全 文 ：［文章编号］１００１－３６０１（２０１３）０４－０２３９－００３４－０３
黄花忍冬花和果实中金丝桃苷含量的测定
董长颖，于加平，于海欢
（吉林农业科技学院，吉林 吉林１３２１０９）
　　［摘　要］为给黄花忍冬的药用开发及综合利用提供依据，采用索氏提取法，建立了黄花忍冬花和果实
中金丝桃苷的提取方法，并运用 ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定了提取液中金丝桃苷的含量。结果表明：金丝桃苷在
０．３００～１．２００μｇ内与峰面积呈良好的线性关系，ｒ＝０．９９９　６，平均加标回收率为９９．４２％，ＲＳＤ为０．３１３％。
该方法简便、可靠、重复性好。
［关键词］ＲＰ－ＨＰＬＣ；黄花忍冬；金丝桃苷
［中图分类号］Ｓ５６７．１＋９；Ｑ９４６．８３＋９ ［文献标识码］Ａ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｎｄ
Ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ
ＤＯＮＧ　Ｃｈａｎｇｙｉｎｇ，ＹＵ　Ｊｉａｐｉｎｇ，ＹＵ　Ｈａｉｈｕａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｊｉｌｉｎ，Ｊｉｌｉｎ１３２１０９，Ｃｈｉｎａ）
　 　 Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｌ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ，ｔｈｅ　ａｕｔｈｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ
Ｌ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ　ｂｙ　ｓｏｘｈｌｅｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈｅ　ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ．Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｈａｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ
０．３００～１．２００μｇ（ｒ＝０．９９９　６），ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９９．４２％（ＲＳＤ＝０．３１３％），Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ
ｓｉｍｐｌｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＲＰ－ＨＰＬＣ；Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ；ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ
　　忍冬属是忍冬科中较大的属之一，现知全世界
约有２００种，我国约为１００种，广布于全国各省区，
以西南和华中地区种类最多［１］，许多忍冬可供药
用［２］。金丝桃苷具有凉血止血、活血祛瘀、清热解
毒、镇痛解痉，对脑缺血损伤的保护作用［４－５］，还具有
治疗肿瘤的作用［６－７］。黄花忍冬（Ｌｏｎｉｃｅｒａ　ｃｈｒｙｓａｎ－
ｔｈａ）属忍冬科忍冬属的多年生灌木。目前，对其活
性成分的研究主要集中在绿原酸和多糖上［３］，而对
其中是否含有金丝桃苷及其含量检测的研究却鲜见
报道。为扩大金丝桃苷的药用来源，笔者等建立了
黄花忍冬金丝桃苷的提取方法，并运用 ＲＰ－ＨＰＬＣ
法测定了其提取液中金丝桃苷的含量，以期为黄花
忍冬的药用价值的开发及综合利用提供理论依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 黄花忍冬的花和果 材料采自吉林农业科
技学院（九站校区）校园内，经阴干、低温处理、粉碎
后备用。
１．１．２ 仪器 ＬＣ－２０Ａ型高效液相色谱仪（ＳＨＩ－
ＭＡＤＺＵ，高压泵，在线真空脱气机，进样器，柱温
箱，紫外检测器），日本岛津公司；ＬＣ色谱工作站；
索氏提取器，天津市北辰区光明玻璃仪器厂；
ＪＡ１２０３Ｎ型电子天平，上海精密科学仪器有限责任
公司；ＨＨ－８数显恒温水浴锅，金坛市晶玻实验仪器
厂。
１．１．３ 试剂 金丝桃苷对照品 （批号 １５２１－
２００２０２），中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯），
天津市福晨化学试剂厂；乙醇（分析纯），Ｄｉｍａ公司；
磷酸（优级纯），沈阳市新化试剂厂。
１．２ 方法
１．２．１ 黄花忍冬花和果中金丝桃苷的提取 精确
称取黄花忍冬的花８．０００ｇ，黄花忍冬果１０．０００ｇ。
