全 文 ：收稿日期:2007-06-26;　修订日期:2007-11-23
作者简介:郭秋平(1978-),女(汉族),江苏扬州人 ,现为广州中医药大学
在读博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事中药新药研究与开发工作.
＊通讯作者简介:李卫民(1954-), 男(汉族),河北磁县人 , 现任广州中医
药大学教授 ,博士学位 ,主要从事中药新药研究与开发工作.
不同产地的知母中总皂苷和菝葜皂苷元的含量测定
郭秋平 1 , 吴湖坤 2 , 关红晖2 , 李卫民 1＊
(1.广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 510006;
2.广州中医药大学新药研究与开发中心 ,广东 广州 　510405 )
摘要:目的 考察不同产地知母中总皂苷 、菝葜皂苷元的含量。方法 采用香草醛 -高氯酸法测定不同产地知母中总皂
苷的含量;采用高效液相色谱 -蒸发光散射法测定不同产地知母中菝葜皂苷元的含量 , 色谱柱 WatersNova-PakC18;流
动相为甲醇∶水 =90∶10;流速为 1.0 ml· min-1;柱温室温 , 漂移管温度 45℃;载气流速 30 psi。结果 河北 、安徽 、广东
知母中总皂苷的含量为 6.04% ～ 7.91%, 回收率为 99.28%, RSD为 2.83%(n= 6);菝葜皂苷元的线性范围为 1.65 ～ 6.
6 μg(r=0.999 7),河北 、安徽 、广东知母中的菝葜皂苷元含量为 0.72% ～ 0.97%, 回收率为 106.34%, RSD为 2.43%(n
= 6)。结论 各产地知母中菝葜皂苷元含量间变异较大 ,以河北知母中总皂苷及菝葜皂苷元的含量最高。
关键词:知母;　总皂苷;　菝葜皂苷元;　高效液相色谱 -蒸发光散射法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)06-1409-02
DeterminationofAnemarrhenaSaponinandSarsaSapogenininAnemarrhenafromVari-
ousHabitats
GUOQiu-ping1 ,WUHu-kun2 ,GUANHong-hui2 , LIWei-min1＊
(1.SchoolofChineseMateriaMedica, GuangzhouUniversityofChineseMedicine, Guangzhou510006, China;
2.TheResearchCenterofChineseMateriaMedica, GuangzhouUniversityofChineseMedicine, Guangzhou,
510405, China)Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentofAnemarrhenasaponinandsarsasapogenininAnemarrhena.MethodsThe
contentofAnemarhenasaponinwasdeterminedbycolorimetry;thecontentofsarsasapogeninwasdeterminedbyHPLC-ELSD.
Thecolumnwasapackedwith5 μmstationaryphaseWatersNova-PakC18 columnandamobilephaseofmethanol-water(90∶10), withaflowrateof1.0 ml· min-1 , atatemperatureofdrifttubeof45℃, andthenebulizernitrogenflowratewas30
psi, withauniversaldetectorEvaporationLightScateringDetector(ELSD).ResultsAnemarrhenasaponininAnemarrhenaewas
6.04% ～ 7.91%, andtherecoveryratewas99.28 %, RSD<3%(n=6).Thesarsasapogenincalibrationcurvewaslinearin
therangeof1.65 ～ 6.6 μg(r=0.999 7)andtherecoveryratewas106.34%, RSDwas2.43%(n=6).ConclusionThere
aregreatchangesamongthedifferentoriginations.ThecontentofAnemarrhenasaponinandsarsasapogenininhebeiAnemarrhena
isthemost.
