免费文献传递   相关文献

不同产地粉萆薢总皂苷含量测定



全 文 :[收稿日期] 20121231(007)
[基金项目] 北京中医药大学科研创新团队项目(2011-CXTD-
12)
[第一作者] 李淑青,硕士,从事中药药效物质与质量研究
[通讯作者] * 张兰珍,研究员,博士,从事中药药效物质与质量
研究,Tel:01084738629,E-mail:zhanglanzhen01 @
126. com
不同产地粉萆薢总皂苷含量测定
李淑青,肖潇,王坤凤,吴玲芳,张兰珍*
( 北京中医药大学中药学院,北京 100102)
[摘要] 目的:建立粉萆薢总皂苷含量测定方法。方法:以薯蓣皂苷元为对照品,高氯酸为显色剂,测定波长 408 nm,采
用可见分光光度法测定了 5 个不同产地粉萆薢药材总皂苷含量。结果:薯蓣皂苷元线性范围为 1. 55 ~ 12. 42 mg·L -1,r =
0. 999 5(n = 6) ,加样回收率为 100. 69%,RSD 2. 75%,不同产地粉萆薢总皂苷含量分别为广西玉林 2. 85%,RSD 1. 32%;广西
南宁 2. 76%,RSD 1. 16%;浙江临安 2. 54%,RSD 1. 38%;湖北宜昌 1. 94%,RSD 1. 83%;四川崇州 0. 84%,RSD 1. 75%。结
论:测定方法简便,准确,重复性好,可作为粉萆薢总皂苷的含量测定。
[关键词] 粉萆薢;总皂苷;不同产地
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2013)12-0118-03
[doi] 10. 11653 /syfj2013120118
Method for Determination of Total Saponins in Dioscoreae
hypoglauca from Different Areas
LI Shu-qing,XIAO Xiao,WANG Kun-feng,WU Ling-fang,ZHANG Lan-zhen*
(School of Chinese Materia Medica,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China)
[Abstract] Objective:The method for determination of total saponins in Dioscoreae hypoglauca from
different areas was developed. Method:Spectrophotometer was used to determine the total saponins with
perchloric acid for colorimetric reaction and diosgenin as the reference substance at 408 nm as measurement
wavelength. Result:The linearity range of diosgenin was 1. 55-12. 42 mg·L -1 (r = 0. 999 5). The average
recovery was 100. 69%,RSD 2. 75% . The content of total saponins in D. hypoglauca from different areas was
2. 85% (Yulin,Guangxi) ,2. 76% (Nanning,Guangxi) ,2. 54% (Linan,Zhejiang) ,1. 94% (Yinchang,
Hubei) ,0. 84% (Chongzhou,Sichuan) respectively. Conclusion:The method was simple,accurate and
reproducible,which could be applied to the determination of saponins in D. hypoglauca from different areas.
[Key words] Dioscoreae hypoglauca;total saponins;different areas
粉萆薢为薯蓣科植物粉背薯蓣的干燥根茎。在
四川、江西、福建、浙江等地,纤细薯蓣、叉蕊薯蓣、山
萆薢、穿龙薯蓣、细柄薯蓣的根茎也作为粉萆薢入
药[1]。粉萆薢味苦,平;归肾、胃经,具有祛风通痹,
利湿去浊功效,用于淋病白浊,腰膝痹病,湿热疮毒,
白带过多,风湿痹痛,关节不利[2]。临床上萆薢主
要用于治疗痛风、糖尿病、动脉粥样硬化、癌症等,在
治疗细菌感染上有很好的疗效和应用价值[3]。粉
萆薢皂苷部位的主要成分薯蓣皂苷有抗肿瘤、改善
心血管、调节免疫、抗血小板聚集、降血脂、抗炎镇
痛[3-7]等作用;原薯蓣皂苷有较好的抗肿瘤作用[7]。
