全 文 ：　　作者简介:方华民(1956-), 男 ,宁夏自治区人民医院药剂科主管药师。
RP-HPLC法测定金莲清热颗粒中
菝葜皂苷元的含量
方华民 , 　韩荣先 , 　刘晓峰 , 　杨宁莲
(宁夏自治区人民医院　药剂科 , 宁夏 银川 750021)
　　摘　要:目的:测定金莲清热颗粒中菝葜皂苷元的含量。方法:用 RP-HPLC法测金莲清热颗粒中菝葜皂
苷元的含量 , 流动相为甲醇 , 流速为 0.8mL/min, 检测器为 RID-6A。结果:菝葜皂苷元在 0.05 ～ 1.0mg/mL浓
度范围内线性良好(r=0.9997), 平均回收率为 97.6%, (RSD为 0.76%, n=5)。结论:该方法简单准确 , 可用
于金莲清热颗粒的质量控制。
关键词:金莲清热颗粒;菝葜皂苷元;含量测定
中图分类号:O657.7+2;R927.2 文献标识码:A 文章编号:1004-2113(2008)06-0516-03
DETECTIONOFSARSASAPOGENININ
JINLIANQINGREGRANULEBYRP-HPLC
FANGHua-min, 　HANRong-xian, 　LIUXiao-feng, 　etal.
(DepartmentofPharmacy, ThePeoplesHospitalofNingxiaAutonomousRegion, Yinchuan750021 China)
Abstract:Objective:DetectingsarsasapogenininJinlianqingreGranule.Methods:TheRP-
HPLCwasusedtodetectsarsasapogenininJinlianqingreGranule, themobilephasewasmethanol, the
flowratewas0.8mL/minandthedetectorwasRID-6A.Results:Thestandardcurvewaslinearover
therangeof0.05 ～ 1.0mg/mLwiththecorelationcoeficient0.9997, theaveragerecoverywas
97.6%(RSD=0.76%, n=5).Conclusion:Themethodwassimpleandaccurateforthedetection
sarsasapogeninandmightapplythequalitycontrolforcompoundJinlianqingregranule.
Keywords:JinlianqingreGranule;sarsasapogenin;asaying
　　金莲清热颗粒主要由金莲花 、大青叶 、生石
膏 、知母等七味中药组成 ,其主要功能为清热解
毒 ,利咽生津 ,止咳祛痰 ,用于外感热症 。知母在
方剂中主要功能为清热降火 、滋阴清肺 、生津润
燥 ,主治外感热病 、高热烦渴 、肾虚火旺等症状 ,其
所含主要化学成分是以菝葜皂苷元(Sarsasapoge-
nin, SAR)为母核结构的知母皂苷 A-I,知母皂苷
A-Ⅲ ,知母皂苷 B-I[ 1 ～ 4] 。由于 SAR特殊的母
核结构 ,采用紫外检测器不易进行检测 ,给相关质
量制剂分析工作带来了不便。故本实验建立了以
示差折光检测器为检测方法的反相高效液相色谱
法 ,测定 SAR在金莲清热颗粒中的含量 ,为该制剂
的质量控制提供严格的质量控制手段。
·516· ActaAcadMedNeiMongol　Dec.2008　Vol.30　No.6DOI :10.16343/j.cnki.issn.2095-512x.2008.s1.001
1　材料
1.1　仪器
LC-6A高效液相色谱仪(岛津 ,日本), RID
-6A检测器 , SLC, 6A系统控制器 , C, R3A数据处
理系统:CSF-1A超声波清洗器(上海超声波仪器
厂):Milipore溶剂过滤系统(美国 Milipore)公司。
1.2　试剂与试药
SAR对照品 (中国生物制品检定所 , 批号:
111607-200301):甲醇为色谱醇 ,氯仿 、乙醇 、盐
酸为分析醇均购自山东禹王实业公司禹城化工
厂:金莲清热颗粒购自宁夏启元药业有限公司(批
号:041218、041207、050111)。
1.3　供试样品制备
取金莲清热颗粒经干燥后准确称取 4.0 g,用
80mL乙醇于索氏提取器中提取 ,提取 1.0h后回
收乙醇 ,残渣加 50mL2moL/L盐酸回流水解 2h,
用 80mL氯仿分 3次回流萃取 ,每次 30min,回收氯
仿 ,残渣用甲醇溶解并定容为 10mL,制成样品溶
液 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:Shin1 -packCLC, ODS(150 ×
6.0mm, 5μm阳 I.D):流动相为甲醇:检测器:RID
-6A(灵敏度为 8 ×10-6RIU/FS):流速:0.8mL/
mim柱温:室温:进样量:5.0μL。
2.2　标准曲线和线性范围
