全 文 ：［收稿日期］ 20120201(007)
［第一作者］ 田振坤，教授，博士生导师，从事中药新药开发研
究，Tel:82193007，E-mail:tzkoffice@ hljucm． net
［通讯作者］ * 王建明，教授，博士生导师，从事中药现代给药
系统研究，Tel:13904635231，E-mail:wangjianming
@ hljucm． net
HPLC测定凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的含量
田振坤1，顾媛媛2，宋成贵1，代金红1，王建明2*
(1. 黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨 150040;2. 黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨 150040)
［摘要］ 目的:建立凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的 HPLC 含量测定方法。方法:采用 Diamonsil C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)色谱柱;以乙睛-0. 1%冰乙酸为流动相进行线性梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min － 1，柱温 30 ℃，检测波长 260 nm。
结果:芦丁、槲皮素和山奈酚与其他组份的色谱峰均得到基线分离，加样回收率平均值分别为 98. 89%，98. 39%，98. 48%，RSD
分别为 2. 05%，1. 51%，1. 89%。结论:该方法快速、准确、重复性好，可作为凤仙透骨草质量控制的有效方法。
［关键词］ 高效液相色谱法;凤仙透骨草;芦丁;槲皮素;山奈酚
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)18-0106-03
［网络出版地址］ http:/ / www． cnki． net / kcms / detail /11． 3495． R． 20120711． 1204． 018． html
［网络出版时间］ 2012-7-11 12:04
Determination of Content of Eldrin，Quertetin and Kaempferol
in Impatiens balsamina by HPLC
TIAN Zhen-kun1，GU Yuan-yuan2，SONG Cheng-gui1，DAI Jin-hong1，WANG Jian-ming2*
(1. College of Pharmacy，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China;
2. Institute of Traditional Chinese Medieine，Heilongjiang Universty of Chinese Medicine，Harbin 150040，China)
［Abstract］ Objective: To establish a HPLC method for the determination of eldrin， quertetin and
kaempferol in Impatiens balsamina． Method:The determination was performed on a Diamonsil C18 column (4. 6
mm × 250 mm，5 μm) ，with a gredient mobile phase of acetonitrile-0. 1% glacial acetic acid; the flow rate
was1. 0 mL·min － 1; column temperature was 30 ℃; the detection wavelength was at 260 nm． Result: The
chromatographic peaks of eldrin，quertetin and kaempferol with other components were completely separated． The
average recovery was 98. 71%， 98. 96%， 98. 89%， RSD 2. 13%， 2. 34%， 2. 38% ． Conclusion: The
method was rapid and accurate for quality control of I． balsamina，and laid foundations for further research and
development．
［Key words］ HPLC;Impatiens balsamina;eldrin;quertetin;kaempferol
凤仙透骨草来源于凤仙花科凤仙花属植物凤仙
花的干燥茎，凤仙始载于《救荒本草》，其种子名为
急性子，李时珍谓［1］:“其花头翅尾足，俱翘翘然如
凤状，故以名之”，在我国大部分地区均有分布，南
北各地均有栽培，资源十分丰富。凤仙透骨草［2］作
为药材具有祛风湿、活血、止痛等功效，临床广泛应
用于风湿痹痛、筋骨挛缩、寒湿肢气、疮癣肿毒、跌打
损伤瘀积肿痛、闭经、痛经、痈肿、丹毒、鹅掌风、蛇虫
咬伤等症。目前对于凤仙透骨草的研究主要集中在
花(尤其是白色花瓣)及其种子急性子的化学成分
及药理作用方面，其他药物部位的研究则很少。笔
者以凤仙花的干燥茎为研究对象，采用 HPLC 测定
其中具有代表性的黄酮类成分，建立凤仙透骨草质
量控制的有效方法。
·601·
第 18 卷第 18 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 18
