全 文 ：中国蜘蛛抱蛋属植物总 DN A的抽提与纯化①
苏何玲 1 ,唐绍清 2 ,李焰斌 2 ,吕建珍 2
( 1.广西师范大学生物系 ,桂林　 541004; 2.桂林市十六中学　 541002)
摘　要　简述了用 CT AB法抽提蜘蛛抱蛋总 DNA的过程 ,并对遇到的问题进行了分析和讨
论。利用玻璃珠纯化法对蜘蛛抱蛋总 DNA进行了纯化 ,从实验结果得出用 CTAB法抽提蜘蛛
抱蛋的总 DNA和用玻璃珠法纯化蜘蛛抱蛋的总 DNA是可行的。所得到的 DNA可满足进一
步对蜘蛛抱蛋进行分子研究的要求。
关键词　蜘蛛抱蛋　 CTAB法　玻璃珠纯化法
　　蜘蛛抱蛋又叫- 叶兰或苞米兰 ,百合科蜘蛛抱
蛋属植物。 高 50～ 80 cm ,其根茎的节部膨大 ,淡
褐至灰褐色 ,常常露出土面。 每个膨大部分抽生短
小的花葶伏在土面 ,靠近块根生长 ,结果后果皮油
亮 ,恰似蜘蛛卵 ,故名蜘蛛抱蛋。蜘蛛抱蛋的叶片在
根茎上单生 ,一柄一叶 ,飘柔潇洒 ,叶片长椭圆形至
椭圆状披针形 ,似宽大的兰花叶片 ,故又名一叶兰。
蜘蛛抱蛋的花期 4～ 5月 ,总花葶较短 ,自根
茎上直接抽出 ,常平伏在土面上生长。顶生 1花、
花筒钟形 ,初期为绿色 ,后期变成紫褐色 ,直径约
1. 5 cm、高 2 cm ,先端呈 8裂 ,裂片三角状卵形。 8
枚雄蕊 ,似蜘蛛的小腿。而雌蕊又胀成圆盾的样子
与蜘蛛的卵囊相似。这两者合起来神似蜘蛛抱卵 ,
这可能是蜘蛛抱蛋名字的又一个来源。
蜘蛛抱蛋叶片挺拔 ,终年翠绿 ,耐荫性、适应
性强 ,适宜庭园荫蔽地散植和室内观赏。在室内弱
光下摆设六、七十天仍能生长良好 ,是室内常用的
观叶植物 ,特别适合在人流稠密的候车室、地铁、
影剧厅及商店内陈设 ,单株摆放在几座上也相当
雅致 ,可做盆花群的背景材料 ,或成行摆放大会主
席台的桌前。蜘蛛抱蛋叶片是高级插花叶材 ,经过
人工造型 ,还可用于陪衬鲜花。
蜘蛛抱蛋属植物为多年生常绿草本观叶植
物。既耐高温、又耐寒冷 ,既耐潮湿 ,又耐干旱 ;既
耐污染、又耐阴暗。是一类很好的室内观叶植物。
1822年 J. Ker- Gwal建立了蜘蛛抱蛋属 ,目前约
有 50个种 ,其中国产的有 47种 , 1822年 J. Ker-
Gwal最先研究广东蜘蛛抱蛋 ( A. lurida Ker-
Gaw l)并发表了相关论文 , O. Stapf在 1903年发
现了小花蜘蛛抱蛋 ( A. minutif lo ra Stapf ) ; B.
Hayata (早田文藏 )在 1920年发表了台湾的薄叶
蜘蛛抱蛋 ( A. at tenua ta Hayata ) ,大武蜘蛛蛋 ( A.
daibuensis Hayata ) 和 雾 社 蜘 蛛 抱 蛋 ( A.
mushaensis Haya ta )。 随后我国的许多学者都对
蜘蛛抱蛋进行了研究。 例如在形态学方面 ,郎楷
永、祝正银、陈秀香、李光照等对蜘蛛抱蛋进行了
野外调查和深入研究 ,相继发现了 32个新种 ,使
该属的种类大大地增加了。 在细胞方面洪德元等
在 1986年对四川产的 7个种进行了核型研究 ,黄
锦岭等还对蜘蛛抱蛋进行了细胞学及孢粉学进行
了研究。但在分子生物学方面 ,尚无人报道 ,我们
利用经典的 CTAB抽提法对蜘蛛抱蛋的 35个种
进行了 DNA的抽提并利用玻璃珠法进行了纯
化 ,为进一步在分子的水平上研究该属植物提供
理论及实验准备。
1　材料和方法
1. 1　材料　从材料对蜘蛛抱蛋属的三十五个种
的 DNA进行了抽提 ,进行了研究 ,材料 (表 1)由
广西植物研究所李光照提供。
1. 2　方法　取 1～ 2 g新鲜叶片 (或 0. 1～ 0.
