全 文 ：菌物研究 2006 , 4(3):31-34
Journal of Fungal Research Vol.4 ,No.3 , 2006 ISSN 1672-3538
灰树花提取物清除氧自由基的研究
周昌艳1 , 唐庆九1 , 王　军2 , 刘　峻3 , 杨　焱1
1.上海市农业科学院食用菌研究所 ,上海 201106
2.安徽中医学院 ,安徽 合肥 230031
3.中国药科大学 ,江苏 南京 210009
摘　要:采用化学发光法比较了灰树花各提取物对超氧阴离子自由基 、羟基自由基的清除效果。研究结果表
明 ,灰树花子实体和菌丝体的提取物对羟基自由基均有很好的清除作用 , 灰树花菌丝体水提物(GFME)、灰树
花子实体水提物(GFE)、灰树花子实体水提多糖(GFP)、灰树花子实体碱提多糖(GFAP)清除羟基自由基的 IC50
均小于 1.0 mg/mL, 其他提取物清除羟基自由基的 IC50也均小于 3.0 mg/mL。 而对超氧阴离子自由基仅
GFME、GFMP、GFE有清除作用 , 其他的提取物清除作用很弱。
关键词:灰树花提取物;超氧阴离子自由基;羟基自由基
中图分类号:R284.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1672-3538(2006)03-0031-04
　　氧自由基主要指超氧阴离子(O-2 )、羟自由基
(OH·)、单线态氧(1O2)和过氧化氢(H2O2)等 。氧
自由基过多时或清除过慢可使许多生物大分子 ,
如核酸 、蛋白质 、多糖 、膜多聚不饱和脂肪酸及各
种细胞受到攻击 ,从而加速机体的衰老进程 ,并诱
发各种疾病。这些反应被认为与炎症 、自身免疫 、
肿瘤 、心脑缺血和衰老等疾病的成因直接有关[ 1] 。
因此 ,寻找可以用于临床 、能够清除活性氧自由基
的天然药物有极其重要的价值 。
灰树花(Grifola frondosa)别名舞茸 、贝叶多孔
菌 、云蕈 、栗子蘑(河北)、莲花菇(福建)。它隶属
于层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyl-
lophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、树花属。其
子实体肉质脆嫩 、香味独特 ,味道鲜美 、口感极佳 ,
营养配比合理 ,人体氨基酸含量高 ,维生素及矿物
质含量丰富 ,其蛋白质中色氨酸含量极高 ,维生素
E的含量仅次于胡麻油 ,同时 ,锌 、锡 、钙 、铁 、铜含
量较高 。日本坂然的《菌谱》认为它“味甘 ,无毒 ,
可治痔” 。现代研究表明 ,灰树花具有抗肿瘤 、增
强免疫力;抗高血压 ,降低血糖和血脂;抗各类肝
炎病毒的作用等。本研究采用生物化学发光法对
灰树花提取物清除 O-2 和OH·自由基的效果进行
了研究 ,希望能对灰树花的药用价值及进一步开
发利用提供科学依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
灰树花干品购于浙江庆元 ,灰树花菌丝体由
上海市农科院食用菌研究所药用菌研究室准备。
试验所用仪器包括 DKZ 电热恒温振荡水槽 、LD4-
2型离心机 、SGH-I生物化学发光测量仪 、分析天
平 、PHS-25型酸度计。
1.2　试验方法
1.2.1　灰树花提取物的制备　以灰树花子实体
或菌丝体干品与蒸馏水按 1∶10的比例在沸水浸
提 3次 ,每次 1 h ,过滤后浓缩 ,浓缩物经冷冻干燥

通讯作者:周昌艳 , E-mail:changyanz@sina.com.cn
基金项目:上海市科学技术委员会攻关项目(013912048)
作者简介:周昌艳(1969-),女 ,副研究员 ,主要从事药用真菌应用研究。
收稿日期:2006-07-15
即得灰树花子实体水提物(GFE)与菌丝体水提物
(GFME)。
粗多糖的提取:以灰树花子实体或菌丝体干
品与蒸馏水按 1∶10的比例在沸水浸提 ,或以碱性
溶液按1∶10的比例在室温下浸提 ,均为每次 1 h ,
共3 次 ,过滤后浓缩 , 碱提液需中和后浓缩 ,用
95%乙醇沉淀 ,离心 ,冷冻干燥即得灰树花子实体
水提多糖(GFP)、灰树花子实体碱提多糖(GFAP)、
灰树花菌丝体水提多糖(GFMP)或灰树花菌丝体
碱提多糖(GFMAP)。灰树花菌丝体胞外多糖由液
体发酵时的发酵液经浓缩后乙醇沉淀 ,离心 ,冷冻
干燥获得 ,即得灰树花菌丝体胞外多糖(GFMYP)。
1.2.2　对超氧阴离子自由基 O-2 的清除能力的
测定 　测定方法见参考文献 [ 2] 。向测量管
