全 文 ：不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量测
定
李春兰1 ,毛春芹2＊ ,陆兔林2 ,宋王申2
(1江苏省第二中医院药剂科 ,江苏 南京　210017;2南京中医药大学药学院 ,江苏 南京　210046)
摘要:目的　考察不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。方法　采用高效液相色谱法分别测定不同产地知
母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量。测定菝葜皂苷元以甲醇-水(95∶5)为流动相;流速为 1.0 mL/min;柱温 30℃;用
蒸发光散色检测器检测 ,漂移管温度 85℃。测定芒果苷以水-乙腈-0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;流速为 0.6 mL/
min;柱温30℃;检测波长为 258 nm。结果　河北 、内蒙 、山西 、陕西 、安徽等产地菝葜皂苷元含量为 1.5%～ 2.2%,芒果苷
含量为 0.3%～ 1.9%。结论　本法测定知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷含量简单 、快速 、准确 、重现性好 , 符合含量测定
建立的要求 ,可以作为判断知母饮片质量的方法之一。
关键词:知母饮片;菝葜皂苷元;芒果苷;高效液相
中图号:R282.710.3　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2010)01-0059-03
　　知母是百合科(liliaceae)植物知母(Anema
rrhena asphodeloides Bge)的干燥根茎 ,具有清热泻
火 、生津润燥的功效 ,用于外感热病 、高热烦渴 、肺
热燥咳 、骨蒸潮热 、内热消渴 、肠燥便秘[ 1] 。知母
有效成分为多种甾体皂苷 。其皂苷元主要为菝葜
皂苷元(sarsasapogenin)。因菝葜皂苷元为甾体皂
苷元 ,分子中没有共轭结构 ,无紫外特征吸收 ,对
样品的检测造成了一定的难度[ 2] 。为此 ,本试验
采用高效液相-蒸发光散射检测器(ELSD)测定
知母中菝葜皂苷元的含量 。芒果苷是知母中清热
作用的有效成分 。同时具有免疫活性 、抗菌活性 、
抗单纯疤疹病毒活性 。有抗氧化 、抗糖尿病 、抗肿
瘤作用。对血脂质有抑制效应 。有护肝 、抗肥胖
效应 。在骨吸收方面有重要的抑制效应等[ 3] 。知
母各地产药材之间品质差异较大 ,知母临床常用
的炮制品为盐炙知母 。本文以菝葜皂苷元及芒果
苷含量为指标 ,比较了 8个产地盐知母饮片 ,为更
好的控制盐知母饮片质量提供了依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器
LC-10Avp 型高效液相色谱仪(日本岛津);
mettlerAG285型电子天平(瑞士梅特勒-托利多集
团);检测器 PL-ELSD1000(英国 polymer laborato-
ries);超声波清洗机 2200型(淮阴汉邦科技)。
1.2　试药
菝葜皂苷元对照品(中国药品生物制品检定
所提供 ,批号 744-8903 ,含量测定用);芒果苷对照
品(中国药品生物制品检定所提供 ,批号 111607-
200301 ,含量测定用);盐知母饮片购自河北 、安徽
亳州等地;甲醇 、乙腈为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其余
试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　菝葜皂苷元含量测定[ 1]
2.1.1　色谱条件
KromasilC18(4.6 mm×250 mm ,5μm)色谱柱;
甲醇:水(95∶5)为流动相;流速为 1.0 mL/min;柱
温 30℃;用蒸发光散色检测器检测 ,漂移管温度
85℃。色谱图见封三图 1-2。
2.1.2　对照品溶液的制备
精密称取菝葜皂苷元对照品约 20mg ,精密称
定 ,置 10 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 ,即得(每 1 mL 含菝葜皂苷元 1.97 mg)。
收稿日期:2009-08-28;修稿日期:2009-09-20
基金项目:国家”十五”攻关课题(2001BA701A55)
作者简介:李春兰(1964-),女 ,黑龙江牡丹江市人 ,江苏省第二中医院副主任中药师。 ＊通讯作者:025-85811835
—59—南京中医药大学学报 2010 年 1月第 26 卷第 1期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.26 No.1 Jan.2010
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2010.01.024
2.1.3　供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约 0.5 g ,精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 ,精密加入乙醇 25 mL ,称定重
量 ,浸泡过夜 , 超声处理(功率 200 W , 频率 30
kHz)40 min ,放冷 ,再称定重量 ,用乙醇补足减失
的重量 ,摇匀 ,滤过 , 精密量取续滤液 10 mL ,蒸
干 ,加水 10 mL ,盐酸 1 mL ,加热回流 2 h ,取出 ,冷
至室温 ,边振摇边滴加 40%氢氧化钠溶液至溶液
颜色由橙黄变为橙红 ,用三氯甲烷振摇提取 2次 ,
每次 30 mL ,合并三氯甲烷液 ,蒸干 ,残渣加甲醇
溶解 ,转移至 10 mL量瓶中 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,
即得 。
2.1.4　线性关系考察
精密量取菝葜皂苷元对照品溶液 0.25 , 0.5 ,
1.0 ,1.5 ,2.0 ,2.5 mL 加甲醇定容至 5 mL ,在上述
色谱条件下重复进样 2 次 ,每次 10 μL ,测定峰面
积值 ,以峰面积平均值和浓度的对数值进行回归
处理 ,得回归方程 Y =1.604 925 51X +2.528 18;
相关系数 r=0.999 5结果表明 ,菝葜皂苷元在 0.
