全 文 ：2　方法与结果
2.1　头孢呋辛标准液配制　精密称取头孢呋辛标准品 50 mg ,
置 25 mL容量瓶中 ,用超纯水溶解 , 并定容 ,配制成浓度为 2000
mg/ L的标准贮备液。
2.2　内标液的配制　精密称取咖啡因对照品 10 mg , 置 50 mL
容量瓶中 ,用超纯水溶解 , 并定容 , 即配制成浓度为 200 mg/ L
的内标贮备液。
2.3　色谱条件　色谱柱 , μBondapak C18(300 mm×4.0 mm);
流动相 , V(乙酸盐缓冲液 , pH5.5)∶V(乙腈)=75∶25;内标 , 咖
啡因;检测波长 , 272 nm;柱温 , 室温;流速 , 1.5 mL/ min。 色谱
图见图 1 , 头孢呋辛和内标的保留时间分别为 2.37 min、2.84
min , 其分离达到基线分离。
图 1　对照品与空白血清的 HPLC 色谱图
A 空白血清　B 头孢呋辛　1 头孢呋辛　2 内标
2.4　样品处理　取健康人空白血清 0.20 m L , 加浓度为 200
mg/L 的内标贮备液 10μL , 混匀 ,加入头孢呋辛标准贮备液 , 使
其浓度为 10 mg/ L , 再加入 12.5%三氯乙酸 0.10 mL ,旋涡混合
30 s ,再经高速离心 5 min , 取上清液 20 μL 进样 , 进行色谱分
析。
2.5　标准曲线的制备　分别精密量取头孢呋辛标准贮备液
0.05、0.25 、0.5 、1.0 、2.0、3.0、4.0 mL置 10 mL容量瓶中 ,各加
超纯水稀释至刻度 ,摇匀 , 精密量取 10 μL , 各加入健康人空白
血清 0.20 m L ,再加入浓度为 200 mg/ L 的内标贮备液 10 μL ,
混匀 ,加入 12.5%三氯乙酸 0.10 mL , 按样品处理方法进行处
理 ,即配成头孢呋辛浓度为 0.5 、2.5、5 、10、20、30 、40 mg/ L , 内
标浓度为 10 mg/ L的标准系列溶液。取上清液 20 μL 进样 , 以
浓度 C 对样品与内标峰面积比进行线性回归 ,方程为:
C=6.295R +0.0641 , r=9.9997(n =7)
线性范围为 0.5～ 40 mg/ L , 最低检测浓度为 0.1 mg/ L。
2.6　回收率试验　精密吸取头孢呋辛标准贮备液各 0.25 、
2.0 、4.0 mL置 10 mL容量瓶中 , 加超纯水稀释至刻度 ,各精密
量取 10 μL ,按标准曲线项下方法操作 ,根据回归方程计算回收
率。结果 3 种浓度回收率分别为 97.2%、99.8%、99.0%, 平均
回收率为 98.7%±1.3%。
2.7　精密度试验　按标准曲线项下方法配制浓度为 20 mg/ L
的标准血清溶液 , 重复进样 5 次 , 经计算 , 结果其 RSD=1.1%
(n =5)。
2.8　重现性试验　取 20 mg/ L的标准血清溶液 ,每次进样 20
μL , 日内测定时间为 1、2、4 、8 、12 、16 h;日间为每天测定 1 次 ,
连续 5 d。结果其日内 RSD 为 2.4%(n=6);日间 RSD 为 2.
