) 。 结论 :
该分析方法简便 、 准确 ,绵马贯众素峰与相邻峰分离完全 ,适用于绵马贯众中绵马贯众素的测定 。
关键词 : 高效液相色谱法 ;绵马贯众素 ;绵马贯众
H P L C A n a ly s i s o f D r y o c r a s s in e in D yr op et isr c ar s s ihr ioz m
a N a k a i
X I A o G u o 一 ju n ,
,
Y E Li 一 m i n g , ” , w u C h u n 一 ji e ,
,
Y E M a o ,
,
W A N J u n
3
( 1
.
S ou ht 一 w e s t Aigr e u l t u alr Uin v e sr i t y
,
Ch o n g q i n g 4 0 2 4 60 ; 2
. 矶 s t Ch i n a S e h o o l o f hP ~ a e y , S i e h u a n U n i v e rs i ty , C h e n酬 u 6 1印4 1 ;
3
.
Ch e n gd u U n i v e rs ity of Tadr i it
o n al C场ne s e M e击 ic n e , Ch e n gdu 6 l 0() 7 5 )
A b str
a ct O bj ce it
v e : oT d
e v e l o p an as s叮 of r t h e e o n t e nt o f 御o e ar s s i n e i n D理叩 t e廊 e二s ihr ios 、
N ak ia
.
M e t h o d
:
hT
e e o n t e n t o f d巧 o e ar s s i n e w a s d e t e rm i n e d b y H p L C
.
V p 一 OD S e o lu m n ( 4
.
6 m m x 15 0 m m
,
5
林m ) wa s u s e d w i th a m o b il e p h a s e o f a e e t o n i t ir l e 一 e hl o r ofO 。 一 i s o p or p a n ol 一 0 . 3% p h o s p h o ir e a e id 一 0 . 1% s o d i u m
l a u巧 1 s u愉 t e ( 5 0 : 10 : 3 5 : 10 : 5 ) a n d d e te e te d at 2 8 6 n m . hT e fl o w : at e w a s 1 . 0 m L · m i n 一 ’ eR s ul st : W i t h i n th e
ar n g e o f 0
.
04
一 1
.
2 8 林g , d汀 o e r a s s in e p r e s e n t e d a 即 o d l i n e a r r e l a t i o n s h ip b e tw e e n a m o u n t a n d p e a k aer a ( r =
0
.
9 9 9 8
, n = 6 )
.
hT
e a v e r a g e r e e o v e叮 w a s 10 0 . 6% ( n = 9 ) . C o n c l u s fo n : hT e m e t h o d 15 s im p l e a n d fe a s ib l e
.
I t 15
s u i t ab l e fo r ht e d e t e mr i
n at i o n o f dyr o e ar s s i n e e o n t e n t
.
K ey w o r ds
: H P LC : d巧 o e r a s s i n e : Dyr op t e r is e ar s s ihr 汤m a N a k a i
绵 马 贯众 为 鳞毛 蔗 科 植 物粗 茎 鳞 毛 菠 检测器 , 2 0 10 色谱工作站 。 K Q 一 10 型超声波清洗
( DyorP
et isr 。 ar s ihr 汤m 。 N ak ia ) 的干燥根茎及叶柄 器 (昆山市超声仪器有限公司 ) 。
残基 。 具有清热解毒 、 驱虫的功效 ,用于虫积腹痛 、 绵马贯众素对照品由本课题组从绵马贯众乙醚
疮疡。 其炭 品止血 , 用 于 崩漏川 。 绵 马贯 众素 提取液中析出粉末 , 再经硅胶柱层析分离得到 。 自
( d yr oc ar s in
e
)是绵马贯众的有效成分之一 ,其含量 制的绵马 贯众素为黄色板状结 晶 , 其分子式为
测定已有报道 [ , 一 ` ] , 本文对样品 的提取方法及测定 e 4 3 H o o , 。 ; 哪 2 0 5 一 2 10 ℃ ; IR ( K B r 压片 ) e m 一 `
条件进行了探讨 , 建立了在流动相中加人少量表面 3 2 1 8 , 2 9 6 5 , 16 3 7 , 1 6 15 , 15 6 0 , 一4 7 9 , 14 4 6 ; ` H NM R
活性剂以改善分离度的高效液相色谱法测定绵马贯 (4 0 M H z , c D cl 。 , MT s 内标 ) 6 0
.
