全 文 ：黄花忍冬果实中绿原酸的提取及含量测定
于加平1 , 王夕宇2 , 马中宇1　(1.吉林农业科技学院生物工程系 ,吉林吉林 132101;2.吉尔吉药业有限公司 ,吉林吉林 132013)
摘要　用乙酸乙酯作溶剂 ,采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进行提取 ,高效液相色谱法对绿原酸进行检测和含量的测定。结
果表明 ,该法对黄花忍冬果实中绿原酸的提取简单、快速;检测方法可行 ,含量测定准确。
关键词　黄花忍冬果实;绿原酸;高效液相色谱;含量测定
中图分类号　Q503　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)06-02199-02
Extraction of Chlorogenic Acid in Lonicera chrysantha Fruit and its Determination
YU Jia-ping et al　(Department of Bio-engineering ,College of Agricultural S&T of Jilin , Jilin , Jilin 132101)
Abstract　With acetic ether as solvent , the chlorogenic acid in Lonicera chrysantha s fruit was extracted with Soxhlet extraction.After the extraction, the
determination was done with HPLC.The testing method was rapid , simple and the determination was accurate.
Key words　Lonicera chrysantha fruit;Chlorogenic acid;HPLC;Determination
　　忍冬属是忍冬科中较大的属之一 ,现知全世界约有 200
种 ,我国约 100种 ,广布于各省区 ,以西南 、华中地区种类最
多[ 1] 。其中黄花忍冬(Lonicera chrysantha)是其中一种 ,主要
分布于华北 、东北 、西北。该属植物多为直立或攀援状灌木 ,
许多忍冬可供药用。绿原酸成分一直被认为是忍冬中的主
要有效成分 ,现代药理研究表明 ,其具有抗菌抗病毒作用[ 2] ,
还有保肝利胆 、止血 、抗氧化 、抗生育等作用[ 3] 。笔者用乙酸
乙酯作溶剂[ 4] ,采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进
行提取 ,高效液相色谱法对绿原酸进行检测和含量的测定。
结果表明 ,在黄花忍冬果实中含有绿原酸 ,且含量较高 ,为绿
原酸的提取提供一种有效方法和原料来源 。
1　材料与方法
1.1　材料　日本 JASCO BS-2000型高效液相色谱仪 ,CKChro
工作站 ,phenomenex[4.6×250.0 mm ,Luna 5μC18(2)] 色谱柱。
索氏提取器(上海洪纪仪器设备有限公司)。
乙腈为美国 Acetonitrile 、色谱纯 ,超纯水 ,磷酸为分析纯;
绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所 ,批号 110753-
200212。
黄花忍冬果实采自吉林农业科技学院校园内 ,经阴干 、
低温烘干处理为干品。
1.2　方法
1.2.1　黄花忍冬果实中绿原酸的提取。将干燥的黄花忍冬
果实用研钵研碎 ,称取 10 g ,用滤纸包好 ,置于索氏提取器
中 ,往圆底烧瓶中加乙酸乙酯 80 ml ,在水浴锅上加热回流 3
h ,控制温度在 75 ℃左右。把回流液倒于蒸馏瓶中进行减压
蒸馏至 20ml ,超声溶解 ,过滤 ,装于棕色具塞管中 ,得待测液 ,
放于冰箱中待用。
1.2.2　绿原酸的检测
1.2.2.1　色谱条件。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙
腈-0.5%磷酸溶液(10∶90)为流动相;检测波长 327 nm;流速
1.0 ml/min;柱温 25 ℃。理论板数按绿原酸峰计算应不低于
3 000 。
1.2.2.2　绿原酸对照品溶液的制备 。精密称取绿原酸对照
品 2.700 mg ,置 50ml容量瓶中 ,加甲醇超声溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 , 0.2 μm滤膜过滤 ,取滤液即得浓度为 0.054 mg/ml。
图1　绿原酸对照品与黄花忍冬果实样品 HPLC色谱图
Fig.1 HPLC Chromatograms of reference substance and sample
2　结果与分析
2.1　黄花忍冬果实中绿原酸的检测　取“1.2.2.2”的标准品
溶液 5 μl和“1.2.1”提取液 10 μl(经 0.2 μm滤膜过滤),按上
述色谱条件分别进样分析 ,平行进样 5次 ,得色谱图 , 5次得
到相同的色谱图 ,说明结果准确 ,证实样品中含有绿原酸 。