Sep．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.18.044
1 材料
美国 Waters 2695 高效液相色谱仪(包括四元梯
度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、2998
二极 管 阵 列 检 测 器) ，Empower 色 谱 工 作 站;
KQ5200E 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司) ，JA2003 型精密电子天平(良平仪器厂)。
药材采摘于黑龙江中医药大学药用植物园，经
本校药学院王振月教授鉴定为凤仙花科凤仙花属植
物凤仙透骨草。芦丁(供含量测定用，批号 100080-
200707)、槲皮素 (供含量测定用，批号 100080-
200406)和山奈酚(供含量测定用，批号 110861-
200808)由中国药品生物制品检定所提供。
乙腈为色谱纯(美国 Fisher 公司) ，水为娃哈哈
纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司) ，其余试剂均为
分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适应性［3-4］ Diamonsil C18
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-0. 1%乙
酸水溶液(2∶ 98)为流动相进行线性梯度洗脱(0 ～
30 min，乙腈 2% ～ 70%;30 ～ 50 min，乙腈 70% ～
90%。柱温 30 ℃，检测波长 260 nm，流速 1. 0 mL·
min － 1，进样量 20 μL。在此色谱条件下，对照品溶
液、供试品溶液的色谱图见图 1。
A．混合对照品;B．供试品;1. 芦丁;2. 槲皮素;3. 山奈酚
图 1 凤仙透骨草 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷
干燥过夜的芦丁对照品 5 mg，槲皮素对照品 4 mg，
山奈酚对照品 3 mg，加甲醇分别定容在 10 mL 量瓶
中，分别吸取芦丁对照品 0. 5 mL，槲皮素对照品
0. 125 mL，山奈酚对照品 0. 35 mL 用甲醇定容在
5 mL量瓶中，制得每 1 mL 含芦丁 51. 2 μg，槲皮素
87. 8 μg，山奈酚 79. 4 μg 的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备［5］ 取本品 1. 5 g，精密称
定，置索氏提取器中，加 150 mL 石油醚(30 ～ 60 ℃)
回流提取至无色，冷却后，弃去石油醚提取液，并挥
去药渣中的石油醚，于药渣中加 50 mL 甲醇超声提
取 20 min，放冷，滤过，挥干，用甲醇溶解并定容在
5 mL的量瓶中，摇匀，过 0. 45 μm 微孔滤膜，取续滤
液，即得。
2. 4 线性关系 精密量取一定量混合对照品溶液，
用甲醇稀释成梯度浓度。吸取不同质量浓度混合对
照品溶液 10 μL，分别进样，以进样量为横坐标、峰
面积为纵坐标进行线性回归，相关组分的回归方程、
回归系数、线性范围见表 1。
表 1 芦丁、槲皮素和山奈酚的回归方程、相关系数、线性范围
组分 回归方程 r
线性范围
/10 － 2μg
芦丁 Y = 24 987 553. 0134X + 6 051. 266 7 0. 999 9 1. 024 ～ 6. 144
槲皮素 Y = 10 929 742. 922 2X + 3 584. 333 3 0. 999 9 0. 439 ～ 2. 634
山奈酚 Y = 16 978 699. 391 5X － 5 955. 849 5 0. 999 9 1. 111 6 ～ 6. 669 6
2. 5 精密度试验 吸取芦丁 51. 2 mg·L － 1，槲皮素
87. 8 mg·L － 1，山奈酚 79. 4 mg·L － 1的混合对照品溶
液 10 μL，按照上述色谱条件，连续进样 6 次。测得
芦丁峰面积的 RSD 1. 87%，槲皮素峰面积的 RSD
1. 43%，山奈酚峰面积的 RSD 0. 42%。结果表明，
所用仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 精密称取凤仙透骨草粗粉 6 份，
按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件
进样分析，测得芦丁、槲皮素和山奈酚的 RSD 分别
为 1. 05%，1. 55%，1. 13%，结果表明，其重复性
较好。
2. 7 稳定性试验 取供试品溶液，分别于配制后
0，2，4，8，10，12，24 h 进样 20 μL，记录峰面积，结果
芦丁、槲皮素和山奈酚的 RSD 分别为 0. 95%，
1. 49%，0. 72%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2. 8 加样回收率试验［6-7］ 准确称取已知含量的凤
仙透骨草样品 6 份，每份约 0. 75 g，分别加入芦丁、
槲皮素和山奈酚对照品适量，按 2. 3 项下方法制备
供试品溶液，测得芦丁、槲皮素和山奈酚的平均回收
率分别为 98. 71%，98. 96%，98. 89%，RSD 分别为
2. 13%，2. 34%，2. 38%，结果见表 2。
2. 9 样品的测定 称取凤仙透骨草 1. 5 g，精密称
定，共取 3 份，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，分
别进样 20 μL，记录峰面积，用外标两点法分别计算
芦丁、槲皮素和山奈酚的含量。结果其含量平均值
分别为 0. 104 3，0. 277 5，0. 270 7 μg·g － 1，RSD 分别
