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H P L C 示差折光检测法测定复方知母胶囊中菠莫皂昔元的含量
刘美凤 , 丁怡 ` ,邢 东明 , 杜力军 (清华大学生物科学与技术系药