9%(n=5)。
2.9　样品测定　取使用头孢呋辛病人血清 0.20 mL , 加入浓度
为 200 mg/ L的内标贮备液 10 μL ,混匀 ,按样品处理方法进行
处理 , 取上清液 20 μL进样。根据回归方程计算浓度。结果见
表 1。
表 1　样品测定结果
样品 1 2 3 4 5 6
ρ/mg·L-1 14.89 11.03 3.462 4.223 3.146 6.589
3　讨论
3.1　本文所采用的色谱条件 , 头孢呋辛及内标保留时间均较
短 ,且分离良好 , 峰形窄 , 对称性好 , 大大缩短了测定时间。 采
用 12.5%三氯乙酸作为沉淀剂 , 与血清比例为 1∶2 , 蛋白沉淀程
度达到本色谱测定要求 , 药物检出灵敏度较高。经沉淀蛋白后
直接进样 ,避免了有机溶剂萃取 、转移 、吹干等繁琐操作 , 进样
后 5 min 内完成测定 ,适应于快速检测。
3.2　本文采用 RP-HPLC 测定血清中头孢呋辛的浓度 , 用咖啡
因作内标 ,方法简便 、快捷 , 在相同色谱条件下 , 临床常用的药
物如头孢唑啉 、阿奇霉素 、头孢氨苄 、头孢曲松等均不干扰头孢
呋辛的测定。其它可能干扰物质如马来酸氯苯那敏 、尿酸 、肌
肝等[ 3]的出峰时间远离头孢呋辛和内标 ,在本测定系统中均无
干扰。
3.3　在该色谱上 ,茶碱也有吸收峰出现 ,与头孢呋辛及内标峰完
全分离(保留时间为 3.86 min),不干扰头孢呋辛的测定 , 故该色
谱系统可同时检测茶碱的血药浓度。特别适合用于检测用头孢
呋辛及茶碱呼吸道感染的哮喘患者 ,同时监测两药的浓度。
参考文献
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cefuro xime, cephalexin and cephalo ridine in phasma using
HPLC and a columnsw itching technique chromatographia[ J] .J
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研究[ J] .中国临床药理学杂志 , 1998 , 14(4):212.
[ 3] 吴莱文.治疗药物监测[ M ] .北京:人民卫生出版社 , 1989.
308.
(收稿日期:2000-10-08)
TLC法测定仙岛颗粒中菝葜皂苷元的含量
陈世斌　杨瑞文 (广州潘高寿药业股份有限公司 ,广东广州 510030)
摘　要　采用薄层色谱法测定仙岛颗粒中菝葜皂苷元的含量 , 扫描波长 440 nm , 回归方程 Y =36312.25X +1609.55 , r=0.9989 ,
回收率 97.83%。
关键词　仙岛颗粒;菝葜皂苷元;薄层色谱扫描法
中图号　R 927.2　文章编号:1006-8783(2001)01-0045-01　文献标识码:A
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第 17卷第 1 期 广　东　药　学　院　学　报 Vol.17 No.1
2001 年 3 月 ACADEM IC JOURNAL OF GUANGDONG COLLEGE OF PHARMACY Mar.2001
　　仙岛颗粒为我厂研制的三类新药 , 具有清热养阴 、生津止
渴 、降糖之功效 , 用于治疗消渴症。本方含有石膏 、知母 、山茱
萸等多味药 , 知母为方中之君药 , 据文献报道[ 1 , 2] , 通过测定知
母皂苷的水解产物菝葜皂苷元的含量可以控制该药质量。本
法操作简便 、易行 , 适合工厂实际情况 ,现报告如下。
1　仪器与试药
日本岛津 CS-9000 双波长飞点薄层扫描仪 , 定量点样毛细
管(Drummond USA)。硅胶 H(青岛海洋化工集团公司 , 薄层层
析用),菝葜皂苷元对照品(中国药品生物制品检定所),其余所
用试剂均为分析纯 , 仙岛颗粒(本厂产品开发部研制 , 批号
960101)。
2　实验条件
2.1　对照品溶液的制备　精密称取干燥至恒重的菝葜皂苷元
对照品 , 加氯仿制成每 1 mL 含 0.5 mg 的溶液 , 作为对照品溶
液。
2.2　供试品溶液的制备　取本品 8 g ,精密称定 , 加水 90 mL
微热使完全溶解 ,加盐酸 10 m L ,摇匀 ,置沸水浴中水解 3 h , 放
冷 ,定量移入分液漏斗中 , 用氯仿振摇提取 4 次(50、40、30、30
m L), 合并氯仿液 ,用 2%氢氧化钠溶液 30 m L 洗涤 1 次 , 静置
分层 , 弃去碱水层 , 氯仿液用蒸馏水 100 mL 充分振摇洗涤 1
