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反相高效液相色谱法测定黑骨藤中滇杠柳苷Ⅰ的含量



全 文 :药传统应用特色的前提下和又要克服采集 、贮藏和保管等
不便时 , 笔者提出以下几点建议:
3.1 加强鲜药生产 、加工 、经营的管理和发展 , 鲜药应用
最主要的是来源问题 ,仅靠野外采集是不能满足临床需求
的。全国虽有众多种植药材的基地 , 但是专门生产和加工
鲜药的几乎为零 , 国家相关部分应考虑在全国范国内按照
GAP要求 , 建立一些道地的鲜药生产基地 , 配备专业的鲜
药加工设备和专业技术人员进行产地加工 ,同时按照 GMP
要求建立鲜药生产企业 , 实现鲜药的规模化生产。鲜药的
供货渠道统一由具有 GSP认证资格的药品经营企业经营 ,
并在城乡设立专门的鲜药店或鲜药市场。医院药房应根
据医生用药习惯因地制宜 , 配备相应的鲜药储存设备 , 储
存鲜药 , 以供临床使用。
3.2 加强鲜药基础理论和临床应用研究 , 广泛发动医药
高等院校 、医药研究机构以及中医药临床工作人员 ,开展
鲜药的生药学 、药物化学 、药理学 、药剂学 、生物化学 、生物
药剂学与药物动力学等基础理论的研究;开展临床应用的
研究 , 如保鲜技术和质量的控制 、分析鲜药的协同与制约
作用 、探讨鲜药配伍理论 、治病作用机理 、用法及用量等。
以利鲜药的应用更广泛 、更合理 、更有效。
3.3 建立专门的鲜药研究机构和配备专业研究人员 重
点研究在疗效上优于干品的鲜药品种 [ 2] , 阐明其化学成
分 、药理活性 、毒理作用 、保鲜技术等 , 创立新工艺 、新剂
型。以利扩大生产 、科学加工 、合理经营 , 达到生产规范化
与产业化 、加工与经营现代化 , 使鲜药的应用更科学 、更方
便 、更具特色 , 实现鲜药的生产 、加工 、经营和利用的可持
续发展。
4 结 语
随着人民生活水平的提高和卫生保健事业的发展 , 恢
复鲜药的生产和应用 , 对提高中医临床疗效 , 发挥中医特
色是非常有必要的。 我国幅员辽阔 , 特别是在广大农村 ,
鲜药资源极其丰富 , 是我们国家得天独厚的优势 , 应充分
开发和利用 , 以更好地继承和发展祖国的中医药事业。在
“回归自然”热潮的推动下和科学技术日新月异的今天 ,鲜
药的发展前景非常可观 ,相信在中医药界广大医务工作者
和科技工作者的不懈努力下 ,鲜药的明天会更加美好。
参考文献
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  2009年 3月 9日收稿
反相高效液相色谱法测定黑骨藤中滇杠柳苷Ⅰ的含量
贵阳中医学院(贵阳 550002) 徐 宏 杜 江
摘 要:目的:建立反相高效液相色谱法测定黑骨藤中滇杠柳苷Ⅰ的含量。方法:采用 AgilentZorbaSBC18色谱柱 , 以乙
腈 -水为流动相作梯度洗脱 , 流速 1.0mL? min-1, 检测波长 214nm, 柱温为 30℃。结果:滇杠柳苷Ⅰ在 0.6 ~ 2.1μg的范
围内呈良好的线性关系 ,平均回收率为 91.99% , RSD=1.76% 。结论:本法操作准确 ,可用于黑骨藤的质量控制。
关键词:反相高效液相色谱法;黑骨藤;滇杠柳苷Ⅰ
中图分类号:R297, 2  文献标识码:B  文章编号:1006-6810(2009)07-0053-02
  黑骨藤为萝科植物西南杠柳 PeriplocaforrestiiSchltr.
