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第 1 4 卷 第 2 期
2012 年 2 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 14 No. 2
Feb .，2012
菝葜皂苷元对结肠癌细胞 Lovo 黏附和侵袭能力的影响
凌博凡，王瑞平，邹玺
（南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210046）
摘 要 ：目的 ：本研究旨在探讨菝葜皂苷元体外对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附、侵袭的影响。方法 ：采用
MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验，观察菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附和侵袭能力的影响。
结果 ：①菝葜皂苷元有抑制人结肠癌细胞Lovo增殖的作用，与对照组比较，随着药物浓度的增大，其对细胞的抑制
率也明显增大（P<0.01）。②菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo后，细胞的黏附能力明显降低（P<0.01）。③菝葜皂
苷元作用人结肠癌细胞Lovo 24h后，侵袭的细胞数较对照组明显减少（P<0.01）。结论 ：菝葜皂苷元对人结肠癌细
胞Lovo的增殖具有抑制作用 ；菝葜皂苷元能抑制人结肠癌细胞Lovo的黏附能力和侵袭能力。
关键词 ：菝葜皂苷元 ；结肠癌细胞Lovo ；细胞增殖 ；细胞黏附 ；细胞侵袭
中图分类号 ：R735.35 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-842X (2012) 01- 0090- 03
收稿日期 ：2011-07-14
基金项目 ：江苏省中医药领军人才资助项目（LJ200908）；江苏省高校优势学科建设工程资助项目
作者简介 ：凌博凡（1986-），男，江苏南京人，硕士研究生，研究方向 ：肿瘤内科的中西医治疗。
通讯作者 ：王瑞平（1961-），女，江苏南通人，教授、主任医师，博士，研究方向 ：肿瘤内科的中西医治疗。
Effect of Sarsasapogenin on the Adhesion and Invasion Capabilities of Human Colon Cell Line Lovo
LING Bo-fan，WANG Rui-ping，ZOU Xi
（Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China）
Abstract ：Objective ：This study was designed to explore ：The effect of sarsasapogenin on the biological
behaviors including proliferation，adhesion and invasion capabilities of human colon cell line Lovo in vitro.
Method ：After human colon cell line Lovo was treated with sarsasapogenin at different concentrations，cell
proliferation and adhesion capabilities was assessed using MTT assay. The invasion capabilities of Lovo
cells were determined using transwell method（Boyden chamber），respectively. Results ：①Sarsasapogenin
significantly inhibited the proliferation of Lovo cells（P<0.01）.② Sarsasapogenin significantly decreased
the adhesion capability of Lovo cells（P<0.01）.③Sarsasapogenin significantly decreased the invasion
capability of Lovo cells（P<0.01）. Conclusion ：Sarsasapogenin inhibited the proliferation of human colon
cell line Lovo.Sarsasapogenin supressed the adhesion and invasion capability of Lovo cells.
