全 文 ： 脆江蓠多糖提取及其对肿瘤细胞抑制作用
鞠瑶瑶 1，曹纯洁 1，陈美珍*，叶天文
（汕头大学理学院，广东 汕头 515063）
摘要：目的：研究脆江蓠多糖（Polysaccharides from Gracilariachouae，GLP）的提取方法及其对肿瘤细胞
生长的影响。方法：响应面法优化 GLP提取工艺条件；MTT法检测 GLP对体外培养的人宫颈癌（HeLa）、
食道癌（EC-109）、肝癌（HepG-2）以及乳腺癌（MCF-7）细胞生长的影响。结果：GLP 最佳提取条件为
热水浸提温度 93.1℃、料水比 1:61.5(g/mL)、超声时间 35min，在此条件下多糖提取得率为 16.75%。GLP
在作用浓度为 200~1000 µg/mL范围内，对实验细胞均有抑制作用，且呈剂量依赖关系。当 GLP浓度为 1000
µg/mL时，其对 HeLa、HepG-2、MCF-7和 EC-109细胞的抑制率分别为 49.11%、41.18%、34.98% 和 31.33%。
对 Hela细胞形态学观察以及 Annexin V-FITC/PI荧光染色检测发现，随着多糖给药剂量的增加，凋亡和坏
死细胞不断增多。结论：GLP对体外培养的人 HeLa、EC-109、HepG-2以及MCF-7等癌细胞增殖有抑制作
用，并能诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：脆江蓠多糖；提取；HeLa细胞；凋亡

Extraction of Polysaccharides from Gracilariachouae and its inhibitory effect on tumor cells
JU Yaoyao1, CAO Chunjie1, CHEN Meizhen*,,YE Tianwen,
(College of Science, Shantou University, Shantou 515063, China)
Abstract：Objective: The extraction and inhibitory effect on tumor cells of polysaccharides from Gracilariachouae
（GLP）were investigated in this paper. Methods: Response surface methodology was used to optimize the
extraction process for polysaccharide from Gracilariachouae.MTT method was used to determine the effect of
GLP on the proliferation of HeLa, EC-109, HepG-2 and MCF-7 cells proliferation. Results: the optimal extraction
conditions were temperature 93.1℃, material-to-liquid ratio of 1:61.5(g/mL), ultrasonification time of 35min.
Under these extraction conditions, maximum yield of Polysaccharide was 16.75%. GLP revealed anti-proliferation
effect on HeLa, EC-109, HepG-2 and MCF-7 cells, with a dose-dependent relationship when the concentration of
GLP was 200-1000µg/mL. When the concentration was up to 1000µg/mL, the inhibition rate to above four cells
was 49.11%, 41.18%, 34.98%, 31.33% respectively. With the increasing of GLP dose apoptosis and necrosis cells
increased by cell morphology observation and Annexin V - FITC/PI fluorescence double staining detection，among
a certain concentration. Conclusions: GLP could induce cancer cells apoptosis.
Key words: polysaccharides from Gracilariachouae(GLP); extraction; HeLa; apoptosis.
中图分类号： R 931 文献标志码：A A文章编号：






收稿日期：
基金项目：广东省科技计划项目（2013B0203012005）；2013 年汕头大学实验教学示范中心项目（生物学
实验教学中心）；2013 年广东省高等学校教学质量与教学改革工程本科类立项建设项目（省级实验教学示
范中心建设项目——汕头大学生物学实验教学中心）
作者简介：曹纯洁（1990—），男，硕士研究生，主要从事生物活性物质研究与开发。E-mail：13cjcao@stu.edu.cn
*通信作者：陈美珍（1956—），女，教授，本科，主要从事生物活性物质研究与开发。E-mail：chenmz@stu.edu.cn

2016-03-04
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网络出版时间：2016-03-04 16:02:14
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.2206.TS.20160304.1602.004.html

