全 文 ：作者简介:刘刚 ,男 ,副主任 ,副主任药师　　研究方向:药物分析　　Tel:(010)66356187　　E-mail:gangl808@vip.sina.com
变换波长 HPLC测定七味广枣丸中丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯
的含量
刘刚 1 ,李勉珊 1 ,谢雅君 1 ,刘琰 2 ,谭生建 1(1.中国人民解放军第 306医院药学部 , 北京 100101;2.安徽医科大学药学系 , 合肥
230601)
摘要:目的　建立高效液相色谱法测定七味广枣丸中丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法。方法　色谱柱为 Agi-
lentZORBAXEclipseSB-C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm);流动相为 5%乙腈-乙腈(58∶42);流速为 1 mL· min-1;检测波长程
序:0 ～ 15.0 min为 280 nm;15.1 ～ 40 min为 225 nm。结果　丁香酚 , 木香烃内酯和去氢木香内酯的保留时间分别约为 6, 21
和 24min,与相邻峰的分离度大于 1.5。以峰面积对进样浓度 (μg· mL-1)线性回归 , 丁香酚回归方程为 Y=0.104 5ρ-
6.161, r=0.999 9, 线性范围 0.552 0 ～ 13.80 μg;木香烃内酯回归方程为 Y=0.095 39ρ-0.297 2, r=0.999 9, 线性范围
0.074 00 ～ 1.850 μg;去氢木香内酯回归方程为 Y=0.078 51ρ-0.079 49, r=0.999 8, 线性范围 0.059 50 ～ 1.488 μg;丁香酚 ,
木香烃内酯和去氢木香内酯的回收率分别为 99.2%, 101.3%和 97.0%, RSD分别为 0.89%、1.6%和 1.6%。结论　本方法
操作简便 , 测定结果准确 ,重复性好 ,可用于七味广枣丸中丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的同时测定。
关键词:高效液相色谱法;七味广枣丸;丁香酚;木香烃内酯;去氢木香内酯
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-2494(2011)01-0064-03
DeterminationofEugenol, CostunolideandDehydrocostuslactoneinQiweiGuangzaoPilsbyHPLC
LIUGang1 , LIMian-shan1 , XIEYa-jun1 , LIUYan2 , TANSheng-jian1(1.DepartmentofPharmacy, Hospital306 of
PLA, Beijing100101, China;2.DepartmentofPharmacyAnHuiMedicalUniversity, Hefei230601, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishaHPLCquantitativemethodforthedeterminationofeugenol, costunolideanddehydrocos-
tuslactoneinQiweiGuangzaopils.METHODS　TheseparationwasperformedonaC
18
column(AgilentZORBAXEclipseSB-C
18
,
4.6 mm×150mm, 5 μm), withthemobilephaseconsistedof5% acetonitrile-acetonitrile(58∶42).Theflowrateof1mL· min-1.
Thedetectivewavelengthwassetat280 nm(0 ～ 15 min), 225 nm(15.1-40 min).RESULTS　Theretentiontimesofeugenol,
costunolideanddehydrocostuslactonewereabout6, 21 and24 min.Theresolutionwasabove1.5.Theregressequationforeugenol
wasY=0.104 5ρ-6.161, r=0.999 9, andthelinearrangewas0.552 0-13.80 μg.TheequationofcostunolidewasY=0.095 39
ρ-0.297 2, r=0.999 9, andthelinearrangewas0.074 00-1.850 μg· mL-1.TheequationofdehydrocostuslactonewasY=
0.078 51ρ-0.079 49, r=0.999 8, andthelinearrangewas0.059 50-1.488 μg.Theaveragerecoveriesofeugenol, costunolide
anddehydrocostuslactonewere99.2%, 101.3% and97.0%withRSDsof0.89%, 1.6% and1.6%.CONCLUSION　Thismeth-
odissimple, time-savingandaccurate.Itcanbeusedforroutineanalysisofeugenol, costunolideanddehydrocostuslactoneinQiwei
Guangzaopils.
