全 文 ：D101大孔树脂纯化犁头草黄酮的研究
　收稿日期:2010-05-17
　基金项目:安康学院基金资助项目(NO.2007AKXY029)。
　作者简介:谢娟平(1972-),女 ,陕西宝鸡人 ,硕士 ,讲师 ,陕西省安康学院化学化工系 ,研究方向为中药天然成分分离分析与开发。
谢娟平
(安康学院 化学化工系 ,陕西 安康　725000)
摘　要:研究 D101 大孔吸附树脂吸附纯化犁头草黄酮的工艺条件。以总黄酮含量为指标 , 以 UV 为检测手
段 ,用不同浓度的乙醇进行洗脱 , 首次考察 D101 大孔吸附树脂对犁头草黄酮的吸附和洗脱条件。 D101 大孔
吸附树脂纯化犁头草黄酮的动态吸附容量为 709 μg / ml , 使用 3 倍体积蒸馏水洗去杂质 ,使用浓度为 50%乙
醇 ,用量为 5 倍树脂体积时可以完全洗脱提取物中的总黄酮 , 洗脱物总黄酮含量可达 58.3%, 提取率为
2.1%。D101 大孔吸附树脂能有效纯化犁头草黄酮 ,该工艺简单 , 成本低 ,产物纯度高 ,产率高 , 可用于犁头草
中有效成分的富集分离和大工业生产。
关键词:犁头草;D101大孔树脂;分离纯化;黄酮
　　犁头草 ,堇菜科多年生草本植物 ,为一种常用
中药 ,产于我国长江流域及南部各省 ,多生于山坡
林边 、溪边或荒山草地中 ,资源极为丰富。据《植
物名实图考》等文献记载 ,犁头草能清热解毒 , 除
脓消炎。治痈疽 、疔毒 、外伤感染 、出血 、毒蛇咬伤
和湿热肠痈下血 、角膜实质炎及匐行性角膜溃疡 、
扁桃体炎 、肺炎 、盆腔炎 、疮疡等症 ,在民间使用极
为广泛。现代药理实验表明 ,犁头草具有抗金黄
色葡萄糖球菌 、抗 HBsAg 、抗 HBV 及治疗急慢
性骨髓炎等多种药理作用 ,犁头草水提取物和乙
醇提取物可明显抑制疱疹病毒 ,有抗 HBsAg 的
功效[ 1-4] ;以犁头草组方的“复方九神汤”对急慢
性骨髓炎治疗有效率为 100 %, 治愈率达
94 %[ 5] 。可见 , 犁头草具有广泛的开发和利用
价值 ,值得加强资源开发 ,实现综合利用 。目前国
内研究未见犁头草化学成分及其有效成分的提取
纯化工艺方面的报道 ,主要集中在临床习用方面。
据报道 ,犁头草主要为黄酮类 ,但尚未见对其提取
的研究。文章首次对犁头草提取进行了研究 ,通
过比较不同产地的犁头草 ,筛选一种含量较高的
样品;采用不同提取方法 ,筛选出最佳提取方法;
采用 D101 大孔树脂富集犁头草黄酮 ,建立了相
应的工艺条件 ,使产品总黄酮含量达 58.3%,达
到制药和保健食品添加剂的要求 ,为合理开发犁
头草资源和大工业生产提供了较好的控制和评价
参考 。
1　仪器与试药
SPUV -1901 紫外可见分光光度计(上海色
谱仪器有限公司);KQ2200E 超声波清洗仪(上海
精密仪器仪表有限公司);电子分析天平(北京塞
多利斯仪器系统有限公司)。树脂:D101大孔吸
附树脂(青岛海洋有限公司);对照品:芦丁对照
品(中国药品生物制品鉴定所);试剂:所用试剂
均为分析纯 ,所用水均为二次蒸馏水。药材:犁头
草 ,采于大巴山(安康市佛坪乡),经陕西省安康市
药品检验所鉴定为犁头草 。
2　方法与结果
2.1　犁头草中总黄酮的测定
2.1.1　对照品溶液的制备[ 6] 　精密称取芦丁对
照品 20 mg ,加 65%乙醇溶解 ,定容于 100 ml容
量瓶中 , 摇匀即得 0.2 mg/ml 的对照品溶液 ,
备用 。
2.1.2　标准曲线的制备　精密吸取芦丁对照品
溶液 0.1 ,0.5 ,1.0 ,1.5 ,2.0 ,3.0 ml分别于 25 m l
容量瓶中 ,加入 0.1 mol/ l的三氯化铝溶液 3 m l ,
摇匀 ,再加入 65%乙醇并定容至刻度 ,摇匀 ,放置
10 min 后 ,用 1 cm 比色皿 ,以试剂空白为参比 ,
在波长 274 nm 处测定吸光度 ,以吸收度为纵坐
标 ,质量浓度为横坐标 ,进行线性回归 ,得回归方