脆江蓠(Gracilariachouae)属红藻门(Rhodophyta)、真红藻纲(Florideae)、杉藻目(Gigartinales)、江蓠
科(Gracilariaceae)、江蓠属(Gracilaria) [1]，是一种新型的养殖海藻，目前已在广东省南澳沿海养殖成
功并可大面积种植。多糖是脆江蓠的主要活性成分之一。关于海藻多糖提取的研究很多，传统工艺有
热水浸提法，稀酸、稀碱浸提法等。新工艺包括酶法、超声波辅助法、微波辅助浸提法、超滤法[2]等。
其中热水浸提法因其操作简便、成本低廉等特点而被广泛使用。研究发现江蓠属的龙须菜多糖具有多
种生物活性，如 Fan等[3]研究发现龙须菜酸性多糖可以有效抑制 H22肝癌细胞的生长，陈美珍等[4]对
龙须菜多糖研究表明龙须菜多糖具有抗肿瘤、抗氧化等生理活性。然而，国内外对江蓠属的脆江蓠的
研究报道主要集中在品种的改良、栽培等方面，对其多糖的提取及生理活性的研究报道甚少。本文将
对脆江蓠多糖的提取及体外抗肿瘤活性展开研究，以期为脆江蓠多糖的加工以及利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料与试剂
脆江蓠 广东省汕头大学南澳实验站提供。
细胞株：人宫颈癌 HeLa细胞株 汕头大学多学科中心；食道癌细胞(EC-109)、肝癌细胞(HepG-2)、
乳腺癌细胞(MCF-7) 温州医学院。
半乳糖标准品 中国食品药品检定研究院；牛血清白蛋白（分析纯） 美国 Sigma公司；DMEM
高糖培养基 美国 Hyclone 公司；胎牛血清 杭州四季青科技有限公司；四甲基偶氮唑蓝（methyl
thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO） 美国 Amresco公司；阳性
药物 5-氟尿嘧啶（5-FU） 上海源叶生物科技有限公司；胰酶细胞消化液、青霉素-链霉素溶液 、Annexin
V-FITC/PI细胞凋亡与坏死检测试剂盒 碧云天生物技术研究所。
1.2 仪器与设备
高速万能粉碎机 天津市泰斯特仪器有限公司；NJL07-5超声波细胞粉碎机 南京杰全微波设备有
限公司；HH-2型恒温水浴锅 国华电器有限公司；Universal 320R台式冷冻离心机 德国 Hettich公司；
低温冷冻干燥机 上海比朗仪器有限公司；3111型 CO2细胞培养箱 美国 Thermo公司；CK30倒置
显微镜 日本 Olympus 公司；倒置荧光显微镜 日本 Nikon 公司；-65℃超低温冰箱 中科美菱低温科
技有限责任公司；全波段扫描酶标仪 瑞士 Tecan公司。
1.3 方法
1.3.1脆江蓠多糖的提取工艺流程
脆江蓠洗净、烘干→粉碎过 40目筛→脆江蓠干粉→加水溶解→预热→超声提取→提取液离心→
减压浓缩→无水乙醇沉淀两次→冷冻干燥→得粗多糖
精多糖的制备：取适量粗多糖溶液，加入质量浓度为 70％的三氯乙酸(trichloroacetic acid，TCA)
溶液至终浓度达到 4％以除蛋白，4℃放置过夜，离心，NaOH中和上清糖液。单蒸水、双蒸水各透析
36 h，浓缩透析液，冷冻干燥后得精多糖(GLP)。
1.3.2 脆江蓠多糖含量的测定
采用改良的苯酚-硫酸比色法[5-6]。以半乳糖为标准品制作标准曲线，试剂的配制和标准曲线绘制
等参照文献进行。经测定得到标准曲线方程为 Y=0.0051X-0.0138(Y吸光度，X多糖含量)，相关系数
R2=0.995。
将多糖溶液适当稀释后，测其吸光度，代入标准曲线回归方程计算其多糖含量。
1.3.3 脆江蓠多糖提取工艺单因素试验
分别以不同的热水浸提温度、料液比、超声时间为单因素进行试验，考察各因素对脆江蓠多糖提
取率的影响。
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1.3.4 响应面优化实验
在单因素试验的基础上，选取脆江蓠藻粉溶液的预热温度、料水比、超声处理时间三因素作为
Box-Behnken设计的自变量，多糖提取得率(Y)为响应值进行响应面优化组合，因素水平设计见表 1。
实验结果用Minitab软件进行分析。

表 1 Box-Behnken试验因素水平编码表
Table 1 Coded levels for dependent varibles in box-behnken design