KEYWORDS:HPLC;QiweiGuangzaopils;eugenol;costunolide;dehydrocostuslactone
　　七味广枣丸由广枣 、肉豆蔻 、丁香 、木香 、枫香
脂 、沉香 、牛心粉加工制成 ,收载于 2010年版 《中国
药典》,具有养心益气 ,安神功能 ,用于胸闷疼痛 ,心
悸气短 ,心神不安 ,失眠健忘。七味广枣丸质量标准
中有性状 、鉴别 、检查等项目 ,没有含量测定 。丁香
中含有丁香酚 ,木香中含有木香烃内酯和去氢木香
内酯 ,丁香酚的含量测定方法报道有气相色谱法 [ 1]
和高效液相色谱法[ 2] ,川木香或木香中木香烃内酯
和去氢木香内酯的含量测定方法报道有高效液相色
谱法 [ 3-4] 。本实验建立了高效液相色谱法同时测定
七味广枣丸中丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯
含量的方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器
高效液相色谱仪 (Agilent1200系列)包括:
G1311A四元色谱泵 , G1329A自动进样器 , G1315B
二极管阵列检测器 , G2170BA色谱工作站 , G1316A
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柱温箱和 G1379B在线脱气机。
1.2　试药
丁香酚对照品(批号:110725-200711),木香烃
内酯对照品(批号:111524-200503),去氢木香内酯
对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:110525-
200505)。七味广枣丸 (中国人民解放军第 306医
院制剂室 ,批号:090331、090401、090402)。乙腈为
色谱纯 ,水为纯化水 ,其他试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　试液制备
2.1.1　混合对照品溶液制备　分别取丁香酚 ,木香
烃内酯和去氢木香内酯对照品适量 ,精密称定 ,用流
动相溶解并稀释制成每 1 mL分别含丁香酚 276.0
μg,木香烃内酯 37.00μg和去氢木香内酯 29.75μg
的混合对照品溶液 ,摇匀 ,即得 。
2.1.2　供试品溶液制备　取重量差异项下的本品 ,
剪碎 ,取约 2.0 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密
加入流动相 50mL,密塞 ,称定重量 ,超声处理(功率
250W,频率 50kHz)40 min,放冷 ,再称定重量 ,用
流动相补足减失的溶剂 , 摇匀 ,用微孔滤膜(0.45
μm)滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.1.3　阴性供试品溶液制备　按照七味广枣丸的处
方和制法 ,分别制备不含丁香 ,不含木香的七味广枣
丸 ,分别作为丁香阴性样品和木香阴性样品 。取阴性
样品适量(相当七味广枣丸约 2.0g),精密称定 ,按供
试品溶液制备方法制备 ,即得阴性供试品溶液。
2.2　专属性
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
(AgilentZORBAX EclipseSB-C18 , 4.6 mm ×150
mm, 5μm);流动相为 5%乙腈 -乙腈(58∶42);流速
1 mL· min-1 , 检测波长 0 ～ 15 min为 280 nm;
15.1 ～ 40min为 225 nm。在此色谱条件下 ,分别取
混合对照品溶液 ,丁香阴性供试品溶液 ,木香阴性供
试品溶液和七味广枣丸供试品溶液各 10 μL,注入
液相色谱仪 ,记录色谱图 ,结果见图 1。图 1显示 ,
七味广枣丸中其他成分对丁香酚 ,木香烃内酯和去
氢木香内酯的测定没有干扰。丁香酚 ,木香烃内酯
和去氢木香内酯的保留时间分别约为 6, 21, 24min,
理论板数分别约为 5 000, 4 000和 7 000;丁香酚 ,木
香烃内酯和去氢木香内酯与相邻峰的分离度
大于 1.5。
2.3　线性关系
分别取丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯对
