全 文 ：色谱仪在质检部门和制药企业已十分普及 ,系统误
差已大为降低。基于以上原因 ,修订龙胆苦苷含量
测定的内标法为外标法。以甲醇为溶剂分别考察了
超声(15、30、45、60 min)、冷浸(6、12、18、24 h)、回
流(10、15、30、45、60 min)三种不同提取方法 ,显示
回流 15min和超声 60 min均较好 ,二者没有显著差
异 ,因回流处理时间短而选用之。进一步试验表明
回流提取时间 10、15、30、45、60 min,没有显著差别 ,
选择回流提取 15min。按含量测定的色谱条件以及
改变色谱条件 (不同色谱柱 、不同流动相 、不同柱
温 、不同流速)后进样分析 ,测定龙胆苦苷质量分
数 ,结果表明 ,各项 RSD<1.2%,分离度符合要求 ,
可见 ,龙胆中龙胆苦苷含量测定条件较宽 ,具有较好
的耐受性。
3.3　限量标准制定建议　调查和实验发现 ,市场
上坚龙胆(滇龙胆)药材非药用部位的杂质较多 ,龙
胆苦苷质量分数较低(表 1),平均 2.2%,而自采样
品(wu2007141)净制好 ,质量分数则较高(4.4%);
(关)龙胆的龙胆苦苷质量分数较高 ,平均 4.5%;
(关)龙胆和坚龙胆饮片在生产中因冲洗和浸泡龙
胆苦苷流失 ,质量分数降低 ,平均分别为 3.0%和
1.2%,根据市场实际情况 ,建议将(关)龙胆和坚龙
胆药材及其饮片的龙胆苦苷含量限度分开 。依据不
同产地龙胆药材和饮片的实验测定结果 ,按平均值
的 ±20%浮动的指导意见 ,并考虑样本数问题 ,建议
规定(关)龙胆药材龙胆苦苷质量分数不得少于
3.0%,饮片不得少于 2.0%,坚龙胆药材龙胆苦苷
质量分数不得少于 1.5%,饮片不得少于 1.0%;龙
胆药材和饮片水分质量分数不得过 9.0%,总灰分
质量分数不得过 7.0%,酸不溶性灰分质量分数不
得过 3.0%,浸出物质量分数不得少于 36.0%。龙
胆药材及饮片标准的改进和提升 ,对药材和饮片质
量有更好的实际监控和保障作用 。
　　致谢:湖北民族学院化学与环境工程学院 2009届实习生刘飞虎
同学参加了部分实验工作;黑龙江省食品药品检验所对标准进行了
复核工作 ,特表谢忱 !
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:64-65.
[ 2] 吴立宏 , 叶燕 ,王峥涛 .改进《中国药典》 2005年版龙胆
薄层色谱鉴别方法的建议 [ J] .中国药品标准 , 2007, 8
(4):8-9.
[ 3] 饶高雄 , 普建英 ,高运玲 , 等.加工方法对龙胆生药中龙
胆苦甙含量的影响 [ J] .云南中医学院学报 , 2002, 25
(2):1-2.
[ 4] 侴桂新 , 王峥涛 ,董婷霞 , 等.龙胆药材中龙胆苦苷的含
量测定 [ J] .上海中医药杂志 , 2005, 39(11):53-55.
[ 5] 李小芳 , 李敏 , 蒋卫 , 等 .龙胆炮制品中龙胆苦苷的
HPLC含量测定 [ J] .中成药 , 2006, 28(10):1449-1451.
[ 6] 李智敏 , 赵磊 ,白艳婷 , 等.不同产地滇龙胆中龙胆苦苷
的含量测定 [ J] .云南中医药学院学报 , 2008, 31(6):
10-14.
[ 7] 魏岚 , 陈晓辉 ,王晓辉 , 等.不同产地龙胆中龙胆苦苷的
含量测定 [ J] .沈阳药科大学学报 , 2004, 12(12):114-
117.