分 别用滤纸包好，置于索氏提取器中，取９５％的乙
　［收稿日期］　２０１２－１２－０３；２０１３－０２－２０修回
　［基金项目］　吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目“黄花忍冬主要活性成分的提取及活性研究”［吉教科合字（２０１１）第２７２号］
　［作者简介］　董长颖（１９７５－），女，讲师，硕士，从事制药工程研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｃｈａｎｇｙｉｎｇ＠
櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃櫃
１６３．ｃｏｍ
［７］ 李里特．食品原料学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，
２００１．
［８］ Ｂｏｔｗｒｉｇｈｔ　Ｔ　Ｌ，Ｒｅｂｅｔｚｋｅ　Ｇ　Ｊ，Ｃｏｎｄｏｎ　Ａ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．
Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒａｔ　ｇｅｎｏｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｃｏｌｅｏｐ－
ｔｉｌｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｒｙ　ｍａｔｔｅｒ　ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ　ｉｎ　ｙｏｕｎｇ
ｗｈｅａｔ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ［Ｊ］．Ａｕｓｔ　Ｊ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００１（１５）：
４１７－４２３．
［９］ 金银根．植物学［Ｍ］．北京：科学出版社，２００８：２５２．
［１０］ 杜银仓．马铃薯淀粉生产与工艺设计［Ｍ］．昆明：云南
科技出版社，２０１１．
［１１］ 赵 钢．荞麦加工与产品开发新技术［Ｍ］．北京：科技
出版社，２０１０．
（责任编辑：聂克艳）
　贵州农业科学　２０１３，４１（４）：３４～３６
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
醇溶液２００ｍＬ，先往索氏提取器中加９５％的乙醇至
与虹吸管相平，剩余液体加入圆底烧瓶中，对样品浸
泡１２ｈ，然后在水浴锅上加热回流至无色，控制温度
在８５℃左右。将回流液倒入２００ｍＬ的容量瓶中然
后用乙醇定容至刻度，得待测液，放入冰箱中待用。
１．２．２ 黄花忍冬花和果中金丝桃苷的检测
１）色谱条件。色谱柱：ＳＨＩＭＡＤＺＵ　Ｃ１８色谱柱
（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈∶０．５％磷
酸水溶液（１∶９，Ｖ∶Ｖ）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：
２５℃；检测波长将金丝桃苷对照品溶液用标准液稀
释至适宜浓度，用紫外分光光度计于２００～４００ｎｍ
波长进行扫描，发现在３６１ｎｍ处有较强吸收峰，故
选择３６１ｎｍ 作为检测波长。理论板数不低于
３　０００，分离度大于１．８。
２）金丝桃苷对照品溶液的配制。准确称取金
丝桃苷对照品０．６μｇ，置于１ｍＬ棕色容量瓶中，加
流动相溶解并稀释至刻度，得６０μｇ／ｍＬ标准溶液。
用微孔滤膜（０．５μｍ）滤过，滤液作为对照品溶液。
３）黄花忍冬中金丝桃苷的检测。精密吸取对
照品溶液５μＬ和黄花忍冬花和果提取液各１０μＬ
（经０．５μｍ滤膜过滤），按色谱条件分别进样分析。
４）标准曲线绘制。精密吸取金丝桃苷对照品
溶液 ５．０μＬ、１０．０μＬ、１５．０μＬ、１８．０μＬ 和
２０．０μＬ，按色谱条件分别进样分析，记录色谱图。
５）黄花忍冬花和果中金丝桃苷含量的测定。
分别取制备的黄花忍冬花和果中金丝桃苷提取液各
５μＬ（经０．５μｍ滤膜过滤），平行进样５次，分别得
到各自色谱图。以进样量（ｙ）为纵坐标，峰面积（ｘ）
为横坐标得金丝桃苷线性回归方程，根据回归方程
分别计算黄花忍冬花和果中金丝桃苷的含量。
１．２．３ 测定方法的考察
１）稳定性试验。在室温条件下，取１．２．１项待
测液１０μＬ，分别于配制后２ｈ、４ｈ、６ｈ、８ｈ和１０ｈ
进样，记录金丝桃苷峰面积。
２）重复性试验。分别称取金丝桃苷样品粉末５
份（每份１．０００ｇ），按１．２．１项方法制备待测溶液，
进样１０μＬ，按１．２．２中的色谱条件进行分析测定，
记录金丝桃苷峰面积。
３）加标回收率试验。为考察方法的可靠性，进
行了回收率的测定。精密称取黄花忍冬花５份（每
份０．１００ｇ），按１．２．１项方法提取后，经０．５μｍ滤
膜过滤，进样，记录金丝桃苷峰面积。
