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南板蓝根氨基酸的分析



全 文 :南板蓝根氨基酸的分析
廖富华
(广东省生物药厂 ,广东广州 510630)
[ 收稿日期] 2002 06 19  [ 文献标识码] B  [ 文章编号] 1002 1280(2003)03 0039 03  [ 中图分类号] R284.1
 
[摘 要]  利用氨基酸分析仪对南板蓝根氨基酸进行分离测定 ,证实其含有脯氨酸 、甘氨酸 、苏
氨酸 、蛋氨酸 、丙氨酸 、天门冬氨酸 、谷氨酸 、半胱氨酸 、苯丙氨酸 、酪氨酸 、缬氨酸 、异亮氨酸 、亮氨
酸 、丝氨酸等十四种氨基酸 ,但未发现精氨酸 、赖氨酸和组氨酸。
[关键词]  南板蓝根;氨基酸
廖富华(1965年~ ),男 , 制药工程师 , 执业药师 ,从事兽药产品开发。
  在华南 、西南地区广泛应用的南板蓝根(爵床
科的马蓝 [ Baphicacanthus cusia (Nees) Bre-
mek .]),具有良好的清热解毒 、抗菌消炎功效[ 1 ,2] ,
并广泛应用于禽病防治 。据报道南板蓝根中含有
氨基酸 、靛蓝 、β-谷甾醇 、蒽醌类[ 3] ,以及三萜类化
合物[ 4] ,邬若峰[ 5]利用纤维素 TLC 和己知氨基酸
进行对照实验 ,结果证明其可能含有亮氨酸 、精氨
酸 、脯氨酸等六种氨基酸[ 4] 。笔者利用氨基酸分
析仪对南板蓝根中的氨基酸进行了分析 。
1 材料与仪器
1.1 药品与试剂 南板蓝根原料 ,纯饮片 ,由广东
省药材公司提供 。
1.2 仪器 氨基酸测定仪 ,Waters Pico Taq A.A.A。
2 方法与结果
2.1 提取有效成分[ 6 ,7]  南板蓝根药材 6.5 kg ,经
乙醇提取后 ,药渣加热水浸泡过夜 ,过滤 ,药渣再加
热水浸泡 ,过滤;得总滤液 25 L。加热浓缩到 1/10
体积 ,加 2 倍乙醇 ,过滤除去沉淀;滤液浓缩成稠
膏 ,于 60 ~ 70 ℃烘箱中烘至成干膏 ,总重约 200 g 。
2.2 分离纯化 取干膏 60 g ,加水稀释至 100 mL
使溶解 ,加乙醇 100 mL ,析出沉淀 ,抽滤 ,用乙醇洗
涤至溶液几乎无色 ,得类白色粉末 。置干燥器干
燥 ,称重 0.2 g ,用水溶解(其中一部分不溶解 ,过滤
除去),加 0.5 g 活性炭(使用前活化),煮沸 ,过滤 ,
得到澄清无色的滤液 。加入 95%乙醇至无沉淀析
出为止 ,冰箱放置 2 d ,过滤得沉淀 ,干燥 ,得到 0.1
g 白色粉末状样品。
2.3 氨基酸鉴定
2.3.1 鉴别反应 取上述粉末少许 ,加适量水溶
解 ,分别进行 Molish反应 , Fehling 反应 ,双缩脲反
应 ,结果均为阴性 ,茚三酮反应阳性 。证明此白色
粉末状物质为氨基酸。
2.3.2 薄层层析  ①对照品溶液:分别称取酪氨
酸 、脯氨酸 、缬氨酸、谷氨酸 、亮氨酸对照品 1 mg ,各加
入2 mL 0.1 mol/L盐酸溶解 ,作为单种氨基酸的对照
品溶液A1、A2 、A4 、A5 、A6。
②样品溶液:称取样品 10 mg ,加 0.5 mL 0.1
moL/L盐酸溶解 ,作为供试液A3 。
③薄层展开:取纤维素板(10 cm×15 cm)一块 ,不
活化 ,用微量注射器按常规方法点加样品溶液 A3、对
照品溶液 A1 、A2 、A4 、A5 、A6各 2μL ,放置约 15 min(挥
去多余盐酸),照薄层层析法试验。展开剂为水饱和
苯酚[ 8] ;展开时间 l h;显色剂为 2%茚三酮乙醇溶液 ,
喷雾显色 ,105 ℃加热10 min。展开结果见图 l ,脯氨
酸为黄色斑点 ,其它斑点为紫红色。与已知氨基酸的