照品适量 ,精密称定 ,用流动相溶解并稀释制成每 1
mL含丁香酚分别为 55.20, 82.80, 138.0 , 276.0,
552.0 , 1 380 μg, 含木香烃内酯分别为 7.400,
11.10 , 18.50, 37.00, 74.00, 185.0 μg,含去氢木香
内酯分别为 5.950, 8.925, 14.88, 29.75, 59.50,
148.8 μg的混合对照品溶液 ,分别取 10 μL进样 ,
丁香酚色谱峰面积分别为 544.80 , 816.2, 1 378.4,
2 726.0, 5 427.7和 13 221.6,木香烃内酯色谱峰面
积分别为 90.30, 122.3, 192.6, 382.8, 776.8 和
1 944.7,去氢木香内酯色谱峰面积分别为 71.80,
99.90 , 194.8, 387.9 , 778.2和 1 887,以进样浓度对
峰面积线性回归 ,结果见表 1。
2.4　定量限
取对照品溶液稀释至峰高约为基线噪音的 10
倍 ,测得丁香酚 ,木香烃内酯和去氢木香内酯的定量
限分别约为 0.003 , 0.001和 0.001μg。
2.5　重复性
2.5.1　对照品连续进样重复性　取丁香酚(276.0
μg· mL-1),木香烃内酯(37.00 μg· mL-1)和去氢
　　
图 1　对照品和样品色谱图
A-混合对照品溶液;B-丁香阴性;C-木香阴性;D-七味广枣丸
Fig.1　HPLCChromatogramsofchemicalreferencesubstances
andsamples
A-referencesubstance;B-samplenegativeDingxiang;C-samplenegativeMux-
iang;D-sampleQiweiGuangzaopils
表 1　丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯的线性回归分析
Tab.1　Regressionanalysisofeugenol, costunolideandde-
hydrocostuslactone
Standards Regressionequations
Linearrange
/μg· mL-1 r
Eugenol Y=0.104 5ρ-6.161 55.20-1 380 0.999 9
Costunolide Y=0.095 39ρ-90.297 2 7.400-185.0 0.999 9
DehydrocostuslactoneY=0.078 51ρ-0.079 49 5.950-148.8 0.999 8
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木香内酯(29.75μg·mL-1)混合对照品溶液 10μL
进样 , 连续进样 5次 , 丁香酚色谱峰面积分别为
2 751.3, 2 750.3, 2 750.2, 2 763.7和 2 749.6, RSD
为 0.22%,木香烃内酯色谱峰面积分别为 386.6,
389.0, 386.6, 390.3和 388.8, RSD为 0.42%,去氢
木香内酯色谱峰面积分别为 379.4, 380.4, 377.2,
384.7和 378.9, RSD为 0.74%。
2.5.2　样品测定重复性　取同一批样品(090331)
重复制备 6个七味广枣丸供试品溶液 ,按样品测定
项下方法测定 ,丁香酚含量分别是 6.372, 6.468,
6.340, 6.217, 6.346 和 6.340 mg· g-1 , RSD为
1.3%, 木香烃内酯含量分别是 1.106, 1.116,
1.104, 1.107, 1.137 和 1.153 mg· g-1 , RSD为
1.8%,去氢木香内酯含量分别是 0.566 0, 0.579 0,
0.560 0, 0.567 7, 0.554 8和 0.565 6 mg·g-1 , RSD
为 1.4%。
2.6　加样回收率
取已经测得含量的七味广枣丸(批号 090401,
每 1 g含丁香酚 ,木香烃内酯和去氢木香内酯分别
为 5.832, 1.094和 0.705 2 mg)适量 ,精密称定 ,置
10 mL量瓶中 ,精密加入 1 104 μg· mL-1的丁香酚