98 ～ 9.85μg范围内线性良好。
2.1.5　精密度实验
取同一对照品溶液进行实验 ,每次进样 10.0
μL ,连续进样 6 次 , 测定菝葜皂苷元峰面积值 ,
RSD =1.32%。
2.1.6　稳定性实验
取同一样品溶液进行实验 ,每次进样 10μL ,
在 0 ,2 ,4 ,6 ,8 h各进一针 , RSD =1.50%。
2.1.7　重复性试验
取同一批号样品(河北蔚县;批号 4)5份 ,按
2.1.3项下方法制备供试品溶液 ,测定菝葜皂苷
元含量为 1.34%, RSD=1.44%。
2.1.8　加样回收实验
取菝葜皂苷元含量为 1.34%的本品粉末 (
过三号筛)9份 ,各约 0.25 g ,精密称定 ,置具塞
锥形瓶中 ,再加入相当于样品中菝葜皂苷元含量
的 80%, 100%和 120%的菝葜皂苷元对照品溶
液 ,按 2.1.3项下方法制备供试品溶液 ,分别注入
液相色谱仪测定 ,计算回收率 ,结果见表 1。
2.1.9　10批样品的测定结果
取10个批号的盐知母打粉 ,每个批号取 0.5
g ,精密称定 ,分别按供试品溶液制备方法制备 ,得
供试品溶液。并按上述含量测定方法分别测定其
中菝葜皂苷元的含量 ,结果见表 2。
表 1　菝葜皂苷元加样回收试验(n=6)
NO 取样量/ g 样品含量/mg 加入量/mg 实测总量/mg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ %
1 0.250 2 3.352 7 2.683 4 6.034 8 99.95
2 0.251 2 3.366 1 2.683 4 6.0122 98.61
3 0.253 4 3.395 6 2.6834 6.018 2 97.70
4 0.250 6 3.358 0 3.354 2 6.688 0 99.28
5 0.252 1 3.378 1 3.354 2 6.590 3 95.77 98.35 1.38
6 0.251 8 3.374 1 3.354 2 6.650 3 97.67
7 0.251 3 3.367 4 4.025 0 7.399 4 100.17
8 0.252 2 3.379 5 4.025 0 7.334 0 98.27
9 0.252 4 3.382 2 4.025 0 7.314 0 97.71
表 2　样品中菝葜皂苷元含量测定结果
产地 批号 含量/ %
河北平山 批 1 1.739 0
批 2 1.748 4
批 3 1.724 2
河北蔚县 批 4 1.336 4
河北易县 批 5 1.502 7
内蒙牛家营子 批 6 2.015 8
内蒙扎旗 批 7 1.970 1
山西芹池 批 8 2.204 0
陕西蒲城 批 9 2.258 0
安徽亳州 批 10 1.905 9
2.2　芒果苷含量测定
2.2.1　色谱条件
Kromasil-C18(4.6 mm ×250 mm , 5 μm)色谱
柱;水-乙腈-0.85%磷酸(100∶25∶5)为流动相;
流速为 0.6 mL/min;柱温 30℃;检测波长为 258
nm 。色谱图见封三图 3-4。
2.2.2　对照品溶液的制备
精密称取芒果苷对照品适量 ,加甲醇制成每
1 mL含 0.354 mg的溶液 ,作为对照品溶液。
2.2.3　供试品溶液的制备
取盐知母饮片 ,打粉过50目筛 ,取知母粉 0.1
—60— 南京中医药大学学报 2010年 1 月第 26卷第 1 期
g ,精密称定 ,置离心管中 ,加入 50%乙醇 15 mL ,
超声30 min ,离心 20 min ,取上清液置蒸发皿中 ,
药渣重复上述操作 2次 ,合并 3次上清液 ,挥干溶
剂 ,用 50%甲醇定容于 25 mL 量瓶中。用 0.45
μm 微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,即得 。
2.2.4　线性关系考察
分别精取芒果苷标准液 0.25 ,0.5 , 0.75 ,1.0 ,
1.25 ,1.50 mL加甲醇定容至 5 mL ,在上述色谱条
件下重复进样二次 ,每次 10μL ,测定峰面积值 ,以
峰面积平均值和浓度进行回归处理 ,得回归方程
Y =6 764 005.65X -69 421.2 r=0.999 9。结果