Key words ：sarsasapogenin ；human colon cell line Lovo ；cell proliferation ；cell adhesion ；cell
invasion
知 母 为 百 合 科 植 物 知 母（Anemarrhena
asphodeloides Bunge）的 根 茎，始 载 于《神 农 本 草
经》，性苦寒，具有滋阴降火、润肠滑燥、止渴除烦、
利大小便等作用，是中医传统药物。菝葜皂苷元
（sarsasapogenin），是一种甾体皂苷，是知母的次生代
谢产物，是知母中一种主要活性成分。近年来对知
母中甾体皂苷的研究成为热点，其研究集中在改善
老年性痴呆、降糖、解热等方面 [1-5]。本实验观察了
不同浓度菝葜皂苷元对体外培养的结肠癌细胞株
Lovo 的生物学行为，包括增殖、黏附、侵袭的影响，旨
在探讨其可否成为一种治疗结肠癌的抗癌植物药。
1 材料与方法
1.1 实验材料
菝葜皂苷元购自上海亿欣生物科技公司，用乙
醇溶解按需要配成所需浓度 ；DMEM 培养液购自
Gibco 公司 ；小牛血清购自杭州四季青公司 ；MTT、
DMSO 和 胰 蛋 白 酶 购 自 Biosharp 公 司 ；8μm 微 孔
聚 碳 酸 酯 膜 的 Transwell 细 胞 培 养 小 室 购 自 美 国
Millipore 公司 ；Matrigel、FN 胶购自美国 BD 公司 ；人
结肠癌细胞株 Lovo 购自南京凯基生物公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞及细胞培养
人结肠癌株 Lovo 用含 10% 小牛血清的 DMEM
培养液常规培养 ；以 0.25% 胰蛋白酶消化，按实验所
需细胞密度接种。
1.2.2 MTT法检测菝葜皂苷元对Lovo细胞增殖的
影响
取对数生长期细胞接种于 96 孔板中，5×103/
孔，培养 24h 后，实验组加入含不同浓度菝葜皂苷
元（100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、
6.25μg/mL）的 DMEM 培 养 液，共 设 5 组，每 组 6 个
附 孔 ；对 照 组 加 入 无 药 物 的 DMEM 培 养 液，继 续
培 养 48h 后，倾 倒 培 养 液，PBS 洗 2 次，每 孔 加 入
100μLDMEM 培 养 液 +20μL MTT 溶 液，继 续 培 养
4h。倒掉上清，每孔加入 150μL DMSO，置摇床上
低速振荡 10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2012.02.92.lingbf.094
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检测仪 490nm 处测量各孔的吸光值。计算抑制率＝
（1- 实验组值 / 空白对照组值）×100%，重复 3 次。
1.2.3 MTT法检测菝葜皂苷元对Lovo细胞黏附能
力的影响
用 70μg/mL 的 FN 包 被 96 孔 板，每 孔 30μL，
超净台风干，4℃备用。重悬细胞至浓度约为 1×
106 个 /mL，接 种 于 96 孔 板，1×105 个 / 孔，待 细 胞
贴壁后，加入含不同浓度菝葜皂苷元（50μg/mL、
25μg/mL、12.5μg/mL）的 DMEM 培养液，每种浓度
设 3 个附孔。对照组加入无药物的 DMEM 培养液，
常 规 培 养 30、60、90、120min，吸 出 培 养 液，用 灭 菌
PBS 小心清洗每孔 2 次，洗去未黏附细胞，每孔加入
100μL 10% 小牛血清 DMEM+MTT 20μL，继续培养
4h，弃去全部上清，每孔加入 150μL DMSO，振荡器
振荡 10min，使结晶完全溶解，在酶联仪波长 490nm
处测出各孔吸光度值（OD），以 OD 值代表黏附细胞
数，按下列公式计算细胞黏附抑制率 ：抑制率＝（1-
药值 / 空白值）×100%。
1.2.4 菝葜皂苷元对Lovo细胞侵袭能力的影响
使用 Transwell 小室用于检测细胞的侵袭能力，
其杯孔直径为 6.5mm，杯底由聚碳酸脂微孔滤膜封
闭（微孔孔径为 8μm）。在滤膜上覆盖 Matrigel 胶
（100μg/mL）50μL，超净台风干备用，使用前加入
少量无血清培养液水化 30min。取对数生长期细
胞，用无血清 DMEM 培养基培养 24h 后，吸出培养
基离心 10min，取上清，滤膜过滤除菌后作为条件培
养液（趋化因子）。将细胞消化调整细胞密度为2×
107 个/mL，按 试 验 所 需 浓 度（50μg/mL、25μg/mL、