精密称取 SAR对照品 10.0mg用甲醇溶解并
定容 1.0 mg/mL,然后进一步稀释获得一系列浓
度的 SAR对照品溶液 0.05, 0.1, 0.3, 0.5, 0.7,
0.9和 1.0mg/mL。按 “2.1”项下色谱条件进样分
析 ,测 SAR的峰面积。以 SAR的峰面积为纵坐标
(Y), SAR的浓度为横坐标(X),用加权(1/C2)最
小二乘法进行回归运算得回归方程 Y=8625.21C
-25.50, r=0.9997(n=6)。表明 SAR在 0.05 ～
1.0 mg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.3　精密度试验
取 0.50 mg/mLSAR对照品溶液 ,按 “ 2.1”项
下色谱条件测定 , 峰面积分别为:4172, 4149,
4152, 4199, 4165, 4232,平均峰面积为 4178.2, RSD
为 0.76%(n=6), 结果表明该方法的精密度较
高。
2.4　重复性试验
取同一批号样品 6份 ,按 “ 1.3”项下制成供试
品溶液 ,进行 SAR含量测定 , SAR的含量为平均
0.37mg/g, RSD为 1.20%(n=6),结果表明该方
法重现性较好 。
2.5　稳定性实验
取 0.50mg/mLSAR对照品溶液 , 分别在 0,
2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0, 24.0和 36.0 h进样测峰
面积 ,平均峰面积为 4177, RSD为 0.55%(n=7),
结果表明该溶液在室温下放置 36h比较稳定 。
2.6　色谱行为
取不含知母的其余药材按制剂工艺制备空白
样品 ,按 “ 1.3”项下制备空白试样 ,按 “2.1”项下色
谱条件进行测定 ,结果表明该制剂中其它成分对
SAR的保留时间没有干扰 ,色谱峰尖锐对称 ,色谱
图见附图 。
附图(a)SAR对照品 , (b)不含知母药材的空白制剂 , (c)金莲清热颗粒中 SAR的色谱图
Fig.HPLCchromatoramsofSAR:(a)的 referencesubstances, (b)negativesample, (c)sample
·517·内蒙古医学院学报　2008年 12月　第 30卷　第 6期
2.7　回收率实验
分别精密称取己测知含量的金莲清热颗粒样
品 6份 ,每份重 5.0g,其中三份不加标准样作为基
样 ,按样品分析方法进行测定 ,计算三次测定平均
值作为基样含量 ,另三份分别加标样 9.0mg,同样
按样品分析方法测定 ,计算回收率 ,结果见附表。
附表　回收率测定
Tab.Determinationofrecovery
基样含量(mg) 加标样量(mg) 加标样后测重(mg) 回收率(%) 回收均值
9.09 9.00 17.85 97.3
9.09 9.00 17.82 97.0 97.6
9.09 9.00 17.95 98.4
2.8　样品分析结果
将金莲清热颗粒按 “1.3”项下方法制备样品
溶液 ,在 “2.1”项下的色谱条件下进样分析 ,每样
平行测定 5次 ,每次 5.0μL,测得菠契皂背元平均
含量为 0.38mg/g, RSD为 0.87%。
3　讨论
由于 SAR是简体背元 ,分子中不具共辄结构 ,
在紫外区和可见区内无特征吸收峰 ,故不宜采用
紫外检测器进行检测 。因而考虑使用蒸发光散射
检测器和示差折光检测器 ,根据现有的实验条件 ,
本实验采用了示差折光检测器 ,该检测器对于有
些灵敏检测器不能响应的组分 ,有很好的检测效
果 。另外 ,在供试样品制备过程中 ,我们结合 2005
版药典 [ 5]对 SAR的提取方法进行了相应改进和
考察 ,实验采用索氏提取器进行提取 ,考察了 SAR
与水解时间的关系和萃取次数对 SAR含量的影
响 ,最后认为为了缩短提取时间和提取完全 ,优选
水解时间为 2h,萃取次数为 3次 。从本实验所建
立的色谱条件来看 ,该方法能够完全满足金莲清
热颗粒中 SAR的含量测定 ,且该方法具有较好的
通用性和广泛的适用性。
参考文献
[ 1]马百平 ,董俊生 , 王秉 ,等.知母中呋甾皂甙的研究 [ J] .
药学学报 , 1996;31(4):271
[ 2]王天勇 ,杨文远.知母中萨尔萨皂甙元的反相高效液相
色谱测定 [ J] .中医药学报 , 1995;(6):46-47
[ 3]殷健 ,郭力方.中药现代研究与临床应用 [ M] .北京:学
苑出版社 , 1993:46
[ 4]刘美凤 ,丁怡.RR-HPLC示差折光检测法测定复方知
母胶囊中菝葜皂苷元的含量 [ J] .中国药学杂志 , 2004;
39(2):141-142
[ 5]中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和
国药典 [ M] .一部.北京:化学工业出版社 , 2005:148
·518· ActaAcadMedNeiMongol　Dec.2008　Vol.30　No.6