对照品溶液 1 mL, 74.00 μg· mL-1的木香烃内酯对
照品溶液 3mL, 119 μg·mL-1的去氢木香内酯对照
品溶液 1 mL,用流动相稀释至刻度 ,超声处理(功率
250W,频率 50kHz)40 min,放冷至室温 ,用流动相
补足减失的溶剂 ,摇匀 ,用微孔滤膜 (0.45 μm)滤
过 ,取续滤液 ,作为加样回收样品 。同法制备 6份加
样回收样品 ,按照样品测定项下方法测定含量 ,计算
回收率 ,结果丁香酚 、木香烃内酯和去氢木香内酯的
回收率为 99.2%, 101.3%, 97%, RSD为 0.89%,
1.6%, 1.6%。
2.7　供试品溶液稳定性
配制供试品溶液 ,置自动进样器中 , 29 h内重
复进样测定 9次 ,丁香酚 ,木香烃内酯 ,去氢木香内
酯峰面积的 RSD分别为 1.0%, 1.4%和 1.1%,显
示供试品溶液在 29 h内稳定 。
2.8　样品测定
2.8.1　混合对照品溶液制备　分别取丁香酚 ,木香
烃内酯和去氢木香内酯对照品适量 ,精密称定 ,用流
动相溶解并稀释制成每 1 mL分别含丁香酚 276.0
μg,木香烃内酯 37.00μg和去氢木香内酯 29.75μg
的混合对照品溶液 ,摇匀 ,即得 。
2.8.2　供试品溶液制备　取重量差异项下的本品 ,
剪碎 ,取约 2.0 g,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密
加入流动相 50 mL,密塞 ,称定重量 ,超声处理(功率
250 W,频率 50 kHz)40 min,放冷 ,再称定重量 ,用
流动相补足减失的溶剂 ,摇匀 ,用微孔滤膜 (0.45
μm)滤过 ,取续滤液 ,即得 。
2.8.3　测定法　分别精密吸取混合对照品溶液和
供试品溶液各 10 μL注入液相色谱仪 ,测定 ,按外标
法以峰面积计算。测定了 3批样品 ,结果见表 2。
3　讨　论
3.1　丁香酚有 2个吸收峰 ,分别在 200和 280 nm,
为减少其他组分干扰 ,本实验选用 280nm波长处测
定丁香酚;木香烃内酯和去氢木香内酯的吸收峰都
在 202 nm波长附近 ,逐步至 260 nm波长处降低到
零 ,本实验参考 《中国药典 》[ 4]选用 225 nm波长处
测定木香烃内酯和去氢木香内酯 。
3.2　实验过程中分别试用了甲醇-水和乙腈-水作
为流动相 ,结果显示 ,使用乙腈-水作为流动相木香
烃内酯和去氢木香内酯峰形较好 ,故使用乙腈 -水作
为流动相 。
3.3　以流动相为溶剂 ,实验了超声(功率 250W,频
率 50 kHz)不同时间的提取效果 ,结果显示 ,超声 40
min可以提取完全 ,因此 ,确定超声时间为 40min。
3.4　本法操作简便 ,测定结果准确 ,重复性好 ,可用
于七味广枣丸中丁香酚 ,木香烃内酯和去氢木香内
酯含量的同时测定 。
表 2　含量测定结果
Tab.2　Resultsofsampledetermination
Lot Eugenol/% Costunolide/% Dehydrocostuslactone/%
090331 0.63 0.11 0.057
090401 0.58 0.11 0.071
090402 0.58 0.11 0.071
REFERENCES
[ 1] 　Ch.P(2010)VolⅠ(中国药典 2010年版.一部)[S] .2010:4.
[ 2] 　ZHAOM, FUC, XUBX.Determinationofeugenolindinggui
sanbyRP-HPLC[ J].SpectroscSpectralAnal(光谱学与光谱分
析), 2003, 23(4):40-41.
[ 3] 　WANGYB, XUH, WANGQ.Determinationofcostunolideand
dehydrocostuslactoneinaplotaxisanriculatabyRP-HPLC[ J].
NorthwestPharmJ(西北药学杂志), 2000, 15(6):250-251.
[ 4] 　Ch.P(2010)VolⅠ (中国药典 2010年版.一部)[ S].2010:
58.
(收稿日期:2010-08-10)
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