表明 ,芒果苷在 0.177 ～ 1.062 μg 范围内线性良
好。
2.2.5　精密度实验
取同一对照品溶液进行实验 ,每次进样 10.0
μL ,连续进样 5次 , RSD =1.20%。
2.2.6　稳定性实验
取同一样品溶液进行实验 ,每次进样 10μL ,
在 0 ,2 ,4 ,6 ,8 h进一针 ,RSD=1.40%。表明样品
溶液在8 h内稳定。
2.2.7　重复性试验
取同一批号样品(河北蔚县;批号 4)5份 ,按
2.2.3项下方法制备供试品溶液 ,测定芒果苷含
量为 0.66%, RSD=1.32%。
2.2.8　加样回收实验
取芒果苷含量为 0.66%的本品粉末 (过三
号筛)9份 ,各约 0.05 g ,精密称量 ,置离心管中 ,
加入 15 mL 50%乙醇 ,再加入相当于样品中芒果
苷含量的 80%,100%和 120%的芒果苷对照品溶
液 ,按 2.2.3项下方法制备供试品溶液 ,分别注入
液相色谱仪测定 ,计算回收率 ,结果见表 3。
表 3　芒果苷加样回收试验结果(n=6)
NO 取样量/g 样品含量/mg 加入量/mg 实测量/ mg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ %
1 0.050 1 0.330 9 0.267 7 0.600 3 100.67
2 0.050 2 0.331 6 0.267 7 0.589 4 96.30
3 0.050 5 0.333 6 0.267 7 0.599 4 99.27
4 0.050 2 0.331 5 0.334 6 0.653 5 96.22
5 0.050 5 0.333 5 0.334 6 0.680 6 103.74 98.73 2.39
6 0.050 2 0.331 5 0.334 6 0.658 1 97.63
7 0.050 4 0.332 8 0.401 5 0.730 9 99.17
8 0.050 4 0.332 4 0.401 5 0.725 0 97.79
9 0.050 7 0.334 4 0.401 5 0.726 0 97.55
2.2.9　10批样品的测定结果
取10个批号的盐知母饮片打粉 ,每个批号取
0.1 g ,精密称定 ,分别按供试品溶液制备方法制
备 ,得供试品溶液 。并按上述含量测定方法分别
测定其中芒果苷的含量 ,结果见表 4。
表 4　样品中芒果苷含量测定结果
产地 批号 含量/ %
河北平山 批 1 0.834 5
批 2 0.824 6
批 3 0.885 2
河北蔚县 批 4 0.657 4
河北易县 批 5 0.624 7
内蒙牛家营子 批 6 1.603 4
内蒙扎旗 批 7 0.751 9
山西芹池 批 8 1.064 2
陕西蒲城 批 9 1.927 7
安徽亳州 批 10 0.349 9
3　讨论
(1)菝葜皂苷元为甾体皂苷元 ,分子中没有
共轭结构 ,无紫外特征吸收 ,用与芒果苷相同的方
法测定有一定难度 。为此 ,本实验采用高效液相
-蒸发光散射检测器测定知母中菝葜皂苷元的含
量。
(2)有文献报道以芒果苷为指标比较不同产
地的知母 ,但未见以菝葜皂苷元和芒果苷双指标
比较不同产地知母的报道 。因此本研究以菝葜皂
苷元和芒果苷双指标 ,可以比较全面的反映不同
产地知母饮片的质量。本法简单 、快速 、准确 、重
现性好 ,符合含量测定建立的要求 ,可以作为判断
知母饮片质量的方法之一 。
(3)从实验结果看 ,各地知母饮片品质差异较
大。山西芹池产知母饮片中菝葜皂苷元含量较
高 ,陕西蒲城产知母饮片中芒果苷含量较高 。可
根据不同研究目的选择合适的产地 。
参考文献:
[ 1] 中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典
(一部)[ M] .北京:化学工业出版社 , 2005.148.
[ 2]郭继红 ,杨毅恒 , 张艳华.高效液相-蒸发光散射检测
器法测定知母中菝葜皂苷元含量[ J] .中国医院药学杂志 ,
2006 , 26(8):987.
[ 3] 李好文 ,邓家刚 , 邓静.芒果苷国外研究进展[ J] .广西
中医学院学报 , 2003 , 6(4):62. (编辑:李伟东)
—61—李春兰 , 等:不同产地知母饮片中菝葜皂苷元及芒果苷的含量测定　第 1期