全 文 ：China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 40 中国药房 2011年第22卷第40期
知柏地黄丸是一种常用中成药，由知母、黄柏、熟地黄等
几味药组成，具有滋阴、降火的功效，用于阴虚火旺、潮热盗
汗、口干咽痛、耳鸣遗精、小便短赤[1]。为有效、准确的控制知
柏地黄丸的质量，笔者以知母皂苷的水解产物菝葜皂苷元为
检测指标[2]，通过方法学研究，建立了知柏地黄丸中菝葜皂苷
元的含量测定方法。
1 仪器与试药
Aglient 1200型高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵高
效液相色谱仪、G1322A真空脱气机、G1329A自动进样器、
G1316A柱温箱、Varian 380-LC蒸发光散射检测器、Aglient色
谱工作站（美国安捷伦科技有限公司）。
菝葜皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号：
0744-200005）；知柏地黄丸（市售，批号：091208、100308、
20090501）；甲醇为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析
纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Aglient C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 µm）；流
动相：甲醇-水（95 ∶ 5）；检测器：蒸发光散射检测器；流速：
1 mL·min－1；进样量：20 µL；柱温：25℃。理论板数按菝葜皂
苷元峰计算应不低于4 000[3]。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取菝葜皂苷元对照品适
量，加甲醇制成每1.0 mL含0.2 mg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 称取本品1 g，精密称定，置于具塞
锥形瓶中，精密加入乙醇20 mL，称定重量，浸泡过夜。超声处
理（功率 250 W，频率 30 kHz）40 min，放冷，再称定重量，用乙
醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液 10 mL，蒸
干，加水 10 mL，盐酸 1 mL，加热回流 2 h，取出，冷至 25℃，边
振摇边滴加 40％氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄突变为橙
红。用三氯甲烷振摇提取2次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，
蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，稀释至刻度，
摇匀，用0.45 µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取不含知母的处方药味，按知
柏地黄丸的制备工艺，制成阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制
备阴性对照溶液。
HPLC法测定知柏地黄丸中菝葜皂苷元的含量
陈骁勇＊（江苏盐城市第一人民医院，盐城市 224001）
中图分类号 R917 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）40-3826-02
摘 要 目的：建立测定知柏地黄丸中菝葜皂苷元含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Aglient C18柱，流动相为甲
醇-水（95 ∶ 5），检测器为蒸发光散射检测器，流速为 1.0 mL·min－1，进样量为 20 µL，柱温为 25℃。结果：菝葜皂苷元进样量在
0.44～4.35 µg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.999 7）；平均回收率为98.63％、98.93％、98.93％，RSD＝1.30％。结
论：本法简便快捷，结果准确，重复性好，可用于知柏地黄丸的质量控制。
关键词 知柏地黄丸；菝葜皂苷元；高效液相色谱法；含量测定
Content Determination of Sarsasapogenin in Zhibai Dihuang Pills by HPLC
CHEN Xiao-yong（Yancheng First People’s Hospital of Jiangsu Province，Yancheng 224001，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of sarsasapogenin in Zhibai dihuang pills.
METHODS：HPLC method was adopted. The chromatographic separation was performed on Aglient C18 column with mobile phase
consisted of methanol-water（95 ∶ 5）using evaporative light-scattering detector（ELSD）at flow rate of 1.0 mL·min－1. The injection
volume was 20 µL and column temperature was 25 ℃ . RESULTS：The linear range for sarsasapogenin was 0.44～4.35 µg（r＝
0.999 7）with an average recovery of 98.63％、98.93％、98.93％（RSD＝1.30％）. CONCLUSION：The method is simple and accu-
rate with a good reproducibility for the quality control of Zhibai dihuang pills.
KEY WORDS Zhibai dihuang pill；Sarsasapogenin；HPLC；Content determination
＊主管药师，本科。研究方向：医院药学。电话：0515-88508702
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年版.北京：化学工业出版社，2005：328.