斑点对照 ,证实其可能含有脯氨酸 ,缬氨酸。
2.3.3 双向纸层析 称取样品 10 mg ,加 0.5 mL 水
溶解 ,用微量注射器按常规方法取 2 μL ,点样于层析
用新华滤纸(20cm×24 cm)上。
  展开剂:第一向 ,正丁醇∶12%氢氧化铵∶乙醇
·39· 2003 , 37(3):39~ 41/廖富华            中国兽药杂志
(13∶3∶3);第二向 ,正丁醇∶80%甲酸∶水(15∶3∶2)。展
开时间:第一向 ,饱和1.5 h ,展开4.5 h;第二向 ,饱和 l
h ,展开5 h。显色剂为 0.2%吲哚醌丙酮溶液。层析
结果见图 2。
由于第一向展开剂极性太大 ,在此系统下 ,层析
斑点位于边缘。斑点的颜色与标准颜色对照[ 9] ,证实
蓝色斑点可能是脯氨酸 ,粉红色斑点可能是甘氨酸 ,
浅红色斑点无法确定。
2.4 氨基酸分析仪测定 将氨基酸柱前衍生化 ,以
异硫氰酸苯(PITC)作为衍生化剂 ,与伯胺或仲胺反
应 ,生成 PTC 氨基酸。再进行气相分离 ,确定氨基酸
成分和氨基酸排列顺序。
图 1 氨基酸薄层层析图 图 2 双相纸层析图
  取样 6.3 mg ,加水稀释至 10 mL 进行衍生化 ,气
相分离。氨基酸的含量分析结果见表 1。
表 1 氨基酸含量分析结果
氨基酸 含量(mg/ g) 氨基酸
含量
(mg/ g) 氨基酸
含量
(mg/ g)
天门冬氨酸 0.70 甘氨酸 1.32 苏氨酸 1.21
谷氨酸 0.43 组氨酸 — 丙氨酸 0.74
酪氨酸 0.05 蛋氨酸 0.95 异亮氨酸 0.03
缬氨酸 0.03 半胱氨酸 0.16 亮氨酸 0.03
脯氨酸 7.36 苯丙氨酸 0.12 赖氨酸 —
丝氨酸 3.27 精氨酸 —
3 讨 论
对南板蓝根氨基酸的测定结果与邬若峰的薄层
测定不完全一致 ,本实验未发现南板蓝根中含有精氨
酸、赖氨酸 、组氨酸 ,但含有苏氨酸 、蛋氨酸 、苯丙氨
酸、缬氨酸 、异亮氨酸 、亮氨酸等六种人体必须氨基酸
和甘氨酸 、天门冬氨酸 、谷氨酸 、酪氨酸 、脯氨酸 、丙氨
酸 、半胱氨酸 、丝氨酸等非必须氨基酸。氨基酸分析
仪测得结果与薄层层析 、纸层析差别较大 ,由于实验
中未能找到合适的分离南板根中全部氨基酸的展开
系统 ,因此只能检测到含量较高的氨基酸。
参考资料:
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部 二★★★年版[ S] .
北京:化学工业出版社, 2000 , 198.
[ 2] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(上册)[M] .北京:人民
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[ 3] 江苏中医学院.中药大辞典(上册)[ M] .上海:上海人民出版社,
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[ 4] 陈 , 陆哲雄, 关德棋, 等.南板蓝根的化学成分研究[ J] .中草
药 , 1987, l8(11):8 9.
[ 5] 邬若峰.广东商品板蓝根的薄层层析鉴定[ D] .广州:广东医药学
院 , 1988, 1 13.
[ 6] 张时行 , 陈建楼, 毛立新 , 等.板蓝根药材的薄层层析鉴别法研究
[ J] .中成药研究 , 1984 , 增刊(1):51.
[ 7] 中国科学院上海药物研究所.中草药有效成分提取与分离[ M] .
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用[M] .北京:科学出版社 , 1978, 585.