25 g叶干粉 )在液 N2中迅速研磨后 ,加入 1 m1
65℃的 2× CTAB和 20μl0. 5% β-琉基乙醇 ;于
65℃ 保温 2. 5 h后在离心机上 10000× g离心
10 min,吸取上清液 ,在上清中加入等体积的氯仿
/异戊醇 ( 24: 1) ,混均并离心 10000× g 10 min,
回收上清。 在回收液中加入 1 /10体积的 0. 2
mol /L醋酸钠溶液 ,再加入等体积的异丙醇 ,在冰
箱 0℃ 放置 1～ 2 h。从冰箱取出后 10000× g
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① 收稿日期: 2002- 07- 15
离心 10 min。弃上清 ,用 70% 酒精清洗两次 , 100
% 酒精清洗一次 ,用滤纸吸干 ,根据所得 DNA的
多少加 30～ 50μl的 TE,待溶解后放于冰箱 4℃
保存。用 1% 琼脂糖检测 DNA是否提取出来。
表　 1
名　　称 来　　源 名　　称 来　　源
丛生蜘蛛抱蛋 A. caespitosa 广东蜘蛛抱蛋 A. lu rida
洞生蜘蛛抱蛋 A. cavicola 啮边蜘蛛抱蛋 A. marginella
棒蕊蜘蛛抱蛋 A. claviformis 小花蜘蛛抱蛋 A. minu tif lo ra
十字蜘蛛抱蛋 A. cruciformis 糙果蜘蛛抱蛋 A. mu ricata
长药蜘蛛抱蛋 A. dolichanth era 棕叶草蜘蛛抱蛋 A. oblonceifolia
峨边蜘蛛抱蛋 A. ebian ensi s 峨嵋蜘蛛抱蛋 A. omeiensi s
带叶蜘蛛抱蛋 A. fas ciaria 柳江蜘蛛抱蛋 A. patent iloba
流苏蜘蛛抱蛋 A. fimb rata 广西蜘蛛抱蛋 A. retu sa
黄花蜘蛛抱蛋 A. f lavi fl ora 石山蜘蛛抱蛋 A. saxicola
伞柱蜘蛛抱蛋 A. fungil lif ormis 四川蜘蛛抱蛋 A. sichuanensis
海南蜘蛛抱蛋 A. hainanensis 辐花蜘蛛抱蛋 A. su brotata
乐山蜘蛛抱蛋 A. leshanensis 大花蜘蛛抱蛋 A. tonkinensis
线叶蜘蛛抱蛋 A. lineari folia 西林蜘蛛抱蛋 A. xilinensi s
隆安蜘蛛抱蛋 A. longanensis 盈江蜘蛛抱蛋 A. yingjiangensis
巨型蜘蛛抱蛋 A. longi loba 粽粑叶蜘蛛抱蛋 A. zongbayi
长梗蜘蛛抱蛋 A. longipedunculata 环江蜘蛛抱蛋 A. huanjiangensis
长瓣蜘蛛抱蛋 A. longipetala 蜘蛛抱蛋 A. elatior
罗甸蜘蛛抱蛋 A. luodianensis
为进一步利用所得的 DNA进行分子系统的研
究 ,必须对所提的 DNA进行纯化 ,对 DNA进行
纯化的方法很多 ,我们采用的是玻璃珠纯化法。
取 20μl总 DNA加入 1. 5 m l的离心管中 ,加
入 30μl的碘化钠 ,再加入 3μl的玻璃粉 ,涡旋混
合器振荡 30 s,在室温下放置 5 min。将 DNA /玻
璃珠泥合物在 5000× g离心 2 min。用 200μl洗
涤液洗涤 DNA /玻璃珠沉淀物 ,轻轻振荡离心
管 ,以重悬玻璃珠 ,然后在 2500× g下离心 2
min使玻璃珠沉淀 ,弃上清。重复上述洗涤步骤三
次。最后弃上清后干燥。加入 TE,在 50℃下温育
10 min以将 DNA从玻璃珠下洗脱下来。 10000
× g离心 10 min,将含有 DNA的上清转移到一
新管中 , 4℃ 保存备用。 用 1%的琼脂糖电泳检
测纯化后的 DNA。
2　实验结果
图 1是提取的 DNA部分琼脂糖样图。图 2
为纯化后的部分琼脂糖电泳图。