9 8 ( 6 H
,
t
,
J = 7
众素的含量 ,方法准确 、 可靠 , 能使绵马贯众中多种 H z ) , 一 4 2 , 1 . 5 2 ( 一Z H , s ) , 一 7 2 ( 4 H , m , J 二 7 H z ) ,
成分得到较好分离 , 为绵马贯众及其炭品的质量控 2 . 7 4 ( 6 H , s ) , 3 . 18 ( 4 H , m , J 二 7 H z ) , 3 . 5 4 ( 4 H ,
制提供了依据 。 , ) , 3 . 5 4 ( Z H , s ) , 9 . 5 一 1 5 . 7 有 10 个经基峰 ,加 D Z
1 仪器与试药 。 后峰消失 ; M s m八 5 2 0 , 6 2 6 , 6 1 2 , 4 17 , 4以 , 2 0 8 ,
LC 一 10 AT V P 高效液相色谱仪 , SDP 一 10 A V P I% ;上述数据均与文献〔5 」报道的一致 。 用 HPL C
国家 “ 十五 ” 科技攻关项 目 ( Zo 1 B 7A 01 lA l)通讯作者 ( e o er s p o n di n g a u th o r )
药物分析杂志 C ll in J p har m A n a l 200 5, 2 5 ( 5 ) 一 5 03 一
测定 , 采用峰面积归一化法计算其含量为 98 % 。 乙
睛为色谱纯 ,水为重蒸水 , 其余试剂均为分析纯 。 绵
马贯众药材购自山东济南 、 黑龙江省牡丹江市 、 黑龙
江省阿城 (表 l ) , 经成都中医药大学药学院鉴定为
鳞毛蔗科植物粗茎鳞毛 旅 ( D yr op et isr 。ar s ihr loz m a
Nak ia )的干燥根茎 ;绵马贯众炭由成都中医药大学
提供 。
2 实验方法与结果
2
.
1 色谱条件 色谱柱 : V p 一 o D s ( 4 6 m m x l s o
m m
,
5 林m ) ;柱温 : 25 ℃ ;流动相 : 乙睛 一 氯仿 一 异丙
醇 一 0 . 3% 磷酸 一 0 . 1% 十二烷基硫酸钠 ( 50 : or : 35 :
10 : 5 ) ;流速 : 1 . 0 m L · m in 一 ’ ;检测波长 : 2 86 n m 。 在
此条件下 , 按绵马贯众素计算 , 理论板数不 小 于
3 0 0
。 绵马贯众素对照品及样品色谱图见图 1 。
20
B
3 0 以面幻
图 1 绵马贯众素对照品 ( A )及 4 号样品 ( B ) H PLC 图谱
F ig 1 H P LC e 】l r o m a t o gar m s o f er fe er n e e s ub s t a n e e ( A ) a n d s a m p l e
(N
o
.
4 )
1
. 绵马贯众素 ( d可 co asr s i n e , 20 . 6 3 m i n )
2
.
2 线性范围考察 精密称取绵马贯众素对照品
适量 , 用氯仿制成浓度为 0 . 5 1 16 m g · m L 一 ’ 的对照
品储备液 。 取此储备液分别稀释得到绵马贯众素浓
度为 2 5 5 . 8 , 12 7 . 9 , 6 3 . 9 5 , 3 1 . 9 8 , 15 . 9 9 , 7 . 9 9 4 卜g ·
m L
一 `的 6 份对照品溶液 。 分别进样 5 林L ,按上述色
谱条件测定 。 以所得绵马贯众素的峰面积 Y对进
样量 X ( 协g )进行线性 回归 , 回归方程为 :
Y 二 7
.
4 3 0 x 10 3 + 4
.
4 5 2 x 10 6 X r 二 0
.
9 9 9 8
结果表明 ,绵马贯众素进样量在 0 . 04 一 1 . 28 卜g 范
围内线性关系良好 。
2
.
3 精密度与稳定性试验 取药材 (样品 4 )按
,’2 . 6” 项下方法制备样品溶液 ,取 5 协 L 重复进样 6
次 , 绵马贯众素峰面积 的 R s D 为 1 . 5% 。 在同 l d
内 o , 2 , 4 , 6 , s h 取该样 品溶液各进样 5 林L 测定 ,
绵马贯众素峰面积 的 R S D 为 1 . 9 % ; 取同一样品
溶液在 。 , 1 , 2 , 3 , 6 d 各进样 5 林 L 测定 , 绵马贯众
素峰面积 的 R SD 为 1 . 6% 。 结果表明 , 样品溶液
在 6 d 内稳定 。
2
.
4 重复性实验 取同一批药材 (样品 4) 按 “ 2 . 6 ”
项下方法制备 6 份样 品溶液 , 分别进样 5 协L ,其绵
马贯众素百分含量的 RSD 为 2 . 2% 。
2
.
5 加样回收率试验 精密称取已知绵马贯众素
含量 ( 3 04 % )的绵马贯众样品约 50 m g 共 9 份 , 每
3 份为一组 , 每组精密加人 0 . 10 23 m g · m L 一 ’ 绵马
贯众素对照品溶液 10 , 1 5 , 2 0 m L ,按 “ 2 . 6 ” 项下方法
操作 ,计算回收率 ,结果低 、 中 、高 3 种浓度的平均回
收率分别为 103 . 0% , 9 . 4% , 9 . 5% , 其平均值为
10 0
.