的根或全株 , 味苦 ,性热 , 具有祛风除湿 、通气散血之功效 ,
主要分布于我国云南 、贵州 、广西等地。黑骨藤为苗族地
区常用药材 , 被列为贵州的十大苗药之一 , 现已有成药应
用于临床 , 主要用于治疗风湿麻木疼痛 、闭经 、乳痈 、跌打
损伤 、骨折 、胃痛 、消化不良等疾病 [ 1] 。目前对其化学成分
的研究表明 , 其主要成分有强心苷 、C21甾体苷 、胡萝卜苷
和熊果酸等 [ 2-4] , 其药理活性的报道主要集中在强
心 [ 5-6] ,抗炎 , 镇痛 [ 7]活性方面 ,本课题组前期研究还发现
黑骨藤中的滇杠柳苷 Ⅰ 对多种肿瘤细胞具有显著的细胞
毒活性。目前 , 对黑骨藤的质量控制方法落后 , 主要是通
过性状及理化鉴别来鉴定黑骨藤药材 ,本研究采用滇杠柳
苷Ⅰ作为指标成分 ,对黑骨藤中的这一成分进行方法学考
察 , 为提高黑骨藤的质量控制水平提供科学依据。
1 仪器和试剂
Agilent1100液相色谱系统(DAD检测器);乙腈 , 甲醇
为色谱纯 ,水为超纯水 , 乙醇为分析纯;滇杠柳苷作者简
介:Ⅰ对照品(黑骨藤前期研究中分得的化合物 ,在选定色
谱条件分离后 ,按归 -化法计算含量为 98%以上);黑骨
藤药材采自贵阳百花湖 ,并经贵阳中医学院赵俊华教授鉴
定为萝科植物西南杠柳 PeriplocaforestiiSchltr.的根或全
株。
53 2009年 7月第 7期          中国民族医药杂志         DOI :10.16041/j.cnki.cn15-1175.2009.07.048
2 方法与结果
2.1 色谱条件:色谱柱:AgilentZorbaSBC18(4.6 mm×
150mm, 5μm), 预柱:AgilentZorbaSB18;柱温为:30℃;流
动相:乙睛 -水(0 ~ 11分钟 , 23:77 ;11 ~ 40分钟 , 20:80
);流速为:1.0mL· min-1;检测波长:214nm。
2.2 对照品溶液的制备:精密称取滇杠柳苷 Ⅰ对照品 , 加
甲醇制成 0.30mg/mL的溶液 , 作为对照品溶液。 色谱图
见图 1。
2.3 供试品溶液的制备:精密称取黑骨藤药材粉末(过
40目筛)6.0g, 置 100 mL锥形瓶中 , 精密加入 60%甲醇
50mL, 超声提取 60min, 冷却后滤过 , 滤液至蒸发皿中蒸
干 , 再用甲醇溶解定容至 5mL容量瓶中 , 溶液经 0.45μm
微孔滤膜滤过作为供试品溶液。色谱图见图 2。
2.4 标准曲线:分别取上述对照品溶液 2, 3, 4, 5, 6, 7μL,
按上述确定的色谱条件进样 , 记录峰面积与进样量 ,计算
回归方程。滇杠柳苷Ⅰ的线性方程为:Y=1067.57855X-
5.4194672,相关系数为 0.99999,线性范围为 0.6 ~ 2.1μg。
2.5 精密度实验:精密吸取上述样品供试液 5μL, 连续进
样 6次 , 测得滇杠柳苷Ⅰ的 RSD为 0.49%。
2.6 重复性实验:取黑骨藤药材粉末按供试液的制备方
法平行操作 6份 , 进样 5μL进行 HPLC分析 ,结果表明所
测成分的 RSD为 1.70%。
图 1 滇杠柳苷Ⅰ对照品 HPLC图
图 2样品 HPLC图
2.7 稳定性实验:取同一样品 , 按供试液的制备方法处
理 , 在 0, 2, 4, 6, 8, 10h分别进样 5μL,进行 HPLC分析 , 结
果表明所测成分的 RSD为 0.95%。该样品在 10h内稳
定。
2.8 回收率实验:精密称取已知含量的样品 6份(相当
于测定量的 1/2), 分别精密加入对照品溶液(0.3mg·
min-1)2mL,按上述样品制备方法 , 制备加样回收供试品
溶液 , 以高效液相色谱仪检测 , 计算回收率 ,结果见表。
表 1回收率实验结果
编号 样重(g) 滇杠柳苷Ⅰ量(mg) 加入标品的量(mg) 测得量(mg) 回收率% 平均值% RSD%
1 3.0014 0.4892 0.6 1.0409 9.13
2 3.0009 0.4891 0.6 1.0565 93.33
3 2.9994 0.4890 0.6 1.0541 92.86
4 3.0012 0.4892 0.6 1.0559 93.19
5 2.9989 0.4888 0.6 1.0530 92.68
6 3.0007 0.4891 0.6 1.0389 89.74
2.9 样品的测定结果:取 3份黑骨藤粉末按 2.3项下制备
供试液 , 在 2.1项色谱条件下进样 5μL, 测得黑骨藤中滇杠
柳苷Ⅰ的含量。测定结果见表 2。
表 2 样品测定结果
样品编号 样重(g) 滇杠柳苷Ⅰ(mg· g-1)
滇杠柳苷Ⅰ平均
含量(mg· g-1)
1 6.0002 0.159
2 5.9996 0.164 0.163
3 5.9998 0.166
3 讨论
3.1 在样品的制备过程中 , 还分别对不同提取方法 、提取
溶剂 、提取溶剂浓度 、提取溶剂量及提取时间进行了考察 ,
结果表明当采用 2.3项下的提取方法时 , 滇杠柳苷Ⅰ 的测
得含量达最大值。故选用 2.3项下方法作为样品的制备方
法。
3.2 黑骨藤中的滇杠柳苷Ⅰ 对多种肿瘤细胞具有显著的
细胞毒活性 , 本课题采用这一化合物作为指标成分 , 可对
提高黑骨藤的质量控制水平提供一定依据。
参考文献
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1997.436   2009年 3月 9日收稿
RP-HPLCdeterminationofperiforosideⅠ inPeriplocaforrestiSchltr.
