全 文 ：收稿日期:2011-01-04
作者简介:李利华 ,女(1977-)讲师 ,在读硕士, 研究方向:天然产物
有效成分的分析 、检测。
＊通讯作者 E-mail:lilhqlm@ 126.com
高效液相色谱法测定黄瓜皮中绿原酸含量
李利华＊
(陕西理工学院 化学与环境科学学院 陕西 汉中 723001)
摘要:目的:建立高效液相色谱法测定黄瓜皮中绿原酸含量的方法。方法:采用 ZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱(150 ×
4.6nm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸溶液(25∶75);流速:1.0 ml· min-1;检测波长:326nm;柱温:30℃。结果:绿原酸
的线性范围为 0.0111 ～ 0.1332g· L-1(r=0.9995 ), 平均加样回收率(n=5)为 99.97%, RSD为 2.07%, 结果显示黄瓜皮中
绿原酸的质量分数均大于 8.10mg· g-1。结论:本方法简便快捷 、精密度高 、重现性好 , 可用于黄瓜皮中绿原酸含量的测
定 。
关键词:高效液相色谱法;黄瓜皮;绿原酸
中图分类号:R151.3 文献标识码:A 文章编号:1006-8376(2011)02-0073-03
　　绿原酸 (Chlorogenicacid)是由咖啡酸(Cafeic
acid)与奎尼酸(Quinicacid)组成的缩酚酸 ,又名 3
-咖啡酰奎宁酸 [ 1] 。它是植物体在有氧呼吸过程
中合成的一种苯丙素类物质 ,广泛存在于高等双子
叶植物和蕨类植物中 ,是许多中草药如金银花 、杜
仲 、茵陈等的主要有效成分之一 ,也是众多水果蔬菜
中的重要活性成分。绿原酸的化学结构体现出具有
良好的抗氧化功能 [ 2, 3] ,不仅能够清热解毒 、保肝利
胆 、稳定血糖和增强机体的免疫功能 ,且现代药理研
究表明绿原酸还具有抗菌 、抗肿瘤和抗病毒等作用 ,
并对消化 、血液系统和生殖系统疾病均有显著疗
效 [ 4, 5] 。由于绿原酸功效显著 、毒副作用极小而引
起人们广泛研究 ,成为目前医药 、食品界研究的焦点
化合物 [ 6] 。
黄瓜 ,又称青瓜 、剌瓜 ,葫芦科植物黄瓜属黄瓜
的果实 ,一年生蔓生或攀援草本 ,茎细长 ,有纵棱 ,被
短刚毛 [ 7] 。黄瓜皮是黄瓜的一层绿色外衣 ,据资料
显示[ 8] ,黄瓜皮含有绿原酸和咖啡酸 ,是黄瓜的营
养精华所在 ,黄瓜的营养优势主要是由黄瓜皮 “味
甘 、性平 ”的本质所决定的 ,所以能够清热解毒 、生
津止渴 ,尤其能排毒 、清肠 、养颜。目前对黄瓜皮中
绿原酸的定量研究笔者未见国内(外)文献报道 ,本
研究采用高效液相色谱法对黄瓜皮中的绿原酸进行
含量分析 ,为黄瓜皮的进一步开发 、利用提供科学依
据 。
1　材料与仪器
新鲜黄瓜:2010年 7月采摘自汉中郊区菜园 ,
经陕西理工学院生物学院赵桦教授鉴定 ,确定为葫
芦科植物黄瓜 。将黄瓜洗净后用小刀将表皮轻轻削
下 ,低温干燥 ,粉碎 ,过 40目筛备用 ,此为本实验所
用黄瓜皮供试品材料。
绿原酸(chlorogenicacid)标准品 (中国药品生
物制品检定所),甲醇为色谱纯 ,磷酸为分析纯 ,水
为新鲜的超纯水。
Agilent1200LC高效液相色谱仪 ,美国安捷伦科
技公司;GR-200电子分析天平 ,日本 A＆D公司;
SD-5200DT超声波清洗仪 ,宁波新芝科技股份有
限公司;SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵 ,河南巩义市
英峪予华仪器厂;TDL-5通用台式离心机 ,上海安
亭科学仪器厂 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:ZorbaxEclipseXDB-C18色谱柱(150
×4.6nm, 5μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸溶液
(25∶75),流速:1.0 ml· min-1;柱温:30°C,检测
波长:326nm;进样量:10 μL。该色谱条件下 ,样品
中绿原酸峰与其它非被测成分峰能够达到基线分
离 ,绿原酸与其相邻色谱峰的分离度 R>1.5。对照
品与样品的色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品 11.1 mg,置 50 mL容
量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得
对照品储备液(每 1mL含绿原酸对照品 0.222mg)。
氨基酸和生物资源　2011, 33(2):73～ 75
AminoAcids＆BioticResources