因素 水平
编码值 -1 0 1
预热温度（℃） A 80 90 100
料液比（v/m） B 1:50 1:60 1:70
超声时间（min） C 30 35 40
1.3.5 GLP对体外培养的肿瘤细胞生长的影响
MTT法检测多糖对体外培养的肿瘤细胞的生长抑制作用[7-8]。
取对数生长期的肿瘤细胞，调成细胞浓度为1×105个/mL的细胞悬液，100μL/孔接种于96孔板，18h
后换液，按终浓度200、400、600、800、1000μg/mL分别加入GLP作用液，阴性对照组用等量的完全
培养基代替，48h后，移除上清液加入MTT孵育4h，吸出MTT，加入DMSO，振荡混匀。酶标仪作双
波长检测，检测波长490nm，参考波长570nm，计算GLP对Hela细胞的生长抑制率。抑制率计算公式
如下：
A0-A1 抑制率(%)= 100 A0
式中，A0为阴性对照组吸光值；A1为给药组吸光值。
1.3.6 HeLa细胞形态学观察
不同浓度的 GLP作用液（200、400、600、800、1000μg/mL）处理 HeLa细胞 48h，阴性对照组
用等量的完全培养基代替，于倒置显微镜下观察 HeLa细胞的形态变化。
1.3.7 Annexin V-FITC/PI荧光染色检测细胞凋亡
采用上海碧云天生物技术有限公司生产的细胞凋亡Annexin V-FITC/PI检测试剂盒。检测方法按照
试剂盒说明书进行，并于倒置荧光显微镜下观察、拍照。
1.3.8 统计方法
实验结果采用SPSS 17.0统计软件分析。用单因素方差分析组间差异的显著性，结果采用平均值
±标准差表示（x—±s），P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 脆江蓠多糖提取的单因素实验
2.1.1 料水比对多糖提取得率的影响
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图 1 料液比对多糖提取得率的影响
Fig1 Effect of ratio of water to material on the yield of polysaccharides
将脆江蓠粉按 1:40、1:50、1:60、1:70、1:80(g/mL)比例加水，预热至 80℃，在超声波功率 200W
条件下提取 30min，测定多糖提取率，结果如图 1所示。随着溶剂体积的不断增大，多糖得率明显提
高，原因可能是超声波将坚硬的细胞壁破碎，而增加溶剂的比例，可有效降低溶液的黏度，提高浓度
差，有利于多糖分子的传质扩散。根据实验结果，确定多糖的超声提取的料水比 1:60为宜。
2.1.2 超声提取时间对脆江蓠多糖得率的影响
将脆江蓠粉加水(料水比1:60)，预热至80℃，在超声波功率为200W条件下分别提取20、25、30、
35、40min，计算多糖提取得率，结果如图2所示。随着超声提取时间增加，多糖得率提高，当超声提
取时间超过35min后多糖得率反而下降。原因可能是超声波强有力的机械剪切长时间的作用使植物组
织中大量的细胞破裂，细胞内大量不溶物及黏性物质等混入到提取液中，导致溶液中杂质增多，黏度
增大，影响了多糖成分的溶出；另一方面随着超声提取时间的延长，超声波较强的空化作用使部分多
糖分子链断裂，小分子的糖在醇沉处理过程中损失掉，从而降低了多糖的得率[9]。由此可确定多糖的
超声提取时间以35min为佳。


图 2 超声时间对多糖提取得率的影响
Fig.2 Effect of ultrasonification time on yield of polysaccharides
2.1.3预热温度对脆江蓠多糖得率的影响
分别准确称取脆江蓠干粉10g，在料液比为1:60，将料液预热至不同温度，超声时间30min条件下，
考察热水浸提温度对脆江蓠多糖提取得率的影响，结果见图3。当料液预热温度为90℃时，多糖提取
得率达最大值，继续升高预热温度，多糖的提取得率反而呈下降趋势，可能是由于温度过高溶出大量
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的杂质,导致溶液的黏度变大,多糖难以溶出,提取率下降。所以选择90℃作为提取的最佳温度。