２ 结果与分析
２．１ 黄花忍冬花和果中金丝桃苷含量的线性关系
从图１可知，黄花忍冬对照品的保留时间是
１．８６５ｍｉｎ，黄花忍冬花提取液的色谱图中有一个色
谱峰的保留时间是１．８０１ｍｉｎ，黄花忍冬果实提取
液的色谱图中有一个色谱峰的保留时间是１．８３８
ｍｉｎ，根据在相同的色谱条件下保留时间相同的色
谱峰是相同组分的原理，说明黄花忍冬的花和果实
中均含有金丝桃苷。以进样量和峰面积得到金丝桃
苷线性回归方程为 ｙ＝７．０８９　８２５×１０－７　ｘ－
７．２５３　０８３×１０－２，相关性系数Ｒ＝０．９９９　６。表明，
金丝桃苷在０．３００～１．２００μｇ范围内呈良好的线性
关系（图２）。
电
压
/m
V
125
100
75
50
20
0
0%%%2.5%%%%%%5%%%%7.5%%%10%%12.5%15.5%17.5%20
时间 /mim
黄花忍冬果实提取液黄花忍冬花提取液金丝桃苷对照品
500
400
300
200
100
0
0%%%%%%%%%2.5%%%%%%%%%%5%%%%%%%%%%7.5%%%%%%%%%10
时间 /mim
150
100
125
75
50
20
0
0%%%%%%%%%%%2.5%%%%%%%%%%%5%%%%%%%%%%%%7.5%%%%%%%%%%10
时间 /mim
1.
83
8
2.
23
2
2.
58
5
2.
85
9
3.
50
4
4.
20
2
4.
71
5
5.
55
8
6.
25
8
6.
70
8
7.
04
2
7.
30
3
7.
66
1
8.
30
2
10
.0
87
10
.6
31
1.
80
1 2.
25
1
3.
52
4
4.
21
4
4.
49
0
5.
10
4
6.
15
0
6.
98
3
11
.2
00
7.
43
3
1.
86
5
Time Time Time
Vo
lta
ge
电
压
/m
V
电
压
/m
V
Vo
lta
ge
Vo
lta
ge
图１ 金丝桃苷对照品与黄花忍冬花和果实中提取液ＨＰＬＣ的色谱图
Ｆｉｇ．１　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ＣＫ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｌ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ
进
样
量
/μ
L
Sa
m
pl
e%
siz
e
峰面积
Peak%area
0%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%500%000%%%%%%%%%%%%%%%%%1%000%000%%%%%%%%%%%%%%1%500%000
1.25
1.00
0.75
0.50
0.25
0.00
1
2
3
4
5
图２ 金丝桃苷进样量与峰面积的线性关系
　　Ｆｉｇ．２　Ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ
ｏｆ　ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ
２．２ 黄花忍冬花和果实中的金丝桃苷含量
根据回归方程分别计算黄花忍冬花和果实中金
丝桃苷的含量，黄花忍冬花中金丝桃苷的含量为
９．７５６ｍｇ／ｇ，果 实 中 金 丝 桃 苷 的 含 量 为
２．６３５ｍｇ／ｇ。
２．３ 试验方法考察
稳定性试验表明，经连续５次测定，ＲＳＤ 为
０．５８％，金丝桃苷在室温的条件下１０ｈ内是稳定
的；从表可知，重复性试验中ＲＳＤ为０．３１３％，说明
试样重复性良好；加标回收率试验中平均回收率为
·５３·
　董长颖 等　黄花忍冬花和果实中金丝桃苷含量的测定
　ＤＯＮＧ　Ｃｈａｎｇｙｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｎｄ　Ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　Ｌｏｎｉｃｅｒａｃｈｒｙｓａｎｔｈａ
表 黄花忍冬花和果实中金丝桃苷的回收率
Ｔａｂｌｅ　Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔ　ｏｆ　Ｌ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈａ
编号
Ｎｏ．
取样量／ｇ
Ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｚｅ
加入对照品／ｍｇ
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
测得量／ｍｇ
Ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｖａｌｕｅ
回收率／％
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
