全 文 ：·论著·
黄花忍冬果实中绿原酸提取工艺的对比研究
邹安华
　　作者单位:617023四川攀枝花攀钢职工总医院药材科
　　 【摘要】　目的　优选黄花忍冬果实中绿原酸提取工艺 。方法　采用超声波提取法提取黄花忍冬果实中的绿原
酸 , 以紫外 -可见分光光度法测定其绿原酸的含量 。结果　黄花忍冬果实中绿原酸提取工艺的最佳提取方法为超声波
提取法 。结论　黄花忍冬果实中含有绿原酸且其含量较高 , 这为黄花忍冬果实的综合开发利用奠定了基础 。
　　 【关键词】　黄花忍冬果实;绿原酸;紫外 -可见分光光度法;含量测定
　　 【中图分类号】R927.2　 【文献标识码】A　 【文章编号】1008-5971 (2010)07-0889-02
ComparativeStudyofExtractionofChlorogenicAcidfromLoniceraChrysanthaFruit　ZOUAn-hua.GeneralHospital
ofPanzhihuaIron＆SteelLtdSichuan, Panzhihua617023, China
　　 【Abstract】　Objective　OptimizationofLonicerachrysanthafruitofchlorogenicacidextractionprocess.Methods　U-
singultrasonicextractiontoextractchlorogenicacidfromLonicerachrysanthafruit, UV-visibledeterminationofchlorogenicacid
inLonicerachrysanthafruit.Results　TheLonicerachrysanthafruitextractionofchlorogenicacidinthebestextractioncondi-
tionsforultrasonicextraction.Conclusion　Huanghuahoneysucklefruitcontainschlorogenicacidanditscontentishigher, the
floweristhecomprehensiveexploitationandutilizationoffruithoneysucklelaidafoundation.
　　 【Keywords】　Lonicerachrysanthafruit;Chlorogenicacid;UV-visible;Determination
　　忍冬属是忍冬科中较大的属之一 , 现知全世界约有 200
种 , 我国约 100种 , 广泛分布于各省区 , 以西南 、华中地区种
类最多 [ 1 ] 。其中黄花忍冬 (Lonicerachrysantha)是其中一种 ,
主要分布于华北 、东北 、西北 。该属植物多为直立或攀援状灌
木 , 许多忍冬可供药用 。绿原酸成分一直被认为是忍冬中的主
要有效成分 , 研究表明:其具有抗菌抗病毒作用 [ 2] , 还有保
肝利胆 、止血、 抗氧化 、 抗生育等作用 [ 3] 。笔者用各种方法
提取黄花忍冬果实中的绿原酸 。采用超声波提取法对黄花忍冬
果实中绿原酸进行提取 , 用紫外 -可见分光光度法对绿原酸进
行含量测定 。结果表明 , 黄花忍冬果实中绿原酸提取工艺的最
佳提取条件为超声波提取法 , 在此条件下绿原酸提取率高 , 稳
定性好 。
1　资料与方法
1.1　仪器及试药　RE-52型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪
器厂 ), CN61M/SP - 754PC紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ,
KQ2200KDB超声波清洗器 (昆山市超声波仪器有限公司 ),
AL104电子分析天平 (梅特勒 -托利多仪器上海有限公司 )。
所用的试剂:甲醇 、乙醇 、乙酸乙酯等 。绿原酸对照品 (中
国药品生物制品检定所)。
黄花忍冬果实采自通化师范学院校园内 , 经通化师范学院制药
与食品科学系于俊林教授鉴定是黄花忍冬果实。将其进行阴
干 、低温烘干处理为干品 。
1.2　方法
1.2.1　水煎法　精密称取 10g样品 , 装入大烧杯 。放在水浴
锅上调好温度后 , 分别加入药材量的 15倍 、 10倍 、 8倍的水