程A =0.0345 C +0.0055 ,R =0.9994 ,线性范
围为 0.8μg / ml -24 μg/ ml。
2.1.3　犁头草总黄酮的测定　犁头草提取浓缩
溶液及各阶段洗脱液按标准曲线下方法测定吸光
度 ,代入回归方程计算总黄酮含量 。
2.2　提取方法与样品的选择
2.2.1　提取方法的研究　取犁头草(陕西省安康
·61·2010(5) 陕　西　农　业　科　学
市镇坪县)干燥地上部分 3份 ,每份 100 g ,粉碎 ,
以 6倍量的水 、70%乙醇回流和超声法分别提取
2次 ,第一次 1.5 h ,第二次 1 h ,按 2.2.5项下方
法考察所得产物的总黄酮含量和提取率 ,结果见
表 1。经比较得知 ,70%乙醇超声法较好 ,但与水
提取法所得的总黄酮的量相差不大 ,而且乙醇在
回收时会造成一定的损失 ,从经济及工业化的角
度考虑 ,选择以水提取犁头草 。
2.2.2　提取用样品的选择　取不同来源犁头草
干燥地上部分各 1份 ,每份 100 g , 粉碎 ,以上述
水提取法提取 ,考察所得产物的总黄酮含量和提
取率 ,结果见表 1 。
表 1　不同提取方法的比较结果
药材来源 提取方法 提取率(%) 提取物总黄酮含量(%)
陕西省安康市镇坪县
水提取法 11.3 15.1
70%乙醇回流法 11.8 15.6
70%乙醇超声法 12.2 15.8
四川省广元市 水提取法 11.8 16.1
　　根据实验结果 ,选择总黄酮含量较高的四川
省广元市产犁头草为原药材 ,以水提取 ,制得药材
提取液。
2.3　上柱犁头草样品浓缩液的制备
取犁头草 0.3 kg ,加水煎煮 3次 ,每次加水 2
l ,每次煎煮 2 h ,合并煎煮液 ,滤过 ,滤液浓缩至相
对密度为 1.10-1.13(50e测)的稠膏 ,放冷 ,室温
静置约 4 h ,备用。
2.4　大孔吸附树脂预处理
以95%乙醇溶液浸泡树脂 2h ,充分溶胀后用
湿法装柱 ,以 95%乙醇洗脱至流出液与等量水混
合不呈白色浑浊为止 ,再用蒸馏水洗至无醇味 ,备
用。称取树脂时以树脂在水中溶胀后的体积
(mL)为单位 。
2.5　吸附过程的研究[ 7]
2.5.1　静态吸附容量的测定　取处理好的 D101
大孔吸附树脂 ,平行做 3份 ,每份 10 m l ,各以 100
ml犁头草提取液浸泡过夜 ,并时时搅动 ,使吸附
饱和 ,过滤 ,收集流出液 ,以芦丁为对照 ,按 2.2.4
项下检查吸附后残留液中的总黄酮含量 ,计算静
态吸附量:Q =(C1-C2)×V1 ÷V2 (C1-浓缩
样品中总黄酮的浓度 , C2-吸附后残留样品液中
总黄酮的浓度 , V1 -样品体积 , V2 -湿树脂体
积)。测定结果见表 2 。
表 2　吸附容量实验结果
浓缩样品中总黄酮量(μg / ml) 吸附后残留样品总黄酮量(μg /ml) 静态吸附容量(μg /ml)
116.5 17.4 991
2.5.2　动态吸附量的测定 　取处理好的 D101
大孔吸附树脂 80 ml装柱(径高比 1∶8),以提取
的样品液浓缩样上柱 (生药浓度为 30 g/500
ml),以 2BV/h的流速连续通过树脂柱 ,收集流出
液 ,测定流出液中的犁头草中总黄酮的浓度 ,结果
当上样量为 500 ml时 ,流出液中的犁头草中总黄
酮的浓度为 3μg /ml ,达到了原始浓缩液浓度的
3%(原始浓缩液总黄酮浓度116.5 μg /ml),以此
为泄露点 ,使充分吸附饱和 ,按 2.2项下方法测定
上柱前后样品中犁头草总黄酮含量的变化 ,计算
动态吸附量:Q =(C1 -C2)×V 1 ÷V 2(C1 -上柱
前样品中犁头草总黄酮的浓度 , C2 -上柱后样品
中的犁头草总黄酮的浓度 , V 1 -上样体积 , V 2 -
湿树脂体积)。测定结果见表 3。
表 3　动态吸附量结果
上柱样品浓度
(μg /ml)
流出液浓度
(μg / ml)
树脂体积
(V 2 ml)