[ 9] 潘家秀.蛋白质化学研究技术[M] .北京:科学出版社, 1973, 19,
56.
致谢:本实验承蒙广东医药学院天然化教研室陈 老师指导,中心仪器室检测氨基酸,特致谢意。
Analysis of Amino acids in Baphicacanthus Cusia(Nees)Bremek.
LIAO Fu-hua
(Guangdong Biology Pharmaceutical Factory , Guangzhou , Guangdong 510630;China)
Abstract:Amino acids in Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.were isolated and identifyied by using the amino acid an-
alyzer.It was confirmed that Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek.contains fourteen kinds of amino acids in all , includ-
ing proline , glycine , threonine , methionine , alanine , asparagine , glutamic acid , cysteine , phenylalanine , tyrosine , valine ,
isoleucine , leucine and serine.While there were no arginine , lysine and histidine.
Kewwords:Baphicacanthus cusia (Nees)Bremek.;amino acids;analysis
大北农集团进军兽药领域
  本刊讯 大北农集团是在我国老一辈农业科学
家杨胜 、杜伦教授的倡导下 ,以邵根伙博士为代表的
青年知识分子于 1993年 12月创立的农业高科技企
业 ,是农业产业化国家重点龙头企业 、中国饲料行业
百强企业 、全国首批获得自营进出口权的民营企业。
自企业成立之日起 ,始终秉承“报国兴农 、成就自
我”的企业理念 ,发扬“谦虚 、协作 、勤俭 、创新”的企业
精神 ,弘扬“科教兴农 ,争创一流 ,共同发展”的企业文
化 ,以成为国际一流农业科技企业为发展目标。经过
九年多的发展 ,大北农集团已成为以预混料产业为龙
头 ,立足饲料 、动物保健 、生物制品、种业 、农化 、教育
等产业的农业科技企业。集团拥有 15名博士、近 50
名硕士组成的研发队伍。2000年初 ,大北农成为全国
预混料生产企业中首批通过 ISO9002国际质量体系
认证的企业。之后 ,又荣获中华人民共和国北京出入
境检验检疫局颁发的《出口食用动物(猪)饲用饲料企
业登记备案证》 ,具备外贸猪场使用资格 ,已成为国内
最大的预混料生产基地之一。
大北农集团以高起点介入动物保健行业 。
2000年初便按照兽药 GMP 规范 ,在怀柔建立了现
代化的动物保健品生产基地 , 2002年大北农集团
又正式收购了福建省生物药品厂和韶山动物药品
厂 ,成立了福州大北农生物技术有限公司 、韶山大
北农动物药业有限公司 。大北农集团目前辖有北
京大北农动物保健科技有限公司 、福州大北农生物
技术有限公司和韶山大北农动物药业有限公司 ,并
已开始进行与兽药 GMP 相适应的全面改造升级 。
至此 ,大北农集团占领了兽药领域中一块阵地 ,成
为动物保健行业中强有力的竞争者。
大北农集团的竞争优势在于集团拥有一批教
授 、博士 、硕士等高精尖人才组成的研发队伍和由
专业兽医组成的科普服务队伍。
在产品创新方面 ,大北农集团动物保健品研发
中心已开发出一系列安全高效并符合“绿色养殖”
要求的兽药产品 ,提高了产品的核心竞争力 。
在科技服务方面 ,大北农集团充分发挥自身科
普服务营销的优势 ,加大了市场推广力度 ,由黄荣
生教授 、赵亚荣博士 、张渊魁硕士 、刘彤博士等带
队 ,在河南 、山东 、四川 、湖南 、广东等全国二十多个
省市的农村 ,通过举办形式多样的培训会 、研讨会 、
推广会等科普活动进行市场推广 ,在现场举办技
术 、产品使用讲座 ,发放《大北农技术与服务》、《大
北农疾病防治手册》等科普资料 ,并深入坑塘圈舍
为牲畜诊治疾病 ,受到养殖户的好评。
我们相信 ,拥有知识型农业推广体系和“科教
兴农 ,争创一流 ,共同发展”企业文化 ,已成功打开
了预混料市场并取得市场领先者地位的大北农集
团在兽药领域一定会取得新的辉煌业绩。
·41· 2003 , 37(3):39~ 41/廖富华            中国兽药杂志