(5 mL)中加入 20 μL待测样品(以 20μL 蒸馏水作
空白对照),再加入 10μL 1×10-3 mol/L 邻苯三酚
溶液与反应池中 ,原位注入 970 μL 鲁米诺-pH
10.2碳酸缓冲液混合液(体积比 1∶2)启动发光 ,
记录发光强度 CL。
1.2.3　对羟自由基 OH-的清除能力的测定　测
定方法参见文献[ 3] 。向测量管中依次加入 50 μL
待测样品(以 50 μL 蒸馏水作空白对照),再加入
50 μL 1 ×10-3 mol/LCuSO4 溶液 、20 μL 1 ×
10-3 mol/L抗坏血酸溶液 、50 μL 1×10-3 mol/L邻
菲罗啉溶液 、50μL 0.15 mol/L H2O2 溶液 ,放入反
应池中。原位注入 780 μL pH 9.24 、0.05 mol/L硼
砂溶液启动发光 ,记录发光强度CL。
一定浓度范围内发光强度(CL)与自由基数
量具有相关性 ,清除自由基的物质可以降低 CL ,
根据 CL下降程度可以判断这些物质清除自由基
的能力。清除率按下式进行计算:
发光抑制率=〔(CL对照-CL样品)/ CL对照〕×100%
一般用发光抑制率为 50%时的浓度 IC50来衡
量样品对自由基的清除能力 ,其值越小 ,样品清除
自由基能力越强。每个样品测量 3个不同浓度时
的抑制率 ,计算 IC50 ,每个浓度测量 3次。
2　结果与分析
灰树花不同提取物对化学发光法产生的超氧
阴离子自由基O-2 清除能力见图 1。除 GMAP 外 ,
其他的灰树花提取物对 O-2 都有一定的清除能
力。研究发现 ,各个提取物对化学发光的抑制率
随提取物浓度的增加而上升 ,菌丝体提取物的抑
制率大小顺序为 GFME >GFMP >GFMAP >
GFMYP ,而子实体提取物的抑制率大小顺序为
GFE>GFAP >GFP。在供试样品中以 GFME 对
O-2 的清除能力最强 ,当其样品浓度为 0.2 mg/mL
时其化学发光抑制率高于 40%,当样品浓度为
10 mg/mL时 ,其化学发光抑制率高于 80%。
图 1　灰树花不同提取物清除 O-2 的能力
Fig.1.O-2 free radical-scavenging activity of Grifola frondosa extracts
32 　菌　物　研　究　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006年
　　灰树花不同提取物对化学发光法产生的羟
自由基OH·清除能力分析见图 2。灰树花的各个
提取物对羟自由基OH·都有很好的清除效果 。各
个提取物对化学发光的抑制率随提取物的浓度增
大而上升 ,除GMAP外 ,1.0 mg/mL的各提取物其
对化学发光的抑制率达到 50%以上 ,10 mg/mL的
提取物对化学发光的抑制率达到 98%以上。灰
树花子实体的提取物对化学发光抑制的强弱顺序
为GFAP >GFP >GFE ,菌丝体的提取物对化学发
光抑制的强弱顺序是GFME>GFMYP >GFMAP>
GFMP。
图 2　灰树花不同提取物清除 OH·的能力
Fig.2.OH· free radical-scavenging activity of Grifola frondosa extracts
　　灰树花不同提取物清除氧自由基的 IC50研究
结果(表 1)表明 ,灰树花的各提取物中 ,GFME 、
GFE 、GFMP清除 O-2 的 IC50值小于 10 mg/mL ,表
明具有较强的清除 O-2 的能力。GFP 和GFAP 有
一定的清除O-2 的能力 ,GFMYP和GFMA清除O-2
的 IC50值太大 ,对其清除作用较弱。灰树花子实
体的各提取物和菌丝体的 GFME与 GFMYP 清除
OH·的 IC50值小于 1.0 mg/mL , GFMP 与 GFMAP
清除OH·的 IC50值也小于 10 mg/mL。由此表明 ,
灰树花各提取物清除OH·的能力要高于清除 O-2
的能力。
表 1　灰树花不同提取物清除氧自由基的 IC50
Table 1.IC50 of scavenging free radicals about extracts from Grifola frondosa
样品
Sample
GFME GFMYP GFMP GFMAP GFE GFP GFAP
IC50—O -2 /(mg·mL-1) 3.42 76 849.88 2.61 2 830.9 6.30 48.17 21.58
IC50—OH·/(mg·mL-1) 0.41 0.71 2.61 1.03 0.54 0.36 0.34