上柱样品体积
(V 1 ml)
动态吸附量
(μg /ml)
116.5 3 80 500 709
·62· 陕　西　农　业　科　学 2010(5)
　　可见 D101大孔吸附树脂对犁头草黄酮的动
态吸附量为 709 μg / mL 。结合样品浓缩液中总
黄酮的浓度 ,确定以 7倍于树脂的体积上样。
2.6　解吸阶段的考察
2.6.1　乙醇浓度的选择　取已吸附的树脂 ,经 3
倍柱床体积的蒸馏水洗脱后 ,依次用 10%;20%;
30%;50%;70%;80%乙醇溶液各 4倍柱床体积
进行梯度解吸 ,分别洗至无色 ,分段收集解吸液 ,
浓缩 ,回收乙醇至干 ,各取样品 0.1 g 按 2.2项下
方法测定犁头草样品中总黄酮含量 ,以犁头草中
总黄酮含量为纵坐标 ,以乙醇浓度为横坐标 ,绘制
解吸曲线 ,求出最佳洗脱浓度 ,结果见图 1 。
图 1　不同浓度乙醇洗脱结果
图 2　不同体积乙醇洗脱曲线
结果表明 ,用 D101大孔吸附树脂 ,乙醇洗脱
分离犁头草中的黄酮是可行的 。综合分析 ,确定
以水洗去杂质 ,再以 50%乙醇洗脱 ,即可将大部
分黄酮洗脱下来 。
2.6.2　乙醇洗脱量的选择　取已吸附的树脂 ,以
10BV于树脂体积的 50%乙醇洗脱 ,每洗脱 1BV
后收集洗脱液 ,干燥 ,测定干燥物中总黄酮含量 ,
结果见图 2。表明用 5BV的 50%乙醇洗脱 ,树脂
中吸附的犁头草黄酮类成分基本洗脱完全。
3　结论
(1)犁头草的研究未得到广泛开展 ,其化学成
分和含量测定未见文献报道 ,但是民间使用和临
床疗效却较好 。据报道 ,犁头草在治疗化脓性关
节炎 、抑制疱疹病毒 、抗 HBsAg 、治疗创伤性溃
疡 、急慢性骨髓炎方面有较好的疗效[ 2-5] 。此外 ,
据《植物名实图考》等文献记载 ,犁头草能清热解
毒 , 除脓消炎 。治痈疽 、疔毒 、外伤感染 、出血 、毒
蛇咬伤和湿热肠痈下血 、角膜实质炎及匐行性角
膜溃疡 、扁桃体炎 、肺炎 、盆腔炎 、疮疡等症 ,内服
并外用。可见 , 犁头草具有广泛的开发和利用价
值 ,值得加强资源开发 ,实现综合利用。
(2)犁头草中所含的黄酮类成分水溶性较
大 ,在进行药材提取时 ,可以水提取。D101树脂
是一种球形非极性苯乙烯吸附剂 ,适宜从水溶液
中分离黄酮类成分。吸附树脂可通过再生反复利
用。其对犁头草黄酮的动态吸附量为 709
μg / ml ,以3倍于树脂体积水洗脱杂质后 ,再以5
倍于树脂体积的 50%乙醇洗脱 ,收集洗脱液 ,干
燥产物中总黄酮含量为 58.3%,提取率为 2.1%。
(3)犁头草中所含的黄酮的吸附分离工艺未
见报道 ,本研究首次将 D101大孔吸附树脂应用
于犁头草中黄酮的吸附分离 ,结果所得产物纯度
高 ,工艺简单 ,可用于犁头草中有效成分的富集分
离和大工业生产 。
参 考 文 献:
[ 1] 　李世全编.秦岭巴山天然药物志[ M] .西安:陕西科
学技术出版社 , 1987.
[ 2] 　郑晓辉 , 沈泽培 , 黄枫.犁头草治疗化脓性关节炎
[ J] .中医药学刊 , 2005 , 23(8):1 516-1 518.
[ 3] 　郑民实 , 罗思齐 , 等.中草药抗 HBsAg 的实验研究
[ J] .微生物杂志 , 1987 , 12(4):1-5.
[ 4] 　张争鸣.犁头冰散治疗创伤性溃疡 120 例[ J] .湖南
中医杂志 , 1996 , 12(5):71-72.
[ 5] 　曹勇 ,等.“复方九神汤”治疗急慢性骨髓炎[ J] .北京
医学 , 1992 , 11(2):91.
[ 6] 　余燕影 ,彭志兵 ,等.紫外分光光度法测定丰城鸡血
藤中总黄酮[ J] .中草药 , 2005 , 36 (11):1650-1651.
[ 7] 　郭永学 ,李楠 , 郝长全.大孔树脂纯化山楂叶总黄酮
工艺研究[ J] .中成药 , 2006 , 28(1):23-26.
·63·谢娟平:D101 大孔树脂纯化犁头草黄酮的研究