本论文建立粉萆薢中总皂苷含量测定方法,对 4 个
主要产地粉萆薢总皂苷进行含量测定,为粉萆薢的
开发和研究提供方法和依据。
1 材料
紫外-可见分光光度计(尤尼科 UV-2000 型) ,
·811·
第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 12
Jun.,2013
粉萆薢药材购于亳州千草药业饮片厂,产地分别为
广西玉林、广西南宁、浙江临安、湖北宜昌、四川崇
州,经北京中医药大学中药鉴定系张贵君教授鉴定
为薯蓣科植物粉背薯蓣 Dioscorea hypoglauca Palibin
的干燥根茎,样品保存于北京中医药大学中药化学
系;薯蓣皂苷元对照品(购于中国生物制品检定所,
批号 200001,经 HPLC 检测纯度 > 98%) ,高氯酸
(分析纯) ,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 供试液配制 对照品溶液:取薯蓣皂苷元对照
品 3. 88 mg,精密称定,置于 25 mL 量瓶中,加甲醇
溶解,用 50%的甲醇稀释至刻度,摇匀,做对照品
溶液。
供试品溶液:粉萆薢药材粉碎过 60 目筛,取药
材粉末 200 mg,精密称定加入 70%的乙醇 50 mL,
称重,加热水浴回流 1 h。冷却后,补足质量,过滤,
取续滤液为供试品溶液。
2. 2 显色方法及测定波长的选择[9-12] 每份取 0. 5
mL对照品溶液,以显色温度(25,45,65 ℃) ,显色时
间(25,45,65 min) ,高氯酸用量(3,5,7 mL)作为考
察的 3 个因素及 3 个水平,以吸光度为考察指标,采
用 L9(3
4)正交表进行试验,并平行做 2 份。根据结
果得知采用 5 mL 高氯酸,反应时间为 25 min,水温
为 25 ℃的显色方法较好。
分别精密吸取薯蓣皂苷元对照品 0. 3 mL,供试
品溶液 0. 4 mL,置于西林瓶中,低温水浴挥干溶剂,
加入 5 mL 高氯酸,摇匀静置,用橡皮塞塞好,在
25 ℃下显色 25 min,以未加对照品的溶液做空白对
照,在 300 ~ 600 nm扫描测定吸收光谱,显色前后全
波长图谱如图 1,对照品、供试品的吸收峰形相似,
最大吸收波长(λmax)均为 408 nm。
2. 3 线性关系考察 精密吸取薯蓣皂苷元对照品
溶液(0. 155 2 g·L -1)0. 0,0. 1,0. 3,0. 5,0. 7,0. 8
mL,置于 10 mL的量瓶中,精密加入 5 mL高氯酸试
剂,摇匀,加塞置于 25 ℃下静置 25 min,于 408 nm
处测定吸光度,计算含量,以薯蓣皂苷元对照品浓度
为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,进行线
性回归考察,回归方程 Y = 0. 088 6X - 0. 007 5(r =
0. 999 5) ,表明薯蓣皂苷元在 1. 55 ~ 12. 42 g·L -1与
吸光度线性度良好,且过原点。
2. 4 精密度考察 按供试品溶液制备法制备供试
品溶液,精密吸取同一份粉萆薢药材供试品液 6 份,
每份 0. 5 mL,按样品含量测定项下方法测定吸光
度,计算含量,结果 RSD 1. 48%,表明该方法精密度
A. 薯蓣皂苷元对照品显色后 λmax = 408 nm;
B. 供试品显色后 λmax = 408 nm;C. 供试品显色前
图 1 粉萆薢吸收光谱
良好。
2. 5 稳定性考察 按供试品溶液制备法制备供试
品溶液,分别于配制后 0,10,20,30,40,60 min 后精
密吸取 0. 5 mL,按样品含量测定项下方法测定吸光
度,计算含量,结果 RSD 2. 68%,样品溶液在 1 h 内
稳定性良好。
2. 6 重复性考察 按供试品溶液制备法制备供试
品溶液,平行制备供试品溶液 6 份,每份 0. 5 mL,按
样品含量测定项下方法测定吸光度,计算含量,结果
RSD 1. 03%,结果表明重复性较好。
2. 7 加样回收率试验 取粉萆薢药材粉末(过 60
目筛,总皂苷含量约为 2. 85%)6 份,每份 100 mg,
精密称定,分别加入 0. 3 g·L -1的薯蓣皂苷元对照品
溶液 8. 0 mL,加入 70%的乙醇 25 mL,称重,加热回
流提取 1 h后,冷却,补足质量,过滤,取续滤液,按
样品含量测定项下方法测定吸光度,计算总皂苷含
量,结果平均加样回收率为 100. 69%,RSD 2. 75%,
见表 1。
2. 8 不同产地粉萆薢药材总皂苷含量测定方
法 粉萆薢药材粉碎过 60 目筛,取药材粉末 200
mg,精密称定,加入 70%的乙醇 50 mL,称重,加热
水浴回流 1 h。冷却后,补足质量,过滤,取续滤液为
供试品溶液。吸取适量的供试品溶液,置于 10 mL
的西林瓶中,水浴低温挥干溶剂,放冷后精密加入
·911·
李淑青,等:不同产地粉萆薢总皂苷含量测定
表 1 总皂苷加样回收率考察
No.