图 3 料液预热温度对多糖提取得率的影响
Fig.3 Effect of extraction temperature on the yield of polysaccharides s
2.2 GLP提取工艺条件优化结果
应用 Box-Behnken试验设计，以料液预热温度、料液比、超声时间作为响应面设计的因素，多糖
提取得率为响应值，应用三因素三水平的响应面分析方法优化脆江蓠多糖的提取工艺条件，结果与分
析见表 2、3、4所示。
表 2响应面法设计方案与实验结果
Table 2 The Box-Behnken experimental design and results for response surface analysis
试验号 A B C Y多糖提取得率（%）
1 -1 -1 0 9.54
2 1 -1 0 12.15
3 -1 1 0 9.90
4 1 1 0 12.57
5 -1 0 -1 10.15
6 1 0 -1 12.07
7 -1 0 1 10.62
8 1 0 1 14.58
9 0 -1 -1 10.55
10 0 1 -1 11.03
11 0 -1 1 11.57
12 0 1 1 11.25
13 0 0 0 16.73
14 0 0 0 16.49
15 0 0 0 16.51



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表 3方差分析
Table 2-2Analysis of varlance for the fitted regression equation
来源 自由度 Seq SS Adj SS Adj MS F值 P值 显著性
回归 9 86.7805 86.7805 9.6423 95.10 0.000 **
线性 3 17.9047 17.9047 5.9682 58.86 0.000 **
平方 3 67.6745 67.6745 22.5582 222.48 0.000 **
交互作用
残差误差
失拟
纯误差
3
5
3
2
1.2013
0.5070
0.4715
0.0355
1.2013
0.5070
0.4715
0.0355
0.4004
0.1014
0.1572
0.0177
3.95

8.86
0.067

0.103




表 4 回归方程系数检验
Table2-3 Regression coefficients and their significance of the squadratic model
项 回归系数 回归系数标准误 T值 P值 显著性
常量 16.5767 0.1838 90.168 0.000 **
A 1.3950 0.1126 12.391 0.000 **
B 0.1175 01126 1.044 0.344
C 0.5275 0.1126 4.686 0.005
A×A -2.3908 0.1657 -14.428 0.000 **
B×B -3.1458 0.1657 -18.984 0.000 **
C×C -2.3308 0.1657 -14.066 0.000 **
A×B 0.0150 0.1592 0.094 0.929
A×C 0.5100 0.1592 3.203 0.024
B×C -0.2000 0.1592 -1.256 0.265
注：* 代表显著水平（P＜0.05） **代表极显著水平（P＜0.01）
对所得数据采用 Minitab进行回归分析。从表1-3的回归方程方差分析结果可知，该模型回归极显
著( P<0.01)，失拟项（p=0.103>0.05）不显著，表明二次多项式回归模型可靠；R2=94.63%，表明方程
对实验拟合度较好，因此该模型可用于预测响应值的实际情况。根据实验结果建立的数学模型为：
Y=16.5767+1.3950A+0.1175B+0.5275C-2.3908A2-3.1458B2-2.3308C2+0.0150AB+0.5100AC-0.2000BC
根据回归分析结果，作出响应曲面图，如图4、5、6所示。由等高线图可知，A、C交互作用显著
（等高线图呈椭圆形），结合表4可知A、B及A、C交互作用不显著（等高线图呈圆形）[10-12]；由曲面
图可知，三种因素对多糖提取率的影响均呈抛物线型，表明三种因素均存在最优值，且都在中心点附
近，即最佳料液预热温度为90℃左右、最佳料液比在1:60附近、最佳超声时间为35min左右。

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图 4料液预热温度与料液比的响应面及等高线图
Fig. 4 Responsive surfaces and contours of extraction temperature and material to water ratio

图 5料液预热温度与超声时间的响应面及等高线图
Fig. 5 Responseive surfaces and contours of extraction temperature and ultrasonification time

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图 6 料液比与超声时间的响应面及等高线图
Fig. 6 Responseive surfaces and contours of material to water ratio and ultrasonification time

综合以上实验结果，得脆江蓠多糖的最佳提取工艺条件为料液预热温度为93.1℃，料液比1:61.5；
超声时间35min。
在此最佳工艺条件下进行验证试验，所得脆江蓠多糖的提取得率平均值为16.75%，与模型所得理
论值16.78%相近，偏差较小，表明回归模型可靠，可用于脆江蓠多糖的提取。