次 ,弃去水液 ,氯仿液水浴蒸干 , 残渣用氯仿溶解 , 转溶至 2 mL
容量瓶中 ,稀释至刻度 , 作为供试品溶液。
2.3　薄层板的制备　称取硅胶 H 加 0.3%羧甲基纤维素钠溶
液制成糊状 ,研磨 , 用涂铺器制成 20 cm×10 cm , 厚度:500 μm ,
105 ℃活化 1 h , 置干燥器内备用。
2.4　TLC 分析条件　展开剂:①V(正己烷)∶V(乙酸乙酯)=4
∶1 , 展距 7 cm;② V(苯)∶V(氯仿)=1∶1 , 展距 8 cm。显色
剂[ 1] :①取水 25 mL , 缓慢加浓硫酸 50 m L , 放冷后 , 再加乙醇
25 m L ,摇匀;②8%香草醛无水乙醇溶液。临用时将①②两液
按5∶1 混合。喷显色剂后 , 在70 ℃加热至斑显色清晰。扫描条
件:扫描波长 440 nm , 单波长反射法锯齿扫描 , SX=3。
3　方法与结果
3.1　标准曲线制备　精密吸取配制好的对照品溶液 1、2、3、4 、
5 、6 μL分别点于同一硅胶薄层板上 , 依法展开测定 , 以对照品
浓度为横座标 ,斑点面积积分值为纵座标 ,绘制标准曲线 , 回归
方程为 Y =36312.25X +1609.55 , r=0.9989 , 结果表明菝葜
皂苷元的质量在 0.515 ～ 3.090 μg/μL 范围内与面积积分值成
良好线性关系。
3.2　稳定性考察　取供试品溶液 4 m L ,点样展开 , 显色后立即
进行扫描测定 , 然后每隔 30 min 扫描 1 次 , 持续 3 h , 峰面积积
分值为 44782.5 、 44170.6 、 42813.7 、 41709.5 、 40632.6 、
39837.7 、39177.6 ,显示 1 h 内斑点显色稳定 , RSD 为 2.29%。
3.3　精密度试验　精密吸取供试品溶液 4μL , 分别点于同一薄
层板上 ,依法展开 , 测定峰面积积分值 , 得 RSD =1.45%, n =
6 , 结果显示精密度良好。
3.4　重现性试验　取同批样品(批号 960101)进行多次测定 ,
测得样品含量平均值为 0.1182 mg/g , RSD =1.54%, n =6 , 结
果显示重现性良好。
3.5　回收率试验　精密称取已知含量的同批样品 , 分别加入
一定量的菝葜皂苷元对照品 ,“供试品溶液的制备”方法制得回
收率试验液 ,按“样品含量测定”方法点样计算结果 , 得平均回
收率为 97.83%, RSD=2.37%,见表 1。
表 1　回收率试验结果(n =6)
m(加入量)/ mg m(测得量)/mg 回收率/ %
0.468 0.458 97.86
0.468 0.465 99.36
0.468 0.455 97.22
0.468 0.475 101.50
0.468 0.447 95.51
0.468 0.447 95.51
3.6　样品含量测定　精密吸取供试品溶液 4μL , 对照品溶液
2μL与 6μL , 分别点于同一薄层板上 , 依法展开 , 晾干 , 喷显色
剂 ,在 70 ℃加热至斑点显色清晰 , 取出 , 在薄层板上覆盖同样
大小的玻璃板 , 扫描测定斑点面积积分值 ,计算 , 即得。阴性对
照品无干扰 , 展开图谱无干扰 , 见图 1。 3 批样品的含量测定结
果见表 2。
4　讨论
4.1　本法采用颗粒用水溶解后 , 直接水解 , 免了皂苷提取步
骤 ,节约检验时间。另外 ,利用菝葜皂苷元为中性皂苷这一性
质[ 2] ,采用碱水洗涤除杂 , 所得薄层图谱清晰 ,背景干扰少。
表 2　样品测定结果(mg/g , n=3)
样品批号 ω(菝葜皂苷元) RSD/ %
980401 0.06459 1.96
980402 0.05600 1.31
980403 0.04680 2.21
图 1　知母薄层色谱图
1～ 4 供试品　5～ 8 阴性对照品
9～ 12 菝葜皂苷元对照品
4.2　由于处方中多味药均含有皂苷类成分 , 干扰大 , 曾参照药
典所载知母药材下展开剂[ 1] , 及其他一些展开系统 , 并使用了
高效预制板 , 分离效果均不理想 , 选用本文所述展开剂 , 分离效
果好 , 斑点集中 ,利于扫描测定。
参考文献
[ 1] 中国药典(一九九五年一部)[ S] .1995.184.
[ 2]江苏新医学院编.中药大辞典[ M] .上海:上海科学技术出版
社 , 1986.1366.
[ 3] 肖崇厚.中药化学[ M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1987.
286.
(收稿日期:2000-10-08)
46
广东药学院学报(ACAD J GCP)　2001 , 17(1)