全 文 ：ovialcelswereseriouslyinjured, therearemanypolycyte, histoleucocyteanduretecrystalinthejointandsofttissue.TSDA200, 60mg/kg
couldsignificantlyinhibitjointswellingofratandsignificantlyimprovethehistopathologicchanges.TSDA200mg/kgcouldimprovethegaits
andsignificantlyinhibittheincreaseofNO, TNF-αandPGE2contentaswelasthecontentofIL-6, IL-1β.Conclusion:TSDApossessedan-
tigoutarthritisefects, itsmechanismmayberelatedtoinhibittheproductofcytokines.
Keywords　totalsaponinofDioscorea(TSD);totalsaponinofAchyranthes(TSA);goutyarthritis;cytokines
六月青总皂苷抗鸭乙型肝炎病毒作用研究＊
黄仁彬 1 ,黄权芳 2 ,张士军 1 ,刘　曦 1 ,蒋伟哲 1 ,林　兴 1
(1广西医科大学 ,南宁　530021;2广西中医学院第一附属医院 ,南京　530023)
　　摘　要　目的:观察六月青总皂苷(theterpenoidsofLiuyueqing, TLYQ)体内抗鸭乙型肝炎病毒(duckhepatitisBvirus, DHBV)
的作用。方法:将 DHBVDNA阳性麻鸭随机分为六月青总皂苷大 、中 、小剂量治疗组 、拉米夫定组和模型组 , 分别给予相应药物进行
干预。用药前 、用药第 7、14d及停药第 7d,取静脉血用实时荧光定量 PCR法检测血清 DHBVDNA含量。治疗后取肝脏组织作病理
学检查。结果:拉米夫定组用药后血清 DHBVDNA水平迅速降低 ,停药后立即反跳。六月青总皂苷大剂量组第 7d、14d即能明显抑
制 DHBVDNA,停药后仍有一定的抑制作用。中 、小剂量组与模型组比较有一定的病毒抑制作用。病理改变各组在统计学上无明
显差异。结论:六月青总皂苷可有效地抑制 DHBVDNA, 其作用有明显的量效和时效反应关系。
　　关键词　六月青总皂苷;鸭乙型肝炎病毒;实时荧光定量 PCR
　　六月青为爵床科植物肖鸡笼(顶花马兰)Taraphochlamysaf-
finis(Giff)Bremekhu(Strobilanthesafinis(Griff)Y· C· Tang)的
干燥地上部分 [ 1] , 六月青是复方六月雪(CLYX)主要成分之一 ,
本课题组前期研究表明 , CLYX具有明显的抗 HBV[ 1, 2]和保护
急性化学性肝损伤的作用 [ 3] 。本实验旨在观察六月青总皂苷
(theterpenoidsofLiuyueqing, TLYQ)体内抗鸭乙型肝炎病毒
(duckhepatitisBvirus, DHBV)的效果 , 并初步探讨其作用机制 ,
为筛选出抗 HBV主要活性成分提供实验依据。
1　材料与方法
1.1　试验药物　六月青采于广西灵山县 ,六月青总皂苷由广
西医科大学药理学教研室和广西医学科学实验中心自行提取。
六月青粗粉 1.0kg, 加 10倍量 80%乙醇回流提取 3次 , 每次 1.