作者简介　于加平(1973-),男 ,吉林吉林人 ,讲师 ,从事分析化学和天
然产物的提取方面的研究。
收稿日期　2007-11-22
2.2　黄花忍冬果实中绿原酸的含量测定
2.2.1　标准曲线的制作 。精密吸取对照品溶液(0.054
mg/ml)1.0 、5.0 、10.0、15.0、20.0、25.0μl进样 ,记录色谱图 ,以
绿原酸对照品的浓度为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,进
行线性回归分析 ,得回归方程 Y =323 624X -24 308 ,相关系
数 r=0.999 6(n=5)。绿原酸在 0.000 54～ 0.013 50 μg范围
内呈现良好线性关系。
2.2.2　稳定性实验 。取对照品溶液分别于配制后 0、1、2、4 、
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(6):2199-2200　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　方媛　责任校对　方媛
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.06.145
8 、12 h ,取滤液 10 μl注入色谱仪 ,记录色谱图 ,考察溶液放置
后峰面积的变化情况 ,RSD 为 0.27%,表明供试品溶液在 12
h内稳定。
2.2.3　精密度实验。取对照品溶液连续重复进样 5次 ,记录
色谱图 ,考察峰面积的变化情况 ,RSD为 0.19%,表明该含量
测定方法精密度良好 。
2.2.4　回收率实验。精密称定已测定含量的黄花忍冬果实
5份 ,每份约 10.0g ,按“1.2.1”方法提取后精密加入绿原酸对
照品 0.890mg ,经 0.2μm滤膜过滤 ,进样 ,测定峰面积 。计算
平均回收率为 99.37%,RSD为 1.47%,结果见表 1 。
2.3　样品含量的测定　取“1.2.1”制备的黄花忍冬果实提取
液 20 μl(经 0.2 μm 滤膜过滤),平行进样 3次 ,得色谱图 ,按
外标法计算样品中绿原酸含量 ,测得平均含量为 0.28%。
表 1　回收率的测定(n=5)
Table 1　Result of recovery(n=5)
编号
No.
取样量
g
Sampling amounts
样品含量
mg
Sample content
加入对照品
量∥mg
Addition amount
测得量
mg
Determined value
回收率∥%
Recovery
rate
平均回收率∥%
Average recovery
rate
相对标准偏
差∥%
RSD
1 10.325 0.268 0.89 1.157 　　　99.91
2 10.007 0.260 0.89 1.168 100.86
3 10.164 0.264 0.89 1.147 99.05 99.37 1.47
4 10.037 0.261 0.89 1.139 98.36
5 10.061 0.266 0.89 1.143 98.70
3　结论
(1)采用索氏提取法对黄花忍冬果实中绿原酸进行提
取 ,经高效液相色谱法检测 ,证实黄花忍冬果实中含有绿原
酸 ,经外标法测定其含量为 0.28%。
　　(2)目前黄花忍冬多数为城市的绿化树种 ,其果实是一
种尚未被开发利用且很有价值的药用资源 ,我国黄花忍冬果
实资源极为丰富 ,需要对其进行开发研究 ,使之得到合理应
用。通过该实验证实 ,黄花忍冬果实中含有绿原酸且其含量
较高 ,这为黄花忍冬果实的综合开发利用奠定了基础 。
参考文献
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(上接第 2190页)
　　结果表明(表 2),对突变株TH3-9固体发酵产 CMC 酶和
FPA酶的影响程度为A>B>C ,麸皮∶甘蔗渣最佳配比为1∶2 ,
(NH4)2SO4 最适量为 1.0 g ,K2HPO4 最适量为 0.1 g 。最佳培
养基配方为∶麸皮 +甘蔗渣(1∶2)40 g , (NH4)2SO41.0 g ,
K2HPO4 0.1 g ,MgSO4·7H2O 0.03 g ,含水量 60%, pH值 5.5。按
照该配方配制培养基 ,取 40 g培养基装入 250 ml三角瓶中 ,
于 45 ℃下培养 3 d ,测定 CMC酶和 FPA酶最高活力可达
832.56和 70.38 IU。
3　讨论
研究结果表明 ,TH3-9突变株充分利用天然纤维素类物
质麸皮+甘蔗渣和相对廉价氮源(NH4)2SO4 时 ,能产较高量
的纤维素酶 ,最适产酶温度为 45 ℃,说明该突变株在高温下
能利用廉价天然纤维素类物质生产纤维素酶。对该突变株
所产纤维素酶进行分离纯化并对其酶学性质进行探讨 ,是今
后研究的重点 。
参考文献
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2200 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2008年