6% ; R S D 分别为 1 . 0% , 3 . 3% , 2 . 0% , n = 3 。
2
.
6 样 品的含量 测定 取 浓度 为 0 . 5 1 16 m g ·
m L
一 ’ 的对照品储备液 1 m L 于 10 m L 量瓶中 , 加氯
仿定容至刻度 ,摇匀 , 即得对照品溶液 ;取干燥后的
绵马贯众粉末 (过 3 号筛 )约 0 . 1 9 ,精密称定 ,置具
塞锥形瓶中 ,精密加人氯仿 25 m L , 密塞 ,称重 , 超声
提取 ( 一o o w , 4 0 k H z ) 3 0 m i n ,放冷 ,再称重 ,用氯仿
补足减失的质量 ,摇匀 。 滤过 ,取续滤液 5 m L 于 or
m L 量瓶中 , 加氯仿定容至刻度 , 摇匀 ,离心 ( 10 00
r
· 而 n 一 ` ) 10 im n 后 ,取上清液 5 林L 在上述色谱条
件下进样测定 ,结果见表 l 。
表 1 绵马贯众中绵马贯众素含量 ( % , n 二 3)
T a b 1 C o n et n st o f d yr o e r a s s i n e in
D刁 op et 廊 c asr s i kr iz o m a N ak ia
样品
(
s
am p l
e
)
药材
( m
e d i e i n al
m a te ir als )
序号
( N
o
.
)
药材来源及 日期
(
s o u , e an d d
a t e of
s a m p l e )
含量
C o n t e n t S
75or2104668屯6今么王生2山东济南 , 20 1 年
( Ji
n
an
,
Sh
a n d o铭 , 20 0 1 )
黑龙江阿城 , 20 1 年
( A
e h e n g
,
H e il o n自ian g , 2X() l )
黑龙江牡丹江市 , 20 2 年 9 月
( M
u d a nj ian g
,
H e i lo n 因 ian g , 2加2 . 9 )
黑龙江牡丹江市 , 20 3 年 6 月
( M
u danj ian g
,
H e ifo n自10 9 , 20 3 . 6 )
黑龙江牡丹江市 ,2 X(] 3 年 8 月
( M
u
danj ian g
,
H e i l o n 目 ian g , 2X() 3
.
8 )
J`U月I
炭品
( e a rbo
n i z i n g )
一 54 0一 药物分析杂志 i C hnJ Ph~A na 2 l0 5, 25 ( 5)
3 讨论
3
.
1 提取条件的选择 实验中发现绵马贯众素在
甲醇中难溶 ,乙醇中微溶 , 而在氯仿及乙醚中易溶 ,
考虑到乙醚的挥发性 ,选用氯仿为提取溶剂 ,并考察
了氯仿回流 、超声 、 冷浸 3 种提取方法 , 结果表明超
声 30 而 n 的含量比冷浸 24 h 高 , 与回流 3 h 的结果
相差不大 ,故选择超声方法 ; 又考察了超声 15 , 30 ,
4 5
,
6 0 ha
n 的结果 , 发现超声 30 m in 后含量不再增
加 ;溶剂用量考察了 15 , 2 5 , 5 0 m L ,结果表明 2 5 m L
比 巧 m L 提取的含量高 , 与 50 m L 提取的含量相差
不大 。 因此提取条件为 25 m L 氯仿超声 30 m in 。
3
.
2 检测波长的确定 绵马贯众素对照品溶液经
紫外扫描 ,在 2 41 n m 及 286 n m 处有最大吸收 ,两波
长处的吸收系数相差不大 ,考虑到流动相为五元系
统 ,为避免干扰 ,选择 2 86 n m 波长作为检测波长 。
3
.
3 流动相的选择 考察了多种流动相系统 , 分离
均较差且有重叠峰 , 用文献「2」中流动相 甲醇 一 氯
仿 一异丙醇 一 0 . 5 % 磷酸作流动相时 ,发现绵马贯众
素与其前相邻峰部分重叠 , 峰比较宽 ,而采用乙睛 -
氯仿 一异丙醇 一 0 . 3% 磷酸 一 0 . 1% 十二烷基硫酸钠
( 5 0
: 10 : 35
: 10 : 5) 作流动相 , 可使分离度提高 , 峰对
称性有所改善 。
3
.
4 小结 上述结果表明 , 绵马贯众不同来源 、 同
一来源不同批次药材之间以及药材与炭品之间绵马
贯众素含量均有差异 ,有必要对其含量进行控制 。
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(本文于 20( 只 年 4 月 2 日修改回 )