收稿日期:2010-11-18基金项目:新疆维吾尔自治区科技支撑项目(201033121)作者简介:徐芳(1973-),女 ,副研究员 ,主要从事中药民族药新药研究与开发;Tel:0991-2320227, E-mail:xufangxj@163.com。
瘤果黑种草子高效液相指纹图谱研究
徐　芳 1 ,刘亚婷2 ,赵　军 1 ,谭　为 1 ,陈　燕1 ,杨伟俊 1
(1.新疆维吾尔自治区药物研究所 /新疆维吾尔药重点实验室 ,新疆 乌鲁木齐 830004;2.新疆生产建设兵
团医院药剂科 ,新疆 乌鲁木齐 830002)
　　摘要　目的:建立瘤果黑种草子药材的高效液相指纹图谱。方法:以黑种草苷为对照 ,采用高效液相色谱法测
定 10批次不同产地瘤果黑种草子;YMC-PackODS-A色谱柱(250 mm×4.6mm, 5 μm),乙腈 -0.1%醋酸梯度洗脱 ,
流速 0.8 mL/min,柱温 30℃, 检测波长 254 nm。结果:标示出瘤果黑种草子药材的 13个特征指纹峰 , 10批次不同
产地瘤果黑种草子的色谱图相似度均大于 0.9。结论:该方法操作简便 、重复性好 , 为瘤果黑种草子药材的全面质
量控制提供了参考。
关键词　瘤果黑种草子;高效液相色谱法;指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2011)04-0531-04
·531·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 4期 2011年 4月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2011.04.015
　　传统维吾尔药瘤果黑种草子为毛茛科植物瘤果
黑种草 NigelaglanduliferaFreynetSint.的干燥成
熟种子 ,主产于我国新疆地区 。瘤果黑种草又名腺
毛黑种草 ,维吾尔语名 “斯亚旦 ”。该药材性温 ,味
甘 、辛 ,具有补肾健脑 、通经 、通乳 、利尿 、活血 、解毒
和乌发等功效 ,维吾尔医临床用于耳鸣健忘 、经闭乳
少 、热淋 、石淋 、白癜风 、哮喘和脱发等疾病的治
疗 〔1-4〕。现代药理研究显示瘤果黑种草子具有抗氧
化 、抗菌 、抗血栓及血小板凝集 、抗肿瘤 、降血脂 、降
血糖和免疫保护等多种药理作用 〔5, 6〕。然而 ,对该
药材的质量控制研究却少有文献报道 。本文采用高
效液相色谱法对瘤果黑种草子药材指纹图谱进行研
究 ,以期为全面控制其药材质量提供科学依据 。
1　仪器与材料
1.1　仪器 　ShimadzuLC-10ADvp高效液相色谱
仪 , SPD-M10Avp检测器(日本岛津公司), BP211D
型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司), JM电
子计数天平 (浙江余姚纪铭称重校验设备有限公
司), AS10200AD超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪
器有限公司), HH-W600三用恒温水箱(江苏省金
坛市医疗仪器厂)。
1.2　材料　瘤果黑种草子药材各样品来源见表 3,
由新疆维吾尔自治区药物研究所 张彦福研究员鉴
定为毛茛科植物瘤果黑种草 Nigelaglandulifera
FreynetSint的干燥成熟种子 ,标本存放于新疆维吾
尔自治区药物研究所标本室。黑种草苷对照品由本
实验室自制(经 HPLC法测定 ,纯度为 98.2%)。水
为乐百氏纯净水 ,甲醇 、乙腈均为色谱纯 ,其他试剂
均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:YMC-PackODS-A色谱柱
(250mm×4.6 mm, 5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%
醋酸(B)梯度洗脱 ,梯度洗脱程序:0 ～ 40min(A0%
～ 10%), 40 ～ 60min(A10% ～ 19%), 60 ～ 80min(A
19% ～ 19%);流速:0.8mL/min;柱温:30 ℃;检测波
长:254nm;进样量:10 μL;运行时间:80min。
2.2　对照品溶液的制备　精密称取黑种草苷对照
品适量 ,用甲醇溶解定容 ,即得 。
2.3　供试品溶液的制备　取瘤果黑种草子药材粉
末(过 20目筛)6 g,精密称定 ,用石油醚脱脂 ,将脱
脂后的药渣晾干后 ,用 30%乙醇回流提取 3次 ,每
次 1.5h,合并提取液 ,过滤 ,滤液蒸干 ,加水溶解并
定容至 25mL,取上清液用微孔滤膜(0.45 μm)过
滤 ,取续滤液作为供试品溶液 。
2.4　精密度试验　取同一供试品溶液 ,连续进样 5
次。以黑种草苷为对照 ,计算各共有峰的相对保留
时间和相对峰面积 。结果各共有峰的相对保留时间
RSD均小于 3%,占总峰面积百分比 5%以上的共有
峰的相对峰面积 RSD均小于 3%,表明本方法精密
度良好。
2.5　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于 0、
2、4 、6.5、24 h进样测定。以黑种草苷为对照 ,计算
各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 。结果各共
有峰的相对保留时间 RSD均小于 3%,占总峰面积
百分比 5%以上的共有峰的相对峰面积 RSD均小于