3　讨　论
众所周知 ,在生命活动的新陈代谢过程中 ,自
由基是生命活动过程中生物化学反应的中间产
物。正常健康机体内自由基的形成和清除总是处
于一种动态平衡中 。一旦这种动态平衡受到破
坏 ,就会导致自由基损伤 ,引起疾病的发生。科学
研究的结果证明 ,氧自由基几乎和人类大部分常
见疾病都有关系 ,从人类死亡率最高的心脑血管
疾病到人类最可怕的癌症 ,以及近年来对人类造
成巨大威胁的艾滋病 ,无一不和氧自由基有着密
切关系[ 4] 。补充外源氧自由基清除剂有利于体内
氧自由基的平衡。灰树花各提取物具有清除OH·
和O-2 的活性 ,说明灰树花所含化学物质与氧自
由基有明显的化学作用。此研究结论对临床药物
筛选 、抗衰老 、抗肿瘤 、防病治病具有重要的参考
33第 4卷　第 3期　　　　　　　　　　　　周昌艳等:灰树花提取物清除氧自由基的研究
价值 。目前人们难以模拟生物体内各种生物酶和
活性氧自由基的浓度大小及真实的反应机理 ,因
此选择不同抗氧化剂清除氧自由基 、保护细胞和
组织免受损伤或减轻其受损程度 , 将是天然产物
领域一个重要的研究课题 。
参考文献:
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由基的建立[ J] .基础医学与临床 , 1998 , 18(6):68-71.
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27(5):35-39.
Scavenging Effects of Extracts of Grifola frondosa on Active Oxygen Radicals
ZHOU Chang-yan1 , TANG Qing-jiu1 , WANG Jun2 , LIU Jun3 , YANG Yan1
1.Institute of Edible Mushroom , Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 201106 , China
2.Anhui College of Chinese Traditional Medicine , Hefei , Anhui 230031 , China
3.Chinese Pharmerceutical University , Nanjing , Jiangsu 210009 , China
Abstract:The chemiluminesence method was used to detect the effect of the extracts of Grifola frondosa
on scavenging OH· and O-2 .The research result shows that the extracts of G.frondosa fruit body and
mycelia have an expected capacity of scavenging OH·.The IC50 s of water extraction of G.frondosa
mycelia(GFME), water extraction of G.frondosa fruit body (GFE), the polysaccharide of G.frondosa
fruit body(GFP)and alkaline-extracted polysaccharide of G.frondosa(GFAP)on scavenging OH·were
less than 1.0 mg/mL , while the IC50s of other extractions of G.frondosa were all less than 3.0 mg/mL.
GFME , GFMP and GFE possessed the effect of scavenging O-2 , but the other extractions of G.frondosa
didn′t show evident effect.
Key words:extracts of Grifola frondosa;O-2 free radical;OH·free radical
更 正
《菌物研究》2006年第 4卷第2期第38页“孙　军1＊”改为“孙　军1 , 2＊” 。特此更正 。
34 　菌　物　研　究　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006年