2.3 GLP体外对肿瘤细胞生长的影响
检测了GLP对肿瘤细胞生长的抑制作用，结果如表5所示。

表 5 GLP对 Hela、HepG-2、MCF-7和 EC-109细胞生长的抑制作用
Tab5 Inhibition effect of GLP on Hela、HepG-2、MCF-7 and EC-109 cells
GLP浓度
(μg/mL)
HeLa HepG-2 MCF-7 EC-109
吸光值 A 抑制率% 吸光值 A 抑制率% 吸光值 A 抑制率% 吸光值 A 抑制率%
阴性对照
200
400
600
800
1.196±0.016
1.132±0.030**
0.981±0.020**
0.875±0.033**
0.741±0.032**
0
5.35
17.98
26.84
38.04
1.204±0.002
1.135±0.016**
1.064±0.032**
0.952±0.003**
0.792±0.003**
0
5.73
11.63
20.93
34.22
0.972±0.003
0.864±0.019**
0.797±0.026**
0.703±0.021**
0.656±0.019**
0
11.11
18.00
27.67
32.51
1.066±0.008
0.979±0.008**
0.930±0.027**
0.877±0.027**
0.833±0.020**
0
8.16
12.76
17.73
21.86
1000 0.609±0.020** 49.11 0.708±0.006** 41.18 0.632±0.010** 34.98 0.732±0.012** 31.33
注：* P<0.05 vs阴性对照组，** p<0.01 vs阴性对照组

由表5 可见，GLP对体外培养的4 种肿瘤细胞均具有显著的抑制作用，并在200~1000 μg/mL浓度
范围内呈剂量依赖性。当剂量为1000μg/mL作用48h时，其抑制率分别达到49.11%、41.18%、34.98%、
31.33%。结果表明，GLP 对不同肿瘤细胞的抑制作用具有差异性，其中对HeLa细胞的生长抑制作用
最强。因此，选取Hela细胞进行进一步的实验。
2.4 对HeLa细胞形态学的影响
不同质量浓度的脆江蓠多糖处理 HeLa细胞 48h后，HeLa细胞的形态变化，如图 7所示。
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a)阴性对照组；b)、c)、d)、e)、f)分别为 200、400、600、800、1000µg/mL GLP处理组
图 7 GLP处理 48h后 Hela细胞的形态学观察（10x20）
Fig. 7 Morphological observation of Hela cells treated with GLP for 48h（10x20）

由图7 可见，阴性对照组细胞排列较紧密，体积较大，呈多边形，细胞边缘光滑，有少量漂浮细
胞；而给药各组随着给药浓度的增大，细胞由贴壁逐渐脱落悬浮，贴壁细胞数量减少，细胞排列疏松，
体积小，呈长梭形或死亡呈圆形，折光率增强，细胞膜完整但有发泡现象，且有不规则突起。部分细
胞脱离周围细胞，变圆，形态学上呈细胞凋亡状态[13-14]，实验结果显示， GLP可能通过诱导Hela凋亡，
从而抑制HeLa细胞增殖。
2.5 Annexin V-FITC/PI荧光染色检测细胞凋亡
不同浓度的 GLP对 HeLa细胞处理 48h，用 Annexin V-FITC/PI双荧光染色法检测 GLP诱导 Hela
细胞凋亡的能力，结果如图 8所示。GLP作用 48h后，随着给药剂量的增加，呈红色荧光的细胞数量
逐渐增多，说明 GLP作用后 Hela细胞凋亡率随药物浓度增加而升高[15-16]，且具有剂量依赖性，进一
步证实 GLP通过诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞增殖。
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A 阴性对照组；B、C、D分别为 200、600、1000µg/mL GLP处理组
图 8 GLP处理 Hela细胞 48h后的 Annexin V-FITC/PI双荧光检测照片（10x20）
Fig. 8 Annexin V-FITC/PI fluorescent pictures of Hela cells treated with GLP for 48h（10x20）