3%,表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2.6　重现性试验　取同一批瘤果黑种草子药材 6
份 ,按 “2.3”项下方法操作并测定 ,以黑种草苷为对
照 ,计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
结果各共有峰的相对保留时间的 RSD均小于 3%,
占总峰面积百分比 5%以上的共有峰的相对峰面积
RSD均小于 3%,表明本方法重现性良好。
2.7　指纹图谱及技术参数
2.7.1　指纹图谱及共有峰的标定:依法测定 10批
次不同产地的瘤果黑种草子 ,应用 《中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 》(2004A版)比较 10批次瘤
果黑种草子的色谱图 ,其中有 13个色谱峰是共有
的 ,确定为共有峰 ,见图 1。 10批次不同产地瘤果黑
种草子指纹图谱比较见图 2。
2.7.2　共有峰的相对保留时间及相对峰面积:以
黑种草苷为对照 ,计算 10批次不同产地瘤果黑种草
子各共有峰的相对保留时间和相对峰面积 ,结果见
表 1、表 2。
2.7.3　相似度评价结果:应用 《中药色谱指纹图谱
相似度评价系统 》(2004A版)对 10批次不同产地
瘤果黑种草子的色谱图进行相似度评价 ,其相似度
均在 0.9以上 ,说明不同产地瘤果黑种草子药材的
化学组成一致性较好 ,结果见表 3。
3　讨论
3.1　供试品溶液制备方法的选择　由于瘤果黑种
草子中含有大量的油脂类成分 ,故在制备供试品溶
液时 ,先将药材进行脱脂处理。实验中比较了超声
提取和回流提取 2种方法提取脱脂后的药材 ,结果
发现回流提取效果较好 ,色谱峰较多 ,重现性较好。
实验中还对不同提取溶剂进行了考察 , 结果表明
30%乙醇提取样品的色谱峰多 ,而且峰形好 ,因此确
定用 30%乙醇回流提取制备供试品溶液。
·532· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 4期 2011年 4月
图 1　瘤果黑种草子 HPLC图谱共有峰的标定
13.黑种草苷
图 2　不同产地瘤果黑种草子指纹图谱的比较
R1 ～ R10.1 ～ 10批瘤果黑种草子样品
　　表 1　 10批次不同产地瘤果黑种草子各共有峰的相对保留时间
峰号 保留时间/min
样品
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 SD RSD/%
1 14.357 0.225 0.230 0.230 0.229 0.230 0.225 0.232 0.231 0.230 0.231 0.229 0.002 1.07
2 20.309 0.319 0.319 0.307 0.313 0.314 0.304 0.315 0.314 0.312 0.315 0.313 0.005 1.49
3 21.141 0.332 0.333 0.333 0.332 0.333 0.329 0.334 0.333 0.335 0.334 0.333 0.001 0.44
4 22.709 0.356 0.358 0.356 0.357 0.357 0.353 0.362 0.360 0.362 0.361 0.358 0.003 0.81
5 24.224 0.380 0.381 0.381 0.380 0.380 0.378 0.380 0.381 0.383 0.382 0.381 0.001 0.34
6 26.965 0.423 0.424 0.424 0.423 0.423 0.421 0.422 0.424 0.425 0.424 0.423 0.001 0.28
7 30.517 0.479 0.480 0.477 0.480 0.481 0.473 0.477 0.474 0.475 0.472 0.477 0.003 0.68
8 41.099 0.645 0.645 0.645 0.644 0.644 0.643 0.638 0.645 0.643 0.643 0.643 0.002 0.32
9 48.779 0.765 0.770 0.755 0.777 0.777 0.753 0.777 0.746 0.754 0.745 0.762 0.013 1.68
10 58.688 0.921 0.921 0.921 0.921 0.921 0.921 0.920 0.922 0.921 0.923 0.921 0.001 0.09
11 60.811 0.954 0.954 0.954 0.954 0.954 0.954 0.954 0.955 0.954 0.956 0.954 0.001 0.06
12 61.216 0.961 0.961 0.961 0.961 0.961 0.960 0.961 0.961 0.961 0.962 0.961 0.000 0.04
13(S) 63.733 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.000 0.00
·533·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 4期 2011年 4月
　　表 2　 10批次不同产地瘤果黑种草子各共有峰的相对峰面积
峰号 保留时间/min
样品
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值 SD RSD/%
1 14.357 0.264 0.262 0.686 0.148 0.367 0.415 0.126 0.275 0.278 0.397 0.322 0.159 49.57