称样量
/mg
含总皂
苷量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
1 100. 1 2. 85 2. 40 5. 19 97. 50
2 100. 2 2. 86 2. 40 5. 32 102. 50
3 100. 3 2. 86 2. 40 5. 29 101. 25
100. 69 2. 75
4 100. 3 2. 86 2. 40 5. 38 105. 00
5 99. 6 2. 84 2. 40 5. 22 99. 17
6 99. 4 2. 83 2. 40 5. 20 98. 75
5 mL的高氯酸试剂,加塞于 25 ℃下放置 25 min 后,
在 408 nm处测定吸光度。结果见表 2。
表 2 不同产地粉萆薢总皂苷含量测定(n = 3) %
产地 总皂苷质量分数 RSD
广西玉林 2. 85 1. 32
广西南宁 2. 76 1. 16
浙江临安 2. 54 1. 38
湖北宜昌 1. 94 1. 83
四川崇州 0. 84 1. 75
3 讨论
粉萆薢总皂苷含量测定比较了高氯酸-香草醛-
冰醋酸比色法[8]和高氯酸法[9],结果高氯酸法操作
简便,快速,且能准确测定总皂苷的含量。
粉萆薢药材主产区为广西和浙江,且在县乡药
材市场中,药典记载粉萆薢入药品种为薯蓣科植物
粉背薯蓣的干燥根茎,在保证粉萆薢正品的前提下,
本实验筛选出 5 个主要产地粉萆薢作为供试品药
材,经测定广西玉林产粉萆薢药材总皂苷的含量为
最高,为 2. 85%,广西南宁次之,四川崇州产地粉萆
薢总皂苷含量为最低,粉萆薢的地道药材为广西南
宁所产,但此批粉萆薢药材中总皂苷含量不是最高。
[参考文献]
[1] 伍月红,方锦霞. 萆薢的药理作用与临床应用[J].
广东药学,2005,15(3) :69.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[S].北
京:化学工业出版社,2005:203.
[3] 江苏新医学院.中药大辞典.下册[M].上海:上海科
学技术出版社,1986:2001.
[4] 岳蕾,陈玲,寇俊萍,等.薯蓣皂苷元药理活性及其
机制研究进展[J]. 中国临床药理学与治疗学杂志,
2010,(2) :223.
[5] 张楠,张杰,刘志礼,等. 盾叶冠心宁片治疗高脂血
症的临床试验研究[J]. 中西医结合心脑血管病杂
志,2009,7(3) :255.
[6] 张伟峰,刘宝山. 薯蓣皂苷的药理作用研究进展
[J]. 世界中西医结合杂志,2010,5 (6) :543.
[7] 谢守军,宋鸿儒,彭兴荣. 穿山龙总皂甙对佐剂性关
节炎大鼠病理改变的影响[J]. 四川中医,2007,25
(8) :10.
[8] 赵宝娟.原薯蓣皂苷对 60 种人癌细胞株的细胞毒谱
[J].国外医药:植物药分册,2002,17(5) :202.
[9] 乔春峰,檀爱民,董辉,等.国产闭鞘姜属植物中薯蓣
皂甙元的含量测定[J].中国药科大学学报,2000,31
(2) :156.
[10] 王俊. 分光光度法测定薯蓣皂苷元[J]. 分析实验
室,2004,23(1) :73.
[11] 周媛,严铭铭,邵帅,等. 黄花草木犀总皂苷提取纯
化工艺优选[J]. 中国实验方剂学杂志,2012,18
(5) :1.
[12] 王光忠,张明,葛如斌,等. 大孔树脂纯化盾叶薯蓣
总皂苷的工艺研究[J]. 中国实验方剂学杂志,
2009,15(5) :25.
[责任编辑 顾雪竹]
·021·
第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 12
Jun.,2013