全 文 ：·55·(总 )广西中医药 2005年 8月第 28卷第 4期
HPLC法测定黄花参肝舒茶中大黄素的含量
杨东爱 广西民族医药研究所 530001 南宁市明秀东路 234号
莫建光 广西分析测试中心 530022
张青青 广西民族医药研究所 530001
丁悦燕 广西中医学院 2001级实习生 530001
摘 要 目的:建立黄花参肝舒茶中大黄素的含量测定方法。方法:采用 HPLC法 ,色谱柱用十八烷基硅烷
键合硅胶为填充剂 ,流动相为甲醇-水(70∶30),流速为 1.0 ml/min;检测波长 254nm。结果:大黄素线性范围为
0.1506 -0.7530μg , r=0.9999;平均回收率为 99.74%, RSD值为 0.87%(n=5)。结论:HPLC法灵敏度高 ,操作
简便 ,重现性好 ,结果准确 ,可用于黄花参肝舒茶制剂的质量控制。
关键词 黄花参肝舒茶;高效液相色谱法;大黄素;含量测定
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1003-0719(2005)04-0055-02
241
·民族医药 ·
黄花参肝舒茶是广西壮医医院根据
壮族民间治疗肝炎的有效验方研制而成
的袋泡茶剂 , 由黄花参、黄芪 、虎杖 、白
术 、金银花等多种中草药组成 。具有清热
毒 、除湿、疏肝健脾作用 , 临床上用于治
疗湿热邪毒所致急慢性肝炎及乙肝病毒
携带者 。虎杖为处方中的臣药 ,含有蒽醌
类及二苯乙烯类物质 , 其中主含大黄素
(Emodin)、 大 黄 素 甲 醚 (Emodin
monomethyl ether)和大黄酚 (Chrysophanic
acid , Chry sophanol)[ 1 ]等 。参照文献报
道 [2 , 3 ] , 本文采用 HPLC法测定黄花参肝
舒茶中虎杖的大黄素含量 , 可排除其他
成分干扰 , 建立了黄花参肝舒茶中大黄
素的含量测定方法 。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪 , SPD-10A
紫外检测仪;威玛通用多媒体色谱工作
站 。
大黄素 (由中国药品生物制品检定
所提供 ,批号:756-8902);黄花参肝舒茶
(广西壮医医院药剂科提供 , 批号 :
040720 、040722 、041018 、031211 、031224);
硅胶 G(青岛海洋化工厂生产);甲醇为
色谱纯;其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:用十八烷基硅
烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水
(70∶30);检测波长:254nm;柱温:室温;
流速:1.0ml/min;进样量:10μl 。理论塔板
数按大黄素峰计算为不低于 8 000 , 与其
前后峰分离度分别为 2.1、 1.8 , 均大于
1.5 , 说明在此色谱条件下 , 样品能很好
地分离 。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取大
黄素对照品适量 ,置量瓶中 , 加甲醇使溶
解 , 制成 0.3012mg/ml的溶液 , 作为对照
品溶液 。
2.3 供试品溶液的制备 取黄花参肝
舒茶约 5袋 , 研细 , 精密称取 10g , 置
150ml圆底烧瓶中 , 加甲醇 50ml , 称定重
量 ,加热回流 30min ,放冷至室温 ,称定重
量 ,加甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,
精密量取续滤液 25ml ,置水浴上蒸干 。残
渣加水 20ml , 加盐酸 2ml , 氯仿 20ml , 置
100ml量瓶中 , 移置圆底烧瓶中加热回流
30min ,放冷 ,置分液漏斗中 ,分取氯仿层;
酸水层再用氯仿萃取 2次(20 , 20ml), 收
集氯仿液 , 合并 , 回收溶剂至干 , 残渣加
甲醇使溶解 , 置 50ml量瓶中 , 加甲醇定
容至刻度 , 摇匀 , 用 0.45μm微孔滤膜滤
过 ,取续滤液 , 作为供试品溶液 。
2.4 阴性对照液的制备 精密称定缺
虎杖阴性制剂(处方除去虎杖 , 其余各味
按处方量的 1/50 , 按工艺制备方法共制
成 90g)10.3412g , 按 2.3项下方法制成
阴性对照溶液 。
分别精密吸取以上 3 种溶液各
10μl , 注入色谱仪 , 按上述色谱条件下测
定 , 结果供试品中大黄素色谱峰与其他
组分分离良好 , 与对照品大黄素的保留
时间(10.16min)一致 , 阴性对照溶液在
大黄素色谱峰出峰的时间 , 没有任何杂
质峰 。色谱图见图 1。
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2.5 线性关系考察 精密称定大黄素