12.5μg/mL），每组3个小室，将细胞加入Transwell上
室，每个小室2×106 个，100μL。下室加入300μL 含
10% 小牛血清的 DMEM 培养液 +300μL 趋化因子。
细胞培养 24h 后，用 PBS 清洗，棉签轻轻去掉上室细
胞及 Matrigel 胶。取下微孔滤膜，将附着于滤膜背面
的细胞用 0.1% 结晶紫染色，并在光学显微镜（×400
倍）下计数细胞，随机计数 5 个视野的穿膜细胞平均
数。按以下公式计算细胞的侵袭抑制率 ：细胞侵袭
抑制率 =（1- 含药血清组侵袭细胞数 / 空白组侵袭
细胞数）×100%。
1.3 统计学处理
所有数据采用 SPSS 13.0 统计软件分析，以均
数 ± 标准差（x—±s）表示，各组之间比较采用t 检验。
2 结 果
2.1 菝葜皂苷元对Lovo细胞增殖的影响
结 果 表 明 ：不 同 浓 度（3.125~50μg/mL）的 菝
葜皂苷元作用 Lovo 细胞 48h，与对照组比较，随着
药物浓度的增大，其对细胞的抑制率也明显增大
（P<0.01）。结果见表 1。
表 1 菝葜皂苷元对 Lovo 细胞增殖的影响
组别 浓度（μg/mL） OD 值（x—±s） 48h 抑制率（%）
实验组
50 0.313±0.081 78.16*
25 0.621±0.213 55.26*
12.5 0.853±0.172 32.12*
6.25 1.256±0.134 19.8
3.125 1.345±0.146 17.8
对照组 0 1.667±0.245 0
注 ：和对照组相比，*P<0.01。
2.2 菝葜皂苷元对Lovo细胞黏附力的影响
结果表明 ：50μg/mL 和 25μg/mL 浓度的菝葜皂
苷元作用 Lovo 细胞 30、60、90、120min 后，实验组各
时间点的细胞黏附率均明显低于空白组，且作用时
间越长，其对细胞黏附能力的抑制作用越强。结果
见表 2。
表 2 MTT 法检测菝葜皂苷元对 Lovo 细胞黏附能力影响的 OD 值（x—±s）
组别 浓度（μg/mL） 120min 90min 60min 30min
实验组
50 0.134±0.010* 0.239±0.021* 0.371±0.031* 0.574±0.031*
25 0.525±0.072* 0.630±0.068 0.682±0.029* 0.600±0.051*
25 0.700±0.422* 0.768±0.088 0.772±0.009▲ 0.596±0.019*
对照组 0 0.833±0.081 0.766±0.027 0.864±0.010 0.793±0.013
注 ：和对照组相比，*P<0.01，▲P<0.05。
2.3 菝葜皂苷元对Lovo细胞侵袭力的影响
50μg/mL 和 25μg/mL 浓度的菝葜皂苷元作用
Lovo 细胞 24h 后各浓度侵袭细胞数均明显低于对照
组（P<0.01），3 种浓度对 Lovo 细胞的侵袭抑制率分
别为 35%、26%、10%。对照组细胞轮廓清晰、活力
旺盛，实验组组细胞变圆、稀疏。结果见表 3，图 1。
表 3 菝葜皂苷元对 Lovo 细胞侵袭的影响
组别 浓度（μg/mL）视野 1 视野 2 视野 3 视野 4 视野 5
实验组
50* 188 148 150 161 157
25* 189 184 175 195 175
12.5 207 287 253 187 191
对照组 0 256 206 270 243 271
注 ：和对照组相比，*P<0.01。
A B
C D
A. 对照组，B.50μg/mL，C.25μg/mL，D.12.5μg/mL。
图 1 菝葜皂苷元对 Lovo 细胞侵袭的影响
3 讨 论
结肠癌是一种常见的消化道肿瘤，根据世界卫
生组织国际癌症研究机构（international agency for
research on cancer，IARC）公布的资料 ：2002 年全球
结直肠癌新病例占全部癌症的 9.4%，发病率排位男
性居第 4 位，女性居第 3 位 ；现有的结直肠癌患者数
量估计有 280 万 [6]。近年来，虽然在结肠癌的诊断和
治疗方法上有明显提高，但 5 年生存率仍不足 60%，
其中有远处转移灶的患者 5 年生存率仅为 10% 左
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右，可见结肠癌的侵袭转移是影响病人生存和预后
的主要因素 [7]。近年来人们在研究天然药物抗肿
瘤活性时发现菝葜皂苷元具有抗癌作用 ：Bao 等 [8]
和 Ni 等 [9] 发现，菝葜皂苷元能够诱导人肝癌细胞
HepG2 凋亡，作用机制在于菝葜皂苷元会阻碍细胞
二次分裂，中断细胞生长周期。上述作用只针对肿