XuHong, DuJiang﹡
(GuiyangTraditionalChinesemedicinecolege, Guiyang550002, China)
AbstractObjective:TosetupadeterminationofperiforosideⅠ inPeriplocaforrestiSchltrbyRP-HPLC.Meth-
ods:PeriforosideⅠ couldbeseparatedthroughAgilentZorbaSBC18 witheluentofacetonitrile-waterasamobilephase.Theflow
ratewas1.0mL· min-1 , andthedetectionwavelengthwasat214nm.Results:ThelinearrangeofperiforosideⅠ was0.62.1μg.
Theaveragerecoverywas91.99%withRSD为 1.76% forperiforosideⅠ .Conclusion:Themothodisaccurate.Itcanusedforthe
qualitycontrolofPeriplocaforrestiiSchltr.
Keywords:RP-HPLC;PeriplocaforrestiiSchltr;PeriforosideⅠ ;
侗医去疣汤治疗扁平疣 40例
贵州省镇远县舞阳镇杨再斌中医诊所(镇远 557700) 杨再斌 田贵朝
关键词:扁平疣;去疣汤;侗医治疗
中图分类号:R297, 2  文献标识码:B  文章编号:1006-6810(2009)07-0055-01
  扁平疣是临床上比较常见的皮肤病 , 本人多年来采用
木兰去疣汤治疗本病 40例 ,取得了较好的临床效果 , 现总
结如下。
1 一般资料
总病例 40例 ,其中男性 8例 ,女性 32例。发病年龄 8
~ 38岁 , 多数在 14 ~ 30岁之间。病程最短者 7天 ,最长者
>3年 ,多数在 3个月 ~ 1年。皮疹发于前额 、面部及手背
者为多 , 仅个别病例发病于颈胸及前臂。
2 治疗方法
本组病例均采用本人自拟木兰去疣汤治疗 ,本方具有
清热解毒 、活血软坚之效 , 方药组成;笔筒草 30g、板蓝根
30g、娘败 30g、蜂房 10g、夏枯草 10g、骂并马 15g、赤芍 10g、
红花 10g、香附 20g、牡蛎 30g、地肤子 10g。若皮疹色红加
娘娅 10g;痒甚加白癣皮 10g;病程日久 , 加莪术 10g。每日
1剂 ,水煎服 , 每次 100 ~ 150毫升 , 每日 3次 , 同时取部分
药液加适量明矾外洗患处 ,每日 2 ~ 3次 , 每次 20分钟 , 2
周为 1疗程。
3 治疗结果
3.1 疗效标准:皮疹完全消退或仅留色素沉着为治愈;皮
疹消退 2/3以上为显效;皮疹部分消退为有效 , 用药 1疗
程皮疹无变化为无效 。
3.2 治疗结果:40例中治愈 23例(57.5%), 显效 4例
(10%),有效 7例(17.5%), 无效 6例(15%), 总有效率
为 85%, 最少用药 3剂 ,多数为 10剂左右。
4 典型病例
李某某 ,女 , 14岁 , 学生 ,家住镇远县城周大街 ,颜面部
及双手背起皮疹 ,稍痒半年 , 未认真治疗。就诊时检查见:
前额 、双颊及手背有多数密集米粒大小的扁平丘疹 , 舌质
红 , 苔薄黄 ,脉弦滑。诊断为扁平疣 , 辩证为热毒内蕴 , 气
血凝滞 , 治以清热解毒 , 活血软坚 ,给开去疣汤 3剂 , 3日复
诊 , 皮疹明显消退 , 继方 5剂 , 皮疹全部消退 , 随访 2年未
复发。
5 体 会
祖国医学理论认为 “症属肝胆少阳经 , 风热血燥或怒
动肝火或肝克脾气所致 ”。 “疣目者 , 人手足边忽生如豆 ,
或如结筋 ,或五个或十个 , 相连肌里 ,粗施于内 , 谓之疣目 ,
此亦是风邪搏于股内而变生也 ”。结合临床病例 , 观察到
大部分患者均有舌质红 ,舌边有瘀点 , 苔薄白或薄黄 , 脉弦
滑 , 大便偏干 , 口干喜饮等征象 , 考虑本病是由脾湿肝郁 ,
外感风邪 , 郁久化热 , 气血凝滞所致 , 故采用清热解毒 , 活
血软坚的去疣汤治疗。方中笔筒草清肝疏风 , 板蓝根 、娘
败酱 、骂并马 、蜂房清热解毒 , 夏枯草清肝经郁热而软坚 ,
赤芍 、红花活血化瘀 , 香附解郁舒肝 , 牡蛎平肝软坚 , 地肤
子祛风除湿止痒。经观察治疗 40例 ,有效率 85%, 在治疗
观察中未见任何不良反应。
  2009年 3月 9日收稿
55 2009年 7月第 7期          中国民族医药杂志