对照品适量(15.06mg), 置 50ml量瓶中 ,
加甲醇溶解并稀释至刻度 , 精密量取
0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5ml于 10ml量瓶中 ,
加入甲醇稀释至刻度 ,摇匀 。分别精密吸
取上述溶液各 10μl , 分别注入色谱仪 , 测
定其峰面积值 ,以进样量(μg)为横坐标 ,
峰面积值(A)为纵坐标进行线性回归 ,得
到回归方程:A=8.328×103 C-3.526×
104 , r =0.9999 。 结果表明 ,大黄素在
0.1506μg -0.7530μg 范围内与峰面积
呈良好线性关系 。
2.6 精密度考察 精密吸取对照品溶
液(30.12μg/ml)10μl , 重复进样 5次 , 测
定大黄素峰面积 , 结果其平均峰面积为
412135 ,RSD为 0.38%。
2.7 稳定性试验 取供试品溶液 (批
号:040720)分别于 0 , 2 , 4 , 6 , 12h进样 1
次 , 依法测定峰面积 ,结果大黄素平均峰
面积为 435584 , RSD为 1.15%,表明供试
品在 12h内稳定 。
2.8 重复性试验 取同批样品 (批号:
040720)5份 , 精密称定 ,按 2.3项下方法
制备供试品溶液 , 按上述色谱条件测定 ,
结果平均含量为 0.280mg/g , RSD 为
1.07%。
2.9 加样回收率试验 精密称取已知
大 黄素含 量的样 品约 5.0g(批号 :
040720 , 大黄素含量为 0.280mg/g)5份 ,
分别置 100ml圆底烧瓶中 ,加入大黄素对
照品溶液 (0.3012mg/ml)4.8ml , 按 2.3
项下方法制备供试品溶液 , 精密吸取
10μl进样测定 ,计算回收率 。结果平均回
收率为 99.74%, RSD 为 0.87% (n=
5)。结果见表 1。
3 讨 论
3.1 虎杖中的主要化学成分为蒽醌类
和二苯乙烯类物质 , 虎杖具有清热祛湿 、
活血通络的功效 。其中蒽醌类化合物具
有保肝利胆 、抗病毒的作用 [4 ] ,为主要药
效成分之一 , 在黄花参肝舒茶中具有加
强君药黄花参清利肝胆湿热的功效 。为
此选择大黄素作为指标 , 对其进行含量
测定 。
3.2 实验过程中曾采用甲醇-水(78∶
22 、75∶25 、70∶30)作为流动相 , 结果发
现采用甲醇-水(70∶30)时分离效果较
为理想 , 因此本法采用甲醇-水 (70∶
30)作为流动相 。
3.3 据查阅文献资料 , 大黄素含测方法
有高效液相色谱法 [2 , 3 ] 、薄层扫描法 [5 ]及
分光光度法 [ 6] 。本文采用高效液相色谱
法 , 操作简便 , 准确度及精密度高 , 重现
性好 , 可作为该制剂含量测定方法 ,以控
制其质量 。
参考文献
1 江苏新医学院 .中药大辞典(上册).上
海:上海人民出版社 , 1986.1329.
表 2 样品含量测定结果 (n=3)
2.10 样品测定 取 5批样品 , 照供试
品溶液制备方法制备样品溶液 , 分别精
密吸取 10μl进样测定 ,结果见表 2 。
批号 大黄素平均含量(mg/g) RSD(%)
040720 0.281 0.56
040722 0.288 0.25
041018 0.282 0.43
031211 0.280 0.25
031224 0.250 0.62
样品中大黄素含量(mg) 大黄素加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1.4168 1.4458 2.8524 99.64
1.5045 1.4458 2.9179 98.90
1.4840 1.4458 2.9042 99.12 99.74 0.87
1.4314 1.4458 2.8747 99.91
1.4250 1.4458 2.9027 101.11
表 1 大黄素加样回收率试验结果 (n=5)
242
2 唐小波 , 吴健儿 , 赵绪元 .高效液相色谱
法测定虎杖中大黄素的含量 .基层中药
杂志 , 2000, 14(4):17-18.
3 赵建平.五灵健肝片中大黄素的含量测定.
中成药 , 2002, 24(10):810-812.
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国中药杂志 , 2000 , 25(11):651.
5 刘亚丽 , 徐履琴 , 陆海涛 .肝星颗粒剂薄
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2000,(9):45-47.
6 中华人民共和国药典委员会 .中华人民
共和国药典 .一部 .北京:化学工业出版
社 , 2000.167.
(2005-06-26收稿/编辑 陈明伟)
图 1 黄花参肝舒茶 HPLC图谱