加热 , 煎煮时间分别是 60min、 40min、 30min。在此过程中要
不断的用玻璃棒搅拌 。以免飞溅出来 。再将过滤好的提取液合
并 , 冷藏过夜 , 用离心机离心 30min, 取上清液 。用旋转蒸发
器浓缩至稠膏 , 用 50%的甲醇定容于干燥的 10ml容量瓶中 ,
贴好标签放入冰箱中备用。
1.2.2　冷浸法
1.2.2.1　稀醇冷浸法　精密称取 10g样品 , 取药材量 10倍的
70%乙醇放于 250ml的锥形瓶中 , 封口后 , 不断振荡 , 使之充
分混匀 , 放置冰箱冷藏 24h。用抽滤器过滤后 , 在旋转蒸发仪
上浓缩至稠膏并回收乙醇 。用 50%甲醇定容于 10ml量瓶中 ,
贴好标签放入冰箱中备用。
1.2.3　连续回流提取法
1.2.3.1　稀醇回流法 　精密称取 10g样品 , 用滤纸包好后 ,
放入索氏提取器 。安装好索氏提取器后加 70%乙醇 100ml。用
电热套进行加热回流提取 。时间在 2次虹吸之后收集提取液 。
在旋转蒸发仪上减压蒸馏干燥 , 浓缩至稠膏并回收乙醇 。用
50%甲醇定容于 10ml量瓶中 。贴好标签 , 放入冰箱中备用。
1.2.3.2　酸醇回流法　将 70%乙醇溶液用浓盐酸调 PH至 3 ～
4。精密称取 10g样品 , 用滤纸包好后放入索氏提取器中量取
90ml的酸醇溶液倒入索氏提取器 , 通水后调好电热套的温度
进行加热回流 。提取 2次虹吸之后收集提取液 , 在旋转蒸发仪
上浓缩至稠膏 , 其温度要控制在 40℃ ～ 50℃之间 , 并回收酸
醇 。用 50%甲醇定容于 10ml量瓶中 , 贴好标签放入冰箱中备
用 。
1.2.3.3　甲醇回流法 　精密称取 10g样品 , 用滤纸包好后放
入索氏提取器并加入 60%甲醇 , 调好电热套温度 , 通水加热 。
提取时间为 2次虹吸之后 , 收集提取液 。回收 60%甲醇至回
·889·实用心脑肺血管病杂志 2010年 7月第 18卷第 7期
收瓶中 。回收液在旋转蒸发仪上减压浓缩至稠膏 , 用 50%甲
醇定容于 10ml量瓶中 , 贴好标签放入冰箱中备用 。
1.2.3.4　乙酸乙酯回流法　精密称取 10g样品 , 用滤纸包好
后放入索氏提取器 , 加入乙酸乙酯 80ml, 通水通电 , 温度控
制在 60℃左右 , 使滴入圆底烧瓶中的液滴成滴流下 。虹吸 2
次以后停电停水 。取出提取液 , 在旋转蒸发仪上减压蒸馏 , 温
度控制在 40℃, 以免乙酸乙酯过度沸腾而流入回收瓶 , 将提
取液浓缩至稠膏 。用 50%甲醇定容于 10ml量瓶中 , 贴好标签
放入冰箱中备用 。
1.2.4　超声波提取法　精密称取 10g样品 , 置于塞锥形瓶中 ,
加入 70%乙醇 80ml, 振摇 , 使之充分接触后 , 将超声波仪的
时间调到 1.5h, 温度调到 20℃。将锥形瓶用线固定在铁架台
上 , 放入超声波振荡器槽中 , 打开按钮进行超声波震荡提取 。
然后用抽滤器过滤提取液 , 将滤液放于旋转蒸发仪上减压蒸
馏 , 浓缩至稠膏并回收其溶剂乙醇 。用 50%甲醇定容于 10ml
量瓶中 , 放入冰箱中备用 。
2　结果
用超声波提取黄花忍冬果实中绿原酸 , 采用紫外 -可见分
光光度法测定绿原酸的含量 [ 5 ] , 确定黄花忍冬果实中绿原酸
的最佳提取工艺 。
2.1　波长的选择　将绿原酸标准品溶液置于紫外 -可见分光
光度计中 , 在 200 ～ 400nm的波长范围内扫描 , 得其紫外光谱
图 , 其最大吸收为 326nm, 由此选择 326nm作为测定波长
2.2　对照品溶液的制备　精密称取绿原酸标准品 25mg, 用甲
醇溶解 , 定容于 50ml容量瓶中 , 摇匀后备用 。
2.3　标准曲线的制备　精密称取绿原酸标准品 5mg, 用少量
50%甲醇溶解并定容于 10ml容量瓶中 , 摇匀 , 作为原液 。精
密吸取标准品溶液 0.50、 图 1标准曲线 0.75ml、 1.00ml、
1.25ml、 1.50ml, 分别置于 10ml棕色容量瓶中 , 用 50%甲醇
稀释至刻度 , 摇匀 。分别置于紫外 -可见分光光度计中 , 在
326nm处测光度 , 以绿原酸浓度为横坐标 , 吸光度为纵坐标作
图 , 制作标准曲线 , 见图 1 , 得到回归方程 。 Y=0.5208X+