平均回收率／％
Ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ
相对标准偏差／％
ＲＳＤ
１　 ０．１０１　 １．０００　 １．９８５　 ９９．５０　 ９９．４２　 ０．３１３
２　 ０．１００　 １．０００　 １．９７６　 ９９．４０
３　 ０．１０５　 １．０００　 ２．０２４　 ９９．６０
４　 ０．１０６　 １．０００　 ２．０３４　 ９８．９０
５　 ０．１０２　 １．０００　 １．９９５　 ９９．７０
９９．４２％，说明此方法可用于黄花忍冬花中金丝桃苷
的含量测定。
３ 小结与讨论
１）考察了乙腈－甲醇－水、乙腈－甲醇－０．１％醋酸
水溶液、乙腈－０．５％磷酸水溶液作为流动相时对样
品中金丝桃苷的洗脱能力，以乙腈－０．５％磷酸水溶
液比较适合于金丝桃苷的分离分析，故选择乙腈
－０．５％磷酸水溶液作为流动相。用甲醇（６０％，
７０％，８０％，９０％，无水甲醇）和乙醇（６０％，７０％，
８０％，９５％，无水乙醇）为提取剂进行提取时，以
９５％乙醇的溶液，提取金丝桃苷的量最多，且回收率
最好。在７０℃、７５℃、８０℃、８５℃、９０℃和１００℃进行
样品提取时，当提取温度低于８５℃，提取液中金丝
桃苷的量显著降低。因此，在提取过程中应注意温
度的控制，提取温度最好不要高于８５℃，否则对提
取结果会有很大的影响。
２）将金丝桃苷对照品溶液用标准液稀释至适
宜浓度，用紫外分光光度计于２００～４００ｎｍ波长进
行扫描，发现在３６１ｎｍ 处有较强吸收峰，故选择
３６１ｎｍ作为检测波长。以９５％的乙醇－水溶液为提
取剂，采用索氏提取法对黄花忍冬中金丝桃苷进行
提取，并借助高效液相色谱仪进行定性定量分析。
结果表明，黄花忍冬含有金丝桃苷且含量较高，花中
的含量为９．７５６ｍｇ／ｇ，果中含量为２．６３５ｍｇ／ｇ。
黄花忍冬可以作为金丝桃苷新来源的一种中草药。
目前，黄花忍冬多数为城市的绿化树种，其花和
果是一种尚未被开发利用且很有价值的药用资源，
我国黄花忍冬资源极为丰富，需要对其进行开发研
究，使之得到合理应用。该研究为黄花忍冬药用价
值的开发和利用奠定了理论依据，且还为金丝桃苷
提供了一种新的药源。
［参 考 文 献］
［１］ 李会军，李 萍．忍冬花蕾的化学成分研究［Ｊ］．林产
化学与工业，２００５，２５（３）：２９－３２．
［２］ 于加平，蔡金玲．黄花忍冬花中绿原酸的提取及含量
的测定［Ｊ］．北方园艺，２００９（２）：８８－８９．
［３］ 于加平，常 序，李文渊．超临界ＣＯ２处理黄花忍冬果
后多糖的提取及含量的测定［Ｊ］．西南农业学报，
２０１０，２３（１）：１８１－１８３．
［４］ 陈红艳，王建华，杨新波，等．金丝桃苷对大鼠脑缺血
再灌注氧化应激损伤的影响［Ｊ］．解放军药学学报，
２００７，２３（２）：８８－９１．
［５］ 彭国平，魏尔清，葛求富，等．Ｈｙｐ对离体缺氧／缺糖再
灌注脑损伤的保护作用［Ｊ］．中国药学杂志，２００６，４０
（６）：４３４－４３６．
［６］ Ａｍｉｔ　Ｃ，Ｋｒｉｓｔｉｎｅ　Ｌ，Ｗｉｌｅｔｔ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｙｔｏ－
ｃｈｒｏｍｅ　ＣＹＰ１ｅｎｚｙｍｅｓ　ｂｙ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｓｔ．Ｊｏｈｎ＇ｓ
ｗｏｒｔ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００６，２（１７）：１９４－１９６．
［７］ Ｋａｔａｒｉｎａ　Ｈ，Ｊｕｅｒｇｅｎ　Ｒ，Ｓｉｌｖｉａ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｙｐｅｒｆｏｒｉｎａ
ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｔ．Ｊｏｈｎ＇ｓ　ｗｏｒｔ（ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ
Ｌ．）ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅｓ　ａｎｄ　ｗｉｔｈ　ｈｙｐｅｒｉｃｉｎ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｙ　ｅｘｅｒｔ
ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｏｗａｒｄｓ　ｈｕｍａｎ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ［Ｊ］．
Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈａｒｍａ－
ｃｅｎｔｉｃｓ，２００３（５６）：１２１－１２３．
（责任编辑：杨　林）
·６３·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