DOI :10.14188/j .ajsh.2011.02.017
图 1　对照品与供试品 HPLC图
A.对照品;B.供试品;1.绿原酸
2.3　供试品溶液的制备
精密称取黄瓜皮粉末 0.50g,加入 50%甲醇 50
mL,称定重量 ,超声处理 30 min(功率 250 w,频率
25KHZ),放冷 ,再称定重量 ,用 50%甲醇补足损失
的重量 ,摇匀 ,离心 5 min,上清液用 0.45 μm微孔
滤膜滤过 ,即得。
2.4　标准曲线的绘制
精密吸取绿原酸对照品溶液 0.5 mL、 1 mL、2
mL、3mL、4 mL、5 mL、6 mL,分别置 10 mL容量瓶
中 ,加入 50%甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,分别取上述溶
液 10μL,进样 ,按标题 2.1色谱条件测定峰面积 ,
以峰面积(y)为纵坐标 ,绿原酸对照品浓度(x)为横
坐标 ,绘制标准曲线并进行线性回归 ,求得回归方程
为:y=8296.34x-89.75 , r=0.9995,绿原酸质量
浓度在 0.0111 ～ 0.1332 g·L-1范围内呈良好的线
性关系 ,结果见图 2。
图 2　绿原酸对照品标准曲线
2.5　精密度试验
精密吸取相同同一浓度的绿原酸对照品溶液
10 μL,注入液相色谱仪 ,连续进样 5次 ,测定峰面
积 ,计算 RSD值 ,求得 RSD=1.01% (n=5),表明
仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验
取同一供试品溶液在 0, 4, 8, 12, 16 h分别进样
10 μL,测定峰面积 ,计算得出 RSD=1.83% (n=
5),表明样品溶液在 16h内具有良好的稳定性 。
2.7　重复性试验
精密称取同一批黄瓜皮样品粉末 5份 ,按供试
品溶液制备方法分别制备供试品溶液 ,分别吸取供
试品溶液 10μL,注入高效液相色谱仪 , 求得峰面积
的 RSD=1.85%(n=5),表明该方法的重复性良
好 ,测得绿原酸平均质量分数为 8.2411mg·g-1。
2.8　加样回收率试验
精密称取已知含量的黄瓜皮样品粉末 5份 ,分
别加入绿原酸对照品 ,按供试品项下方法制备成供
试品溶液 ,按设定条件进行测定 ,并计算绿原酸的回
收率 ,结果见表 1。由表 1可看出:样品平均加样回
收率为 99.97%, RSD为 2.07%,表明该方法准确 、
可靠 。
表 1　加样回收率试验结果(n=5)
样品
量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得
量 /mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
0.06305 0.1110 0.1757 101.49
0.06219 0.1110 0.1760 102.53
0.06256 0.1110 0.1721 98.68 99.97 2.07
0.06318 0.1110 0.1713 97.41
0.06174 0.1110 0.1724 99.72
2.9　样品测定
精密称取不同采摘时间的黄瓜皮样品 3份各
0.5 g,按照标题 2.3项制备供试品溶液 ,再按标题
2.1项色谱条件下进样 10 μL,测定峰面积 ,按外标
法计算黄瓜皮中绿原酸质量分数 ,每批样品平行测
定 3次 ,结果见表 2。
表 2　黄瓜皮样品绿原酸质量分数测定结果
编号 采摘时间 平均质量分数 /mg· g-1 RSD/%
1 2010年 7月上旬 8.1402 2.50
2 2010年 7月中旬 8.3392 1.42
3 2010年 7月下旬 8.4233 0.96
3　小结
由于绿原酸易发生水解 ,从而导致谱图拖尾 ,影
响测定结果的准确性 ,在实际操作中 ,往流动相中加
·74· 李利华:　高效液相色谱法测定黄瓜皮中绿原酸含量
入一定比例的乙酸或磷酸 ,可有效抑制酚羟基解离 ,
克服谱图的拖尾现象 [ 9 ～ 11] 。本试验选用流动相为
甲醇 -0.4%磷酸溶液(25∶75)系统 ,该流动相基
线平稳 ,能够达到基线分离 ,而且绿原酸峰的两侧没
有干扰的杂质峰 ,分离效果较好。所建立的该样品
中绿原酸含量的 HPLC测定方法 ,具有操作简便 、快
捷 ,灵敏度高 ,稳定性好 ,测定结果准确可靠 ,可作为
黄瓜皮中绿原酸含量测定的定量分析方法 。
运用 HPLC法测得黄瓜皮中绿原酸质量分数的
结果表明 ,黄瓜皮中绿原酸含量较为丰富 ,此可为黄
瓜皮在食品 、医药 、保健用品等领域的进一步开发和
研究提供理论参考。
参考文献
[ 1] 　陈绍华 , 王亚琴 ,罗立新.天然产物绿原酸的研究进展
[ J] .食品科技 , 2008(2):195 ～ 197.