3 讨 论

传统多糖提取方法存在提取时间长，提取率偏低的缺陷。孟庆勇等[17]采用热水浸提法提取脆江蓠
多糖，结果在料液比 1:30，浸提温度 70℃的条件下水提 10h，其多糖提取率达到 14.98%。本研究在
优化的 GLP提取工艺条件下，即浸提温度为 93.1℃，料液比 1:61.5，超声时间 35min， GLP提取得
率即可达 16.75%，说明超声波处理可有效提高脆江蓠藻体中的多糖溶出。
随着人们对分子生物学和细胞生物学认识的不断深入，细胞凋亡在肿瘤发生中所起的作用日益受
到瞩目，已成为当前肿瘤研究中的热点。国内外众多研究表明，多糖类化合物具有诱导肿瘤细胞凋亡
的作用。如谢好贵等[18]发现，将紫菜多糖、龙须菜多糖和鸡腿菇多糖按一定比例复合后，该复合多糖
具有很强的细胞毒性，能显著诱导 Hela 细胞凋亡。景艳等[19]研究发现，在一定浓度范围内(2, 4, 6
mg/ml) ，花蛇舌草多糖(PEHD)能够明显抑制鼻咽癌 CNE2细胞的增殖，其抑制作用与诱导细胞凋亡
有关。本研究表明，体外培养的肿瘤细胞 Hela经不同剂量的 GLP处理 48h后，倒置光学显微镜下观
察到细胞凋亡的特征性改变，经 Annexin V-FITC/PI双荧光染色后，发现活细胞数量减少，凋亡和坏
死细胞数量明显增多，证明了 GLP可通过诱导肿瘤细胞的凋亡发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。
然而细胞凋亡作为细胞的一种基本生物学现象，是由多基因严格控制的过程，具有极其复杂的分
子生物学机制。研究表明，许多活性多糖可通过重建肿瘤细胞的凋亡信号传递系统，帮助机体及时地
清除过多受损的细胞, 进而达到抗肿瘤的作用。Kwon 等[20]研究发现一种水溶性海藻多糖可以通过胰
岛素样受体信号和 PI3K/Akt 通路作用，激活胃癌细胞中 caspase-3，降低 Bcl-2 基因的表达, 诱导肿
瘤细胞凋亡，从而抑制细胞增殖，达到抗肿瘤的目的。此外，还有众多研究发现多糖可将肿瘤细胞周
期阻滞于不同时期，从而诱导肿瘤细胞凋亡[21-25]。脆江蓠多糖作为一种天然提取物，其成分复杂，本
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10
 