为 2. 51%，1. 75%，1. 98%。
3 讨论［8］
3. 1 检测波长的选择 在 210 ～ 400 nm 进行全波
长扫描，结果发现在 260 nm 处基线较平稳，且色谱
·701·
田振坤，等:HPLC 测定凤仙透骨草中的芦丁、槲皮素和山奈酚的含量
表 2 芦丁、槲皮素、山奈酚加样回收率测定
组分 取样量 / g 样品中含量 /μg 加入量 /μg 测得量 /μg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
芦丁 0. 752 1 1. 965 0 1. 024 0 3. 0102 102. 07 98. 89 2. 05
0. 746 3 1. 949 9 1. 024 0 2. 981 3 100. 72
0. 761 4 1. 989 3 1. 024 0 2. 986 4 97. 37
0. 757 1 1. 978 1 1. 024 0 2. 984 7 98. 30
0. 763 2 1. 994 0 1. 024 0 2. 985 5 96. 83
0. 755 3 1. 973 4 1. 024 0 2. 977 3 98. 26
槲皮素 0. 752 1 1. 284 1 0. 663 4 1. 922 7 96. 26 98. 39 1. 51
0. 746 3 1. 274 2 0. 663 4 1. 923 9 97. 93
0. 761 4 1. 299 9 0. 663 4 1. 949 9 97. 98
0. 757 1 1. 292 6 0. 663 4 1. 960 5 100. 68
0. 763 2 1. 303 0 0. 663 4 1. 954 4 98. 19
0. 755 3 1. 289 5 0. 663 4 1. 948 1 99. 28
山奈酚 0. 752 1 3. 685 3 1. 786 5 5. 445 6 98. 53 98. 48 1. 89
0. 746 3 3. 656 9 1. 786 5 5. 413 3 98. 32
0. 761 4 3. 730 9 1. 786 5 5. 450 9 96. 28
0. 757 1 3. 709 8 1. 786 5 5. 531 1 101. 95
0. 763 2 3. 739 7 1. 786 5 5. 481 8 97. 51
0. 755 3 3. 701 0 1. 786 5 5. 456 5 98. 26
注:芦丁加入量均为 1. 024 0 μg;槲皮素加入量均为 0. 663 4 μg;山奈酚加入量均为 1. 786 5 μg。
峰较多，峰形较好，同时芦丁、槲皮素、山奈酚的分离
度较高。
3. 2 流动相的选择 因所选择的紫外吸收波长较
低，故选择以甲醇-0. 1%磷酸为流动相，但实际检测
中色谱图基线不平稳，且混合对照品中相关峰出现
严重的肩峰，考虑到是否由于凤仙透骨草中的一些
酸类成分的羧基发生了电离而导致出现肩峰，故调
整了磷酸的浓度，分别改为 0. 2%，0. 3%，0. 4% 的
磷酸，但肩峰现象仍未消除，后改用 0. 1% 乙酸，峰
形较好，但基线不是特别稳定，最终确定以乙腈-
0. 1%乙酸为流动相，芦丁、槲皮素峰和山奈酚峰可
以达到基线分离，峰形对称，分离度良好。
3. 3 采用 HPLC 同时测定凤仙透骨草中的芦丁、槲
皮素和山奈酚含量，说明上述 3 种成分不仅仅存在
于凤仙花中，且所建立的方法简便可行、重复性好、
结果可靠，为凤仙透骨草中黄酮类成分的质量控制
提供了重要依据。
3. 4 鉴于芦丁分解与其加热温度有一定的相关
性［9］，故本试验中供试品溶液的制备采用甲醇超声
提取，避免了热效应。
3. 5 根据全草的高效液相色谱图可知，除了上述 3
种成分外，还有很多未知色谱峰，且该 3 种成分的总
含量也较低。为了对其他色谱峰对应的物质进行定
性，我们在后续试验中采用了硅胶柱、ODS 反相柱、
制备型 HPLC 对未知成分进行分离，更进一步的单
体分离和结构鉴定还在进行中。
［参考文献］
［1］ 南京药学院《中草药学》编写组 ． 中草药学［M］． 南
京:江苏人民出版社，1976:633.
［2］ 鞠培俊，孔德云，李晓波 ． 凤仙花化学成分及药理作
用研究进展［J］． 沈阳药科大学学报，2007，24
(5) :320.
［3］ 胡芳，陆兔林，毛春芹，等 ． HPLC 法测定岩黄连生物
总碱中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17(7) :70.
［4］ 朱玲英，钱士辉，沈红，等 ． 凤仙透骨草药材高效液相
指纹 图 谱 研 究［J］． 时 珍 国 医 国 药， 2011， 22
(6) :1444.
［5］ 蒋立娣，宣贵达，吴好好，等 ． 桑叶提取物中槲皮素和
山萘酚的含量测定［J］． 浙江大学学报:理学版，
2009，36(6) :705.
［6］ 郝治湘，刘玉芬，周丽华，等 ． 反相高效液相色谱法
测定凤仙花中芦丁、槲皮素和山奈酚的含量［J］． 化工
时刊，2006，20(10) :42.
［7］ 涂波，汪志勇 ． 当归补血汤颗粒中黄芪甲苷和黄芪多
糖的含量测定［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17
(18) :115.
［8］ 光琴，周亚球 ． HPLC 测定罗布麻叶中总黄酮的含量
［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17(3) :103.
［9］ 赵宇新 ． 芦丁分解速度与加热温度的相关性［J］． 中
国实验方剂学杂志，2011，17(18) :101.
［责任编辑 顾雪竹］
·801·
第 18 卷第 18 期
2012 年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 18
Sep．，2012