2 20.309 0.523 0.457 0.222 0.279 0.292 0.103 0.220 0.219 0.206 0.133 0.265 0.132 49.86
3 21.141 0.434 0.339 0.758 0.161 0.493 0.527 0.192 0.225 0.292 0.334 0.375 0.182 48.56
4 22.709 0.348 0.314 0.342 0.203 0.439 0.311 0.199 0.210 0.147 0.294 0.281 0.089 31.67
5 24.224 0.305 0.263 0.240 0.160 0.263 0.098 0.313 0.367 0.271 0.159 0.244 0.082 33.64
6 26.965 0.215 0.191 0.186 0.146 0.185 0.103 0.116 0.168 0.190 0.137 0.164 0.037 22.35
7 30.517 0.326 0.319 0.314 0.300 0.360 0.135 0.262 0.260 0.239 0.157 0.267 0.074 27.52
8 41.099 0.757 0.738 0.687 0.432 0.717 0.180 0.734 0.621 0.699 0.424 0.599 0.191 31.92
9 48.779 0.879 1.000 1.018 0.738 1.056 0.487 0.962 1.064 0.772 0.709 0.869 0.188 21.69
10 58.688 0.210 0.205 0.190 0.154 0.180 0.138 0.236 0.170 0.184 0.160 0.183 0.029 15.93
11 60.811 0.143 0.158 0.145 0.127 0.161 0.162 0.154 0.150 0.152 0.147 0.150 0.010 6.93
12 61.216 0.237 0.241 0.242 0.223 0.283 0.128 0.230 0.237 0.236 0.186 0.224 0.041 18.34
13(S) 63.733 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.000 0.00
　表 3　10批次不同产地瘤果黑种草子相似度评价结果
编号 产地及批次 相似度
1 于田 0.961
2 岳普湖 0.978
3 奇台 0.958
4 吐鲁番 0.970
5 和田第 1批 0.981
6 喀什第 1批 0.943
7 伊犁 0.963
8 喀什第 2批 0.966
9 和田第 2批 0.976
10 鄯善 0.976
3.2　流动相的选择 　实验中分别采用了甲醇-
0.1%醋酸 、乙腈-0.1%醋酸等不同比例的流动相进
行梯度洗脱 ,结果发现乙腈 -0.1%醋酸系统在梯度
条件:0 ～ 40 min(A0% ～ 10%), 40 ～ 60 min(A
10% ～ 19%), 60 ～ 80 min(A19% ～ 19%)时 ,各组
分得到较好分离 ,因此选择该梯度条件进行测定。
3.3　检测波长的选择　本研究采用二极管阵列检
测器对检测波长进行了考察 ,分别比较了 210 ～ 400
nm的色谱图 ,结果发现在 254 nm处色谱峰较多 ,且
各峰的响应值最高 ,因此选择 254 nm为检测波长 。
3.4　参照峰的选择　13号峰黑种草苷含量高 ,峰
面积稳定 ,与邻近色谱峰的分离度较好 ,故选择其作
为参照峰 。
4　小结
本研究采用高效液相色谱法测定了 10批次不
同产地瘤果黑种草子的指纹图谱 ,结果表明 ,各产地
样品色谱图概貌一致 ,经相似度评价其相似度均在
0.9以上 ,说明不同产地瘤果黑种草子药材的化学
组成一致性较好 ,不同产地之间存在的差异不大。
但是不同产地的瘤果黑种草子药材所含成分的含量
差异较大 ,相对峰面积 RSD差异很大 ,说明不同产
地瘤果黑种草子药材的化学成分含量有差异 。
参 考 文 献
[ 1] 国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [ S] .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:241.
[ 2] 刘勇民 .维吾尔药志 [ M] .上册 .乌鲁木齐:新疆科技
卫生出版社 , 1999:515-518.
[ 3] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草-维吾
尔药卷 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 2005:364-
366.
[ 4] 中国医学百科全书编辑委员会.中国医学百科全书-维
吾尔医学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 2005:306.
[ 5] 耿东升 ,傅小英.瘤果黑种草的化学成分及药理研究现
状 [ J] .中成药 , 2008, 30(10):1522-1524.
[ 6] 信学雷 , 薛慧清 ,阿吉艾克拜尔·艾萨 , 等.黑种草属植
物研究进展 [ J] .时珍国医国药 , 2008, 19(6):1514-
1517.
·534· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 4期 2011年 4月