研究只是发现 GLP 具备诱导肿瘤细胞凋亡的作用，对于其是否通过上述途径或其他途径或通道诱导
肿瘤细胞凋亡，尚待进一步深入研究。



参考文献：
[1] 夏邦美. 中国海藻志[M]. 北京: 科学出版社, 1999: 41-42.
[2] 朱晓霞,罗学刚. 多糖提取与纯化技术应用进展[J]. 食品研究与开发, 2007, 28(3): 186-189. doi:
10.3969/j.issn.1005-6521.2007.03.056
[3] FAN Yanli, WANG Wenhang, SONG Wei et al. Partial characterization and anti-tumor activity of an acidic polysaccharide from
Gracilaria lemaneiformis[J]. Carbohydrate Polymers, 2012, 88(4): 1313-1318. doi:http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2012.02.014
[4] 陈美珍, 余杰, 廖灶辉, 等.龙须菜多糖抑瘤活性及对荷瘤小鼠抗氧化作用的研究［J］.中国海洋药物，2008，27 ( 2) : 46-49.
doi:10.3969/j.issn.1002-3461.2008.02.011
[5] 王文平 , 郭祀远 , 李琳 , 等 .苯酚 -硫酸法测定野木瓜中多糖含量的研究 [J]. 食品科学 , 2007, 28(04): 276-279.
doi:10.3321/j.issn:1002-6630.2007.04.065
[6] 周小伟 , 钟瑞敏 . 紫菜多糖提取工艺技术及抗氧化活性研究 [J]. 食品研究与开发 , 2014, 35(19): 43-47.
doi:10.3969/j.issn.1005-6521.2014.19.012
[7] GRELA E, ZABEK A, GRABOWIECKA A. Interferences in the Optimization of the MTT Assay for Viability Estimation of
Proteus mirabilis. [J]. Avicenna J Med Biotechnol, 2015, 7(4): 159-167.
[8] BANK U, REINHOLA D, ANSORGE S. Measurement of cellular activity with the MTT test. Optimization of the method[J].
Allerg Immunol, 1991, 37(3/4): 119-123.
[9] 王永良, 范贤, 李玉兰, 等. 超声辅助提取异枝麒麟菜硫酸酯多糖的工艺优化[J]. 食品科学, 2010, 31(6): 6-10.
[10] 刘玉芬, 夏海涛, 徐芹喜. 海英菜多糖提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化作用[J]. 食品科学, 2012, 33(20): 138-143.
[11] CAPEK P, MACHOBA E, TURIAN J. Scavenging and antioxidant actibities of immunomodulating polysaccharids isolated form
Salvia officinalis L..[J]. International of Biologica Macromolecules, 2009, 44(1): 75-80. doi ：
http://dx.doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2008.10.007
[12] 杨斌, 杨英, 王雪飞, 等. 响应面法优化蓝刺头多糖除蛋白工艺的研究[J]. 食品工业科技，2014, 35(10): 287-291. doi:
10.13386/j.issn1002-0306.2014.10.055
[13] KUNG A L, ZETTERBERG A, SHERWOOD S W, et al. Cytotoxiceffects of cell cycle phase specific agent: result of cell
cycleperturbation[J]. Cancer Res, 1990, 50(22): 7307-7317.
[14] Zhao T, Zhang J, Guo X L.Microwave-assisted extraction, chemical characterization of polysaccharides from Lilium davidii var.
nicolor Salisb and its antioxidant activities evaluation[J]. Food Hydrocolloids, 2013, 31: 346–356.
doi:http://dx.doi.org/10.1016/j.foodhyd.2012.11.021
[15] 张伟, 梁智辉. Annexin V-FITC/PI双标记与 Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较[J]. 细胞与分子免疫
学杂志, 2014, 30(11): 1209-1212.
[16] Chen S, Cheng A. C., Wang M. S. Detection of apoptosis induced by new type gosling viral enteritis virus in vitro through
fluorescein annexin V-FITC/PI double labeling[J]. World J Gastroenterol, 2008, 14(14): 2174-8. doi:
http://dx.doi.org/10.3748/wjg.14.2174
[17] 孟庆勇,王亚飞,揭新明,东野广智,张立坚.粗江蓠多糖的提取及光谱分析[J]. 光谱学与光谱分析, 2006, 26(10): 1903-06.
doi:10.3321/j.issn:1000-0593.2006.10.032
[18] 谢好贵 , 韦明钎 , 陈美珍 , 等 . 3 种多糖复合体外抗肿瘤协同增效作用 [J]. 食品科学 , 2013, 34(15): 289-294.
doi:10.7506/spkx1002-6630-201315060
[19] 景艳,康敏,刘津,等.白花蛇舌草多糖诱导鼻咽癌细胞凋亡及其机制研究[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科,2015,29(7): 641-644. doi:
10.13201/j.issn.1001-1781.2015.07.017
[20] KWON M J, NAM T J. A polysaccharide of the marine alga Capsosi-phon fulvescens induces apoptosis in AGS gastric cancer
2016-03-04
11
 
cells via an IGF-IR-mediated PI3K/Akt pathway[J]. Cell Biol Int, 2007, 31(8): 768 -75. doi:
http://dx.doi.org/10.1016/j.cellbi.2007.01.010
[21] 谢好贵 , 陈美珍 , 张玉强 . 多糖抗肿瘤构效关系及其机制研究进展 [J]. 食品科学 , 2011, 32(11): 329-333.
doi:10.7506/spkx1002-6630-201315060
[22] SARANGI I, GHOSH D, BHUTIA S K, et al. Anti-tumor and immunomodulating effects of Pleurotus ostreatus mycelia-derived
proteoglycans[J]. Int Immunopharmacol, 2006, 6(8): 1287-1297. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.intimp.2006.04.002
[23] LEE C L, YANG XT, WAN J M F. The culture duration affects the immunomodulatory and anticancer effect of
polysaccharopeptide derived from Coriolus versicolor[J]. Enzyme Microb Technol, 2006, 38(1/2): 14-21. doi:
http://dx.doi.org/10.1016/j.enzmictec.2004.10.009
[24] ZHANG M, CHEUNG P C K, CHIU L C M, et al. Cell-cycle arrest and apoptosis induction in human breast carcinoma MCF-7
cells by carboxymethylated β-glucan from the mushroom sclerotia of Pleurotus tuber-regium[J]. Carbohyd Polym, 2006, 66(4):
455-462. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.carbpol.2006.03.031
[25] 游如旭, 张玉, 汪柳, 等. 香菇多糖诱导鼠肝癌 H22细胞凋亡机制的初步探讨[J]. 中国医院药学杂志, 2015, 35(9): 776-781.
doi: 10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2015.09.04


2016-03-04
12