Keywords:Anemarrhena;　Sarsasapogenin;　Anemarrhenasaponin;　HPLC-ELSD
　　知母是百合科 Liliaceae植物知母 Anemarhenaasphodeloides
Bge.的干燥根茎 , 具有清热泻火 、生津润燥的功效 , 用于外感热
病 、高热烦渴 、肺热燥咳 、骨蒸潮热 、内热消渴 、肠燥便秘 [ 1]等病
证。知母的主要有效成分为知母皂苷及多糖 , 具有免疫活性 、抗
菌活性 , 有抗氧化 、抗糖尿病 、抗肿瘤作用 , 对血脂质有抑制效应 ,
有护肝 、抗肥胖效应 ,在骨吸收方面有重要的抑制效应等 [ 2] 。知
母虽为单一品种 , 但分布较广 , 各地产药材之间品质差异较大。
本文采用了比色法及高效液相色谱 -蒸发光散射检测法(HPLC
-ELSD法)比较了 3个产地知母中总皂苷及菝葜皂苷元的含
量 , 为更好地控制知母的质量提供了依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器 waters2695型高效液相色谱仪 , waters2420型蒸发光
检测器(美国 waters公司),岛津 AUY120分析天平 , RE-2000旋
转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂), HHS精密恒温水浴锅(江苏金
坛市医疗仪器厂), unicuv-2100紫外分光光度计(尤尼柯上海
仪器有限公司)。
1.2　材料 知母皂苷 A3对照品(购自中国固体制剂制造技术国
家工程研究中心 , 批号 1353-050814), 菝葜皂苷元对照品(购自
中国药品生物制品检定所 ,批号 110744 -200509), 香兰素(国药
集团化学试剂有限公司 , 批号 20050718), 甲醇(色谱纯 , 德国
Merck公司), 乙醇 、氯仿 、丙酮 、高氯酸(分析纯 ,天津大茂化学试
剂厂),不同产地的知母药材购自广州清平市场 , 经广州中医药
大学中药鉴定教研室徐鸿华教授鉴定为百合科知母。
2　方法与结果
2.1　香草醛 -高氯酸法测定各产地知母中总皂苷的含量
2.1.1　溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取知母皂苷 A3
对照品 2.90mg,置 25 ml量瓶中 , 用甲醇溶解 ,并稀释至刻度。
供试品溶液的制备:分别称取河北安国 、安徽 、广东知母粉末
(过 4号筛)各 1.00 g,加 70%乙醇 20ml水浴回流 3次 , 1 h/次 ,
滤过 , 滤液定容至 100ml。取 25 ml回收至干 , 加水 10 ml溶解 ,
用水饱和正丁醇萃取 3次 , 15 ml/次 , 回收正丁醇液 , 用甲醇定容
至 10ml。从中吸取 0.1ml水浴蒸干 ,加 5%香草醛 -冰醋酸 0.2
ml, 高氯酸 0.8 ml, 70℃水浴 15min, 取出冰浴 5min, 加 5ml冰醋
酸 , 545 nm测定吸光度。
2.1.2　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 0.5, 1, 2, 3, 4, 5 ml
水浴蒸干 ,加 5%香草醛 -冰醋酸 0.2 ml, 高氯酸 0.8ml, 70℃水
浴 15min,取出冰浴 , 加 5ml冰醋酸。于 400 ～ 800 nm波长处扫
描 , 测定最大吸收波长。于 545 nm处测定吸收度 , 以知母皂苷
A3含量为横坐标 , 以吸光度为纵坐标绘制标准曲线 , 得回归方程Y=1.337 4X+0.138 6, r=0.999 9。结果显示 , 知母皂苷 A
3
对
照品在 0.058 ～ 0.58mg范围内线性关系良好。
2.1.3　精密度实验 取浓度为 0.08 mg/ml的对照品溶液 , 重复
测定 5次 , 吸光度平均值为 0.45, RSD为 0.18%, 范围表明仪器
精密度良好。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.6 时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期
2.1.4　稳定性实验 取样品安徽知母皂苷溶液 , 分别于 0, 24, 48
h测定 , 吸光度平均值为 0.37, RSD为 0.25%, 表明本品 48 h内
具有良好的稳定性。
2.1.5　重复性实验 取同一批次的安徽药材 6份 ,按供试品溶液
制备方法制成样品测定 , 测得样品知母皂苷含量的平均值为
68.21mg, RSD为 0.45%。表明本法具有良好的重复性。
2.1.6　准确度实验 称取安徽知母粉末 0.50 g, 加入对照品 8
mg,按供试品溶液制备方法制成样品。测得平均回收率为
99.28%, RSD为 2.83%。
2.1.7　样品含量测定 取各个产地的知母药材 3份 , 精密称定
1.00 g, 按供试品溶液制备方法制成样品 , 依法测定。结果见表
1。结果表明 ,河北安国知母中皂苷含量最高 , 达 7.91%, 安徽知
母次之 , 而广东知母中皂苷含量较低 , 仅为 6.04%。
表 1　不同产地知母中总皂苷含量测定结果
产地 总皂苷含量 m/mg平均含量 m/mg 含量百分比(%)
河北安国 82.67
河北安国 75.49 79.08 7.91
河北安国 79.08
安徽 68.01
安徽 68.01 68.21 6.82
安徽 68.61
广东 58.14
广东 62.93 60.44 6.04
广东 60.24