[ 2] 　方华民 , 周 凯 ,鞠爱华.高效液相色谱法测定蓍草中绿
原酸的含量 [ J] .中国中药杂志 , 2009, 34(6):7 85 ～
786.
[ 3] 　艾心灵.烟草绿原酸的提取纯化工艺研究 [ D] .无锡:
江南大学 , 2007.
[ 4] 　国家药典委员会编.中国人民共和国药典(2005年版
一部)[ M] .北京:化工出版社 , 2005:61.
[ 5] 　王 利 , 冉 旭 , 罗 飞 , 等.苹果中绿原酸含量的 HPLC
法测定 [ J] .石河子大学学报 , 2008, 26(5):594 ～
596.
[ 6] 　田晨煦 ,徐小平 , 廖丽云 , 等.高效液相色谱 -串联质
谱法分离鉴定绿原酸及其相关杂质 [ J] .色谱 , 2007,
25 (4):496～ 500.
[ 7] 　贲昊玺 ,陆大东 , 卞宁生.黄瓜化学成分的提取与研究
[ J] .天然产物研究与开发 , 2008, 20(3):388 ～ 394.
[ 8] 　梁建根 ,张炳欣 , 喻景权.促生菌 CHI对黄瓜酚类物质
代谢的影响 [ J] .中国农学通报 , 2007, 23(6):462 ～
466.
[ 9] 　辛 广 ,刘长江 , 侯冬岩 ,等.高效液相色谱法测定南果
梨中绿原酸的含量 [ J] .食品科学 , 2004, 25(4):150
～ 152.
[ 10] 　李红梅 , 张 榕 ,常东胜高效液相色谱法测定蒲公英提
取物中绿原酸的含量 [ J] .药物分析杂志 , 2009, 29
(7):1230 ～ 1232.
[ 11] 　陈秋虹 , 徐 慧 , 蒋艳芳.高效液相色谱法测定桑叶中
的绿原酸和芦丁的含量 [ J] .中华中医药杂志 ,
2009, 24(5):663 ～ 665.
DeterminationofChlorogenicAcidinCucumberSkinbyHPLC
LILi-hua
(ColegeofChemicalandEnvironmentalSciences, ShaanxiUniversityofTechnology, Hanzhong723001, China)
Abstract:ToestablishanHPLCmethodfordeterminationofchlorogenicacidincucumberskin, ZorbaxE-
clipseXDB-C18wasadopted.ThemobilephasesconsistedofCH3OH -0.04% H3PO4(25∶75)ataflowrate
of1.0mL· min-1 , thedetectionwavelengthwassetat326nm, andcolumntemperaturewas30 ℃.Thelinear
rangeofchlorogenicacidwas0.0111 ～ 0.1332mg·mL-1(r=0.9992).Theaveragerecoveries(n=5)was99.
97% andRSDwas2.07%.Thecontentsofchlorogenicacidincucumberskinweremorethan8.10 mg· g-1.
Themethodwassimple, rapidandaccuratewithagoodreproducibility, andcouldbeappliedtodetermineofchlo-
rogenicacidincucumberskin.
Keywords:HPLC;cucumberskin;chlorogenicacid
·75·氨基酸和生物资源