3　结果分析
从图 1可知 ,提取的 DNA样品含较多杂质 ,
图　 1
事实上我们在提取 DNA的过程中 ,确实感到所
提的 DNA含有较多的粘性物质 ,这些粘性物质
用氯仿 /异戊醇再次抽提无法去除 ,而且提取
DNA的过程中 ,加入 CT AB后 ,水浴时间较长才
产生含较多粘性物质的 DNA,否则 DNA很难出
4　　　· 试验与研究·　　　　　　　广　西　园　艺　　　 　　　　 2003年第 1期 (总第 46期 )
图　 2
来 ,水浴时间较长又致使部分 DNA降解 ,因此 ,
在琼脂糖电泳检测带中可看到较多的 DNA碎片。
在提取小花蜘蛛抱蛋与大花蜘蛛抱蛋这两个种的
DNA时 ,发现这两个种含有较多的酚类物质 ,所
提的 DNA呈褐色 ,表现为酚氧化的颜色 ,但经玻
璃珠纯化后也可去除这些杂质。
图 2的纯化结果显示 ,用玻璃珠纯化法纯化
蜘蛛抱蛋的 DNA是可行的 ,纯化后的 DNA可用
于 PCR反应 ,例如: 扩增 ITS区 ,或进行 RAPD
反应。但纯化后 ,有大量 DNA的丢失 ,在总 DNA
的量较充足或新鲜的叶片容易获得的情况下可用
此方法进行纯化 ,如果总 DNA量很少而材料珍
贵 ,不易获得 ,就应考虑用别的方法进行纯化。
参考文献
1　李光照 ,韦毅刚 .中国蜘蛛抱蛋属植物形态演化趋势
及其新分类系统 .广西植物 , 2000( 3): 201～ 217.
2　 F.奥斯伯 , R.布伦特 .精编分子生物学实验指南
地面覆盖结合化学调控对温州蜜柑产量和品质的效应①
陈世平 ,许宗得 ,陈光铭
(福建省三明市农业科学研究所 ,沙县　 365509)
　　近年来 ,随着市场竞争的加剧 ,世界柑桔生产
国把提高柑桔品质看成是进行柑桔生产的灵
魂 [6 ] ,温州蜜柑是我国加入 W TO后能够参与国
际市场竞争的优势品种之一 ,但生产过程常因夏
季高温而产生日灼果致使品质下降。为此 ,本试验
旨在探讨高温季节地面覆盖结合化学调控对温州
蜜柑产量和品质的影响。
1　材料与方法
供试品种为 7～ 8年生枳砧温州蜜柑 ,树势中
庸 ,生长结果正常。供试药剂为增果灵 [7 ] ,使用浓
度为 50 mg / kg。地面树盘覆盖物为稻草 ,覆盖厚
度 10～ 15 cm,并保持稻草距树干 10 cm左右。
试验于 1998～ 1999年在沙县际核温州蜜柑
果园进行。 1998年进行小区试验 ,设 3个处理 , 3
次重复 ,随机排列 ,每小区 3株。处理 A:树盘覆盖
稻草+ 树冠喷增果灵 ;处理 B:树冠喷增果灵 ;处
理 C:树冠喷清水 (对照 )。处理间设隔离株。覆盖
时间为 7月 12日 ～ 8月下旬 ;喷施时间第 1次 7
月 13日 ,第 2次 7月 20日 ,其它田间管理与大田
相同。
每年采收时测定各处理单株产量计算增产百
分率 ,单果重、固形物、总糖、总酸。同时统计日灼
果率。
2　结果与分析
2. 1　不同处理对温州蜜柑果实及产量的影响
1988年试验结果 (表 1)。处理 A、 B的平均株
产与 CK比较均达显著水平 ,处理 A的增产效果
最佳 ,达 15. 0% 。 1999年试验结果显示处理 A的
平均株产为 41. 2 kg , CK的平均株产为 34. 7 kg,
处理 A比 CK增产 18. 7%。 试验表明处理 A对
温州蜜柑的增产效果具有稳定性。
2. 2　不同处理对温州蜜柑日灼果的影响
从表 2可见 , 1998年试验 ,处理 A的日灼果
率比 CK降低 4% ,比处理 B降低 2. 6% ,差异均
达显著水平。 1999年试验 ,处理 A的日灼果率为
8. 3% , CK为 11. 7% ,处理 A比 CK降低 3. 4
% 。2年试验结果均表明 ,处理 A对减轻日灼有明
显作用。
52003年第 1期 (总第 46期 )　　 　　　　广　西　园　艺　　　　　　　　· 试验与研究· 　　　
① 收稿日期: 2002- 01- 07