2.2　HPLC-ELSD法测定不同产地知母药材中菝葜皂苷元的含
量
2.2.1　色谱条件 色谱柱:WatersNova-PakC18(3.9 mm ×150mm, 5 μm);柱温为室温;流动相为甲醇 -水(90∶10);流速 1.0
ml· min-1;漂移管温度 45℃,载气流速 30psi。
2.2.2　溶液的制备 对照品溶液的制备:精密称取菝葜皂苷元对
照品适量 , 加甲醇溶解制成 0.33 mg/ml的溶液。
供试品溶液的制备:分别称取安徽知母 、河北知母 、广东知母
粉末(过 4号筛)各 0.50 g,精密称定 , 加乙醇 25 ml, 水浴回流 3
次 , 40 min/次 , 滤过 ,滤液回收乙醇至干 , 加 20 ml2 mol· L-1盐
酸 , 水浴回流 5h, 放冷至室温 , 用氯仿萃取 3次 , 20 ml/次 , 合并
氯仿提取液 , 蒸干 ,残渣加甲醇溶解 , 转溶至 10 ml容量瓶中 , 并
定容至刻度。
2.2.3　线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液 5.0, 8.0, 10.0,
13.0, 15.0, 20.0μl,依次注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定 ,
以菝葜皂苷元含量的自然对数为横坐标 ,色谱峰面积的自然对数
为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 得回归方程 Y=1.639 5X+11.548, r=
0.999 7。结果表明, 菝葜皂苷元对照品在 1.65 ～ 6.6μg范围内呈
良好的线性关系。菝葜皂苷元对照品色谱图见图 1。
图 1　菝葜皂苷元对照品溶液 HPLC色谱图
2.2.4　精密度实验 精密吸取对照品溶液 5 μl, 重复进样 5次 ,
测定峰面积平均值为 235 113.40, RSD为 1.29%, 表明仪器精密
度良好。
2.2.5　稳定性实验 取广东知母溶液 , 分别于 0, 24, 48 h测定 ,
进样 10μl,结果显示 , 0, 24, 48 h测定 , 广东知母中菝葜皂苷元
的峰面积平均值 898 011, RSD为 1.63%,表明本品 48 h内具有
良好的稳定性。
图 2　知母药材溶液 HPLC色谱图
2.2.6　重复性实验 取同一批次的安徽知母 6份 , 分别独立按供
试品溶液制备方法制成样品溶液 , 在上述色谱条件下测定 , 测得
的平均含量为 4.79mg, RSD为 2.82%。表明方法重复性良好。
2.2.7　准确度实验 取本品粉末(过 4号筛)0.50 g, 精密称定一
定量的对照品 , 按供试品溶液制备方法制成样品溶液 , 精密吸取
5 μl, 在上述色谱条件下测定 6次 ,计算回收率。结果显示平均
回收率为 106.34%, RSD为 2.43%, 表明菝葜皂苷元回收率
良好。
2.2.8　样品含量测定 取各个产地的知母药材 3份 , 精密称定
0.50 g, 按供试品溶液制备的方法处理 , 在上述色谱条件下测定。
结果见表 2。结果显示 , 测得河北安国知母中菝葜皂苷元的含量
最高 , 达 0.97%,安徽知母与之相当 , 为 0.96%, 广东知母中菝葜
皂苷元含量较低为 0.72%。知母药材溶液色谱图见图 2。
表 2　不同产地知母中菝葜皂苷元含量测定结果
产地 峰面积皂苷元含量 m/mg平均含量 m/mg含量百分比(%)
河北安国 1 386 825 4.86
河北安国 1 330 438 4.74 4.85 0.97
河北安国 1 421 092 4.94
安徽 1 408 114 4.91
安徽 1 395 126 4.88 4.83 0.96
安徽 1 314 140 4.70
广东 829 394 3.55
广东 876 610 3.67 3.63 0.72
广东 872 725 3.66
3　讨论
知母根茎中含甾体皂苷约为 6%, 有知母皂苷 A1 , A2 , A3 ,A4 , B1 , B2等。本实验以知母皂苷 A3为对照 ,测得的总皂苷含量
均大于 6%, 菝葜皂苷元为知母中几种主要甾体皂苷的母核皂苷
元 , 因此可通过测定菝葜皂苷元的含量对知母药材的质量进行
控制 , 本实验中皂苷元与皂苷测定结果一致 ,均为河北知母含量
最高 , 同时论证了河北知母为道地药材。河北知母及安徽知母中
菝葜皂苷元含量均大于 0.90%, 符合《中国药典》规定知母饮片
的含量大于 0.9%的要求 , 而广东知母菝葜皂苷元含量未达到
《中国药典》要求。
根据 ELSD的检测原理 , 响应信号(散射光强度)与雾滴中
的样品浓度呈指数关系 ,即峰面积的自然对数与样品浓度的自然
对数呈线性关系 ,因此在本实验中以峰面积和样品浓度的对数值
进行线性回归得标准曲线。
ELSD检测器的操作参数有流动相的流速 、漂移管温度及气
体流速。本实验在色谱条件固定的情况下 , 选择合适的检测参
数 , 使信噪比最高。通过对 HPLC-ELSD法各方面进行考察 , 其
精密度 、稳定性 、准确度等指标均能符合要求 ,且有较高的专属性
和灵敏度 ,说明 HPLC-ELSD法可用于测定知母药材中菝葜皂
苷元的含量。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:148.
[ 2 ] 　杨丽蓉.知母化学成分及药理作用的研究进展 [ J] .国外医学· 中
医中药分册 , 2002, 24(4):207.
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.6