5h, 减压回收乙醇至无醇味 , 分别用石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯萃
取 , 弃去有机溶剂萃取液 ,最后再用水饱和正丁醇萃取 , 取正丁
醇萃取液减压浓缩至干 , 得到 41.28g浸膏 , 上处理好的 AB-8型
大孔树脂柱(40mm×800mm),分别用 6BV的 30%乙醇和 50%
乙醇洗脱 , 收集醇洗脱液 ,减压回收乙醇 , 60℃的减压恒温干燥
箱中干燥得 4.28g淡黄色化合物 , 经常规化学定性试验证实为
皂苷类 , 利用香草醛-硫酸分光光度法测定总皂苷含量 [ 4] , 纯度
为 85.8%。拉米夫定 , 100mg/片 , 中国苏州葛兰素史克制药有
限公司产品 , 批号 07090016。
1.2　动物 　1日龄广西麻鸭 , 雌雄不拘 ,体重 40 ～ 50g, 购自广
西畜牧良种养殖场。
1.3　 引物　 参照文献 [ 5]设计序列 , 上游引物:5 -AACCATT-
GAAGCAATCACTAGAC-3 , 下 游引 物:5 -ATCTATGGTGGCT-
GCTCGAACTA-3 。目的片段大小为 218 bp。由上海基康生物技
术有限公司合成。
1.4　仪器　实时荧光定量 PCR仪 ,美国 Bio-Rad公司。
1.5　方法　采用成年的广西麻鸭产的蛋孵化的 1日龄雏鸭 , 经
腹腔注射 0.2 mlDHBVDNA强阳性病毒血清。接种 7d后 , 分
别从胫静脉采血约 0.2 ～ 0.3 ml左右 , 装入一次性 Eppendoff管
中 ,整个过程注意不要交叉污染。 4000rpm离心 5min, 取血
清 。 -20℃保存备用。采用 PCR法检测筛选出感染阳性鸭 。经
PCR法检测筛选出感染阳性鸭 , 饲养至 13日龄作为实验动物进
行药物治疗试验。将 50只鸭随机分为 5组 , 每组 10只。模型
组:等量的生理盐水;拉米夫定组:灌胃给予拉米夫定 50×10-3
g/kg· d;TLYQ低 、中 、高剂量组:灌胃给予六月青总皂苷 0.5、
1.0、2.0g/kg· d(相当于生药 12g、 24g、48g/kg· d)。各组每天
早上 8 ～ 9点钟左右灌胃给药 , 1天 1次 , 连续 14d, 实验期间动
物自由取食和饮水。并于用药前 0d、用药 7d、用药 14d、停药 7d
(P7)时 ,分别从胫静脉采血 , 每只 0.5 ml左右 , 分离血清 , 于-
20℃保存备用。
1.5.1　FQ-PCR检测血清 DHBVDNA　DHBVDNA提取:采用
直接加热法。每次取血清 100μl, 沸水浴 10min, 10000 rpm离心
5min。加样:2×SYBRPremixExTaqTM12.5μl;10μM上游引
物 1.0μl;10μM下游引物 1.0μl;加无菌双蒸水至 23μl;血清提
取物 2.0μl。 FQ-PCR反应条件:95℃变性 10 s, 55℃退火 20 s,
72℃延伸 30s,共反应 45个循环。 FQ-PCR的结果判读:扩增过
程及数据的储存和分析均由仪器及自带的软件自动完成。
1.5.2　各组肝脏病理(HE染色)检测 　于停药 7d分别剖杀各
37中药药理与临床 2010;26(1)
＊ 基金项目:广西教育厅自然科学基金(No.200710MS014),广西科学研究与技术开发计划(桂科攻 0322024-5E)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2010.01.007
组试验动物 , 各取小块肝组织固定于 10%甲醛溶液 , 石蜡切片 ,
用 HE染色 ,病理检查。
2　结果
2.1　治疗前后鸭血清 DHBVDNA水平变化　六月青皂苷各剂
量组 DHBVDNA拷贝数下降程度与用药剂量及用药时间相关 ,
其中 ,小剂量组 DHBVDNA拷贝数于第 7d、14d都有不同程度
的下降 , 但没有显著性差异 , 中剂量组于 14d、大剂量组于第 7d、
14d则有明显下降 , 各治疗组停药后 7dDHBVDNA拷贝数未见
明显增高。拉米夫定对照组用药后 ,血清 DHBVDNA拷贝数开
始明显下降 ,第 14d下降到最低值 ,停药 7d后 DHBVDNA拷贝
数即回升至药前水平 ,病毒含量变化总体表现为用药时持续下
降 、停药即出现反跳的规律 , 结果见表 1。
　　表 1　治疗前后鸭血清 DHBVDNA水平比较( x±s×108 , n=10Copy/ml)
组别 剂量(g/kg· d)
DHBVDNA
T0 T7 T14 P7
模型对照　　 2.16±1.22 2.42±1.50 2.31±1.12 2.29±1.38
拉米夫定　　 50×10-3 2.13±1.17 1.01±0.50＊＊ 0.50±0.56＊＊ 2.23±1.13