瘤细胞，而对正常细胞并无影响。也有学者证实其
也可诱导胃癌细胞 BGC-823 的凋亡 [10]。侵袭和转
移是恶性肿瘤的主要生物学特征 [11]，肿瘤侵袭转移
是多因素参与、多步骤完成的生物学过程，肿瘤细胞
从原发灶脱落后侵入周围血管或淋巴管，到达远处
器官后形成转移灶。肿瘤细胞在受到微环境中多种
细胞因子刺激作用下，细胞迁移运动能力增强，有利
于肿瘤细胞侵入周围组织发生侵袭转移。肿瘤细胞
在远处转移的过程中，与基质间作用力的大小可以
影响运动能力，因此黏附能力的变化是检测细胞转
移潜能的另一个重要指标。黏附能力增强表明细胞
向远处运动的能力强。本研究在体外模拟了肿瘤
细胞黏附、侵袭的过程，结果显示，不同浓度菝葜皂
苷元处理 Lovo 细胞后，无论是黏附细胞数还是侵袭
穿膜细胞率，均显著低于对照组，差别有显著意义
（P<0.01），表明菝葜皂苷元能明显抑制 Lovo 细胞的
黏附能力，并降低肿瘤细胞降解穿透基底膜的侵袭
力。其作用机制我们将做进一步研究。◆
参考文献
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2004，27 ( 6 ) ：577-582.
肺癌病理因素探讨
李英英，贾晓玮，郭立中
（南京中医药大学周仲瑛工作室，江苏 南京 210046）
摘 要 ：近年来，癌症发病率越来越高，肺癌已成为严重威胁人类健康的肺部常见恶性肿瘤，中医门诊肺癌患
者也日益增多，其辨证施治有待发展创新。现笔者随首届国医大师周仲瑛教授门诊，有幸聆听教诲，周仲瑛教授经
过长期的临床实践经验，认为肺癌有五大主要病理因素，即痰、瘀、毒、虚、郁，作者在此做一简单阐述，供同道临床借
鉴。
关键词 ：周仲瑛 ；肺癌 ；病理因素 ；探讨
中图分类号 ：R734.2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-842X (2012) 02- 0092- 02
收稿日期 ：2011-07-08
基金项目 ：江苏省科技支撑计划（社会发展）项目（BE2009614）
作者简介 ：李英英（1986-），女，陕西铜川人，2009 级硕士研究生，研究方向 ：中西医结合肾脏病。
通讯作者 ：郭立中（1962-），男，江苏南京人，教授、主任医师，博士研究生导师，研究方向 ：名老中医经验传承。E-mail ：lzg1073@sina.com。
Exploration on Pathological Factors of Lung Cancer
LI Ying-ying，JIA Xiao-wei，GUO Li-zhong
（Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China）
Abstract ：In recent years，the morbidity of cancers becomes higher and higher. Lung cancer has become
the commonly-encountered malignant cancer in the lung that seriously threatens human health. Patients in
TCM outpatients also increase day by day. Therefore，syndrome differentiation on treatment of lung cancer
needs to be further developed and innovated. The author is very fortunate to be taught in the process of
following the first national TCM Master professor ZHOU Zhong-ying.Based on long-term clinical practice，
Professor ZHOU believes that lung cancer mainly includes five pathological factors，namely phlegm，stasis，
toxin，deficiency and depression. The author makes a brief illustration about them in order to provide the
reference for students and doctors in clinic.
Key words ：ZHOU Zhong-ying ；lung cancer ；pathological factors ；exploration