0.0046R=0.9998 , Y为吸光度 , X为绿原酸浓度 (见表 1)。
2.4　方法学考察
2.4.1　精密度试验　取对照品溶液置于紫外 -可见分光光度
计中 , 分别在 326nm处测定 。记录吸光度 , 计算 RSD为
0.77%, 表明该仪器精密度良好 (见表 2)。
2.4.2　稳定性试验 　取样品溶液分别于配制后 0、 1、 3、 4、
8、 12h, 按 2.3方法测定 , 记录吸光度数值 , 考察溶液放置
后吸光度的变化情况 , RSD为 0.1%, 表明供试品溶液在 12h
内稳定 (见表 3)。
2.4.3　回收率试验 　精密称定已测定含量的黄花忍冬果实 5
份 , 每份约 1.0g, 精密称定 , 用 50%甲醇作溶剂 , 再精密加
入绿原酸对照品溶液 1ml, 采用超声波提取法提取 , 在 326nm
处测定其吸光度 。计算平均回收率为 100.1%, RSD为 1.1%
(见表 4)。
2.5　样品溶液的含量测定 　分别精密量取 1.2中 7种提取液
1ml, 用 50%甲醇定容于 10ml容量瓶中 , 置于紫外 -可见分
光光度计中 , 按 2.3方法在 326nm处进行测定 。
2.6　超声波提取法为最佳方法 , 见表 5。
表 1　标准曲线制备数据
Table1　Standardcurvepreparationdata
浓度 (mg/ml) 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08
吸光度 0.28 0.39 0.52 0.65 0.77
表 2　精密度试验 (n=5)
Table2　Precisiontesting
编号 1 2 3 4 5 RSD%
吸光度 0.42 0.41 0.43 0.44 0.42 0.77
表 3　稳定性试验 (n=6)
Table3　Stabilitytest
时间 (h) 0 1 3 4 8 12 RSD%
吸光度 0.49 0.50 0.48 0.49 0.51 0.47 0.1
表 4　回收率的测定 (n=5)
Table4　Therecovery
编号 取样量(g)
样品含量(mg)
加入对照品量(mg)
测得量(mg) 回收率(%)
平均回收率(%)
相对标准偏差(%)
1 1.325 0.54 0.5 1.03 99.91
2 1.007 0.51 0.5 1.01 100.61
3 1.164 0.55 0.5 1.05 100.71 100.1 1.1
4 1.037 0.52 0.5 1.02 99.63
5 1.061 0.53 0.5 1.03 99.64
表 5　提取方法的比较
Table5　Extractionmethod
提取方法 吸光度 百分含量 (%)
水煎法 0.53 0.25
70%乙醇冷浸法 0.74 0.36
70%乙醇回流法 0.62 0.30
60%甲醇回流法 0.61 0.29
酸醇回流法 0.67 0.32
乙酸乙酯回流法 0.79 0.37
70%乙醇超声波法 0.99 0.46
3　讨论
以 70%乙醇作浸提剂提取黄花忍冬果实中绿原酸的最佳
提取方法是超声波提取法 。该试验绿原酸提取率高 , 稳定性
好 。
目前黄花忍冬多数为城市的绿化树种 , 其果实是一种尚未
被开发利用且很有价值的药用资源 , 我国黄花忍冬果实资源极
为丰富 , 需要对其进行开发研究 , 使之得到合理应用 。通过该
实验证实 , 黄花忍冬果实中含有绿原酸且其含量较高 , 这为黄
花忍冬果实的综合开发利用奠定了基础 。
参考文献
1　李会军 , 李萍.忍冬花蕾的化学成分研究 [ J] .林产化学与工业 ,
2007, 25 (3):29-32.
2　国家药典委员会.中华人民共和国药典 [ S] .(2005年版二部).
北京化学工业出版社 , 2005, 45-52.
3　邢俊波 , 李萍.忍冬属化学成分研究概况及展望 [ J] .中药材 ,
2008, 22 (7):366-370.
4　林廷龙 , 葛渝 , 刘志海.HPLC法测定黄褐毛忍冬中绿原酸的含量
[ J] .中国药事 , 2008, 22 (3):228-239.
5　刘军海 , 裘爱泳.绿原酸及其提取纯化和应用前景 [ J] .粮食与
油脂 , 2007, (9):44-46.
(收稿日期:2010-05-20)
·890· PJCCPVD　July2010, Vol, 18　No.7