六月青总皂苷 0.5 2.15±1.01 1.68±0.98 1.48±0.85 1.74±1.07
六月青总皂苷 1.0 2.09±1.33 1.55±1.39 0.87±0.72＊＊ 1.66±0.97
六月青总皂苷 2.0 2.18±2.29 1.15±0.83＊ 0.79±0.41＊＊ 1.34±0.63＊
　　与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.2　病理检查　肉眼观察各组鸭肝脏 , 色泽鲜嫩暗红 , 表面光
滑 , 质地柔软 ,未扪及结节。镜下观察可见 , 模型组肝细胞出现
弥漫性重度脂变;六月青皂苷各剂量组肝病变与拉米夫定组相
似 , 均有不同程度肝细胞空泡变性 、肿胀 , 部分组织汇管区小叶
间隔可见炎症细胞浸润 ,结构基本完整 , 未见肝细胞坏死与增生
现象。
3　讨论
　　目前对乙型肝炎病毒引起的慢性肝病尚无理想的治疗方
法。临床常用的两类抗病毒药为干扰素 ê和核苷类药物。干扰
素 ê治疗的有效率较低以及难以耐受的副作用限制了其临床应
用;核苷类代表药物拉米夫定同样因为需要较长的疗程及耐药
性问题而难以成为理想的治疗药物 [ 6] 。因此 , 寻找疗效确切 、
长期服用安全且价格低廉的药物是亟待解决的问题。
　　DHBV病毒颗粒直径 40 ～ 45nm, 外膜的脂质为宿主来源 ,
上面嵌有病毒表面抗原 , 病毒核心抗原形成二十面体结构 , 里
面包含基因组 DNA和病毒多聚酶蛋白 , DHBV属嗜肝 DNA病
毒科 , 与人 HBV的分子结构 、生物学特性和发病机制存在许多
相似之处。近年来 , 用 DHBV感染鸭作为乙型肝炎动物模型来
研究人类乙型肝炎发病机理 、病毒复制过程及筛选有效的治疗
药物 , 已为国内外学者所公认 [ 7] 。研究发现 , 1 ～ 3日龄雏鸭感
染 DHBV可维持长期病毒血症而无明显自然转阴现象 , DHBV
DNA含量于感染后两周左右达高峰 [ 8] 。因此我们采用 1日龄
雏鸭经腹腔感染 DHBV的方法建立鸭乙型肝炎动物模型来研
究六月青总皂苷的体内抗病毒作用。
　　本次动物实验表明 , 六月青总皂苷具有一定的体内抑制
DHBV的作用 , 其起效较慢 , 且疗效与用药剂量及用药时间相
关 。六月青总皂苷高剂量组在治疗第 7d显效 , 而中剂量组在治
疗第 14d显效 , 低剂量组在治疗期间未见明显的抑制病毒作用。
六月青总皂苷高剂量组在停药后仍显示有明显的抑制病毒的
作用。拉米夫定抑制 DHBV起效较早 , 在治疗第 4d其病毒
DNA拷贝数已降至较低水平 , 但停药后病毒含量又立即回升。
六月青总皂苷治疗组与拉米夫定组比较 ,六月青总皂苷起效慢 ,
但其抑制病毒复制的作用平稳而持久 , 提示六月青总皂苷抑制
体内 DHBV复制的机制不同于拉米夫定。本实验中肝脏 HE染
色病理检查在各实验组间无统计学上的差异 , 说明该药在这 3
种剂量下连续用药 14d对肝组织无明显的毒性损害。
参考文献
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内科 , 2007;2(3)∶ 317 ～ 319
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护作用.广西医科大学学报 , 2003;20(4)∶ 497 ～ 499
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StudyoftheterpenoidsofLiuyueqing(六月青)onduckhepatitisBvirusinducklings
LinXing1 , HuangQuanfang2 , ZhangShijun1 , LiuXi1 , JiangWeizhe1 , HuangRenbin1
(1GuangxiMedicalUniversity, Nanning530021;2TheFirstAfiliatedHospitalofGuangxiTCMUniversity, Nanning　530023)
　　Objective:ToobservetheinhibitoryeffectoftheterpenoidsofLiuyueqing(TLYQ)onduckhepatitisBvirusinvivo.Methods:Ducks
withcongenitalinfectionofDHBVwererandomlydividedintofivegroups:high, medium, low-doseTLYQ-treatedgroup, lamivudine-treated