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（收稿日期：2011-06-07 修回日期：2011-08-17）
􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟􀥟
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中国药房 2011年第22卷第40期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 40
2.3 线性关系考察
精密量取浓度为0.217 3 mg·mL－1的菝葜皂苷元对照品溶
液适量，分别精密吸取2、3、5、10、20 µL，按照“2.1”项下方法进
样。以峰面积积分值（Y）的自然对数为纵坐标，以进样量的自
然对数（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程 Y＝1.639 5
X +11.548（r＝0.999 7）。结果表明，菝葜皂苷元进样量在
0.44～4.35 µg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4 专属性试验
取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各 20 µL，按
“2.1”项下色谱条件进样。结果，阴性对照溶液在与菝葜皂苷
元对照品相同保留时间处未见色谱峰，故认为阴性对照无干
扰。色谱见图1。
2.5 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液，连续进样 6次，每次进样 20
µL。结果，RSD＝0.78％，表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液适量，于0、2、4、8、12、24 h分别
测定峰面积。结果，RSD＝1.7％，表明供试品溶液在24 h内稳
定。
2.7 重复性试验
取同一批号样品适量，共6份，按“2.2.2”项下方法制备，照
“2.1”项下色谱条件测定。结果，菝葜皂苷元平均含量为0.296
mg·g－1，RSD＝1.2％，表明该法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的同一批号（批号：20090501，含量：0.296
mg·g－1）供试品约0.8、1.0、1.2 g，各3份，精密称定，分别精密加
入“2.2.1”项下的菝葜皂苷元对照品溶液 0.8、1.0、1.2 mL，按
“2.2.2”项下方法制备，照“2.1”项下色谱条件测定，计算加样回
收率，结果见表1。
2.9 样品含量测定
取 3个批号的知柏地黄丸适量，按“2.2.2”项下方法制备，
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 µL，注入液相色
谱仪，照“2.1”项下色谱条件测定，按外标法计算含量，结果见
表2。
表2 样品含量测定结果（n＝3）
Tab 2 Results of content determination for samples（n＝3）
批号
091208
100308
20090501
含量/mg·g－1
0.197
0.296
0.247
RSD/％
1.1
0.8
1.5
3 讨论
知柏地黄丸是一种常用中成药，是由补阴经典代表方剂
六味地黄丸（熟地黄、山萸肉、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓）加知
母、黄柏而成，加强了滋肾阴、清相火的作用。近年来经中医
辩证后灵活使用，对慢性咽炎、急性尿路感染等几种疾病也有
较好疗效。
知柏地黄丸最主要成分为知母，而知母有效成分为多种
甾体皂苷，其皂苷主要为菝葜皂苷元。知母根茎中含甾体皂
苷约为 6％，有知母皂苷A1、A2、A3、A4、B1、B2等。菝葜皂苷元
为知母中几种主要甾体皂苷的母核皂苷元[4]，因此可通过测定
菝葜皂苷元的含量对知母药材的质量进行控制，进而有效、准
确地控制知柏地黄丸的质量。
综上所述，本法操作简便，结果准确，重复性好，加样回收
率高，可用于知柏地黄丸的质量控制。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010
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散射检测法测定酸枣仁浓缩丸中菝葜皂苷元的含量[J].
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2005，25（8）：952.
（收稿日期：2011-04-13 修回日期：2011-05-17）
图1 高效液相色谱图
A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性对照溶液
Fig 1 HPLC chromatograms
A. reference solution；B. test solution；C. negative control solution
0 2.5 5 7.5 10 12.5 t/min
C
0 2.5 5 7.5 10 12.5 t/min
A
0 2.5 5 7.5 10 12.5 t/min
B
表1 加样回收率试验结果（n＝9）
Tab 1 Results of recorery tests（n＝9）
样品含量
/mg
0.237
0.237
0.237
0.296
0.296
0.296
0.355
0.355
0.355
加入量
/mg
0.173 8
0.173 8
0.173 8
0.217 3
0.217 3
0.217 3
0.260 8
0.260 8
0.260 8
实测值
/mg
0.409 1
0.406 5
0.409 8
0.509 4
0.510 9
0.512 6
0.618 7
0.607 5
0.612 9
回收率
/％
99.0
97.5
99.4
98.2
98.9
99.7
101.1
96.8
98.9
平均回收率
/％
98.63
98.93
98.93
RSD
/％
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