groupanduntreatedgroup.Theducksinthelamivudine-treatedgroupwerefedlamivudinewithadoseof50mg/kgonce.Ducksinthethree-
doseTLYQ-treatedgroupsweretreatedwithdifferentdosesofTLYQfor14 daysrespectively.TheserumcontentofDHBVDNAwasdeter-
minedbyFQ-PCRmethodbeforeandonthe7th, 14thdayofthetreatment, andthe7thdayafterthetreatment.Thehistopathologicalchan-
gesofliverwereevaluatedafterthetreatment.Results:LamivudineshowedarapidinhibitingeffectonDHBVDNA, butthisefectdidntlast
long, andtheserumlevelofDHBVDNAincreasedagainaftertreatment.TheserumlevelofDHBVDNAdroppedmarkedlyinthehigh-dose
TLYQ-treatedgrouponthe7stand14stday.Low-doseandmedium-doseTLYQalsoshowedcertaininhibitingefectonDHBVDNA.The
featuresofliverhistopathologicalchangesinTLYQtreatedgroupsshowednostatisticalsignificanceascomparedwiththatintheuntreated
group.Conclusions:TLYQcaninhibitsignificantlyDHBVDNA, anditsinhibitoryefectsweredose-andtime-dependents.
Keywords　theterpenoidsofLiuyueqing(六月青总皂苷);duckhepatitisBvirus;fluorescentquantitativereal-timePCR
荜茇挥发油与去油水提物降血脂作用的比较研究＊
姚　峰 ,顾　健＊＊ ,张亮亮 ,廖敬礼 ,钟　锋
(西南民族大学少数民族药物研究所 ,成都　610041)
　　摘　要　目的:研究荜茇挥发油非皂化物和水提物对大鼠高血脂的影响 ,初步探讨荜茇降血脂的有效部位。方法:建立大鼠
高血脂模型 , 采用荜茇挥发油非皂化物和去油水提物灌胃 , 连续 30 d, 治疗结束后 , 采集大鼠血清 , 用半自动生化仪测量 TC、TG、
HDL-C、LDL-C的值 ,计算肝系数 ,并作病理学观察。结果:荜茇挥发油能显著降低高脂血症大鼠对 TC、HDL-C、LDL-C。水提液则可
降低 LDL-C。大鼠肝脏切片与模型对照组大鼠相比 , 挥发油治疗组肝细胞浊肿明显减轻。结论:荜茇挥发油非皂化物具有显著的降
血脂作用。
　　关键词　荜茇;挥发油非皂化物;水提物;降血脂
　　荜茇(PiperlongumL)是是藏 、中 、蒙医习惯用药 , 功能温中
散寒 , 行气止痛。曾报道对兔降血脂有效 , 但以大鼠为实验对象
研究其降血脂作用 , 报道很少 [ 1, 2] 。经过资料调研和前期药效
学预试试验 , 发现荜茇提取物具有较强的降血脂作用 , 我们采
用水蒸气蒸馏法 , 从荜茇中得到挥发油非皂化物 , 以及去油的
水提物 , 观察荜茇降血脂的有效部位。
1 　材料与方法
1.1　试验药物　荜茇购自成都市药材市场 , 经成都中医药大
学中药鉴定室鉴定为胡椒科植物荜茇 PiperlongumL的未成熟
果实。经水蒸气蒸馏法得到挥发油。通脉降脂片为力菲克药业
有限公司 ,批号:08090902。
1.2 　动物 　雄性 SD大鼠 100只 , 体重(2 00 ±1 5)g, 由
四川省实验动物专委会养殖场提供 ,合格证号:SCXK[川 ] 2008-
14 。
1.3　试剂 　甘油三酯(TG)试剂盒(四川省迈克科技有限责
任公司 ,批号:08081001规格:60ml/盒)、总胆固醇(TC)试剂盒
(四川省迈克科技有限责任公司 , 批号:08081031 规格:60ml/
盒)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒(长春汇力生物技术
有限公司 ,批号:08081013 规格:60ml/盒)、低密度脂蛋白胆固
39中药药理与临床 2010;26(1)
＊ 基金项目:国家民委项目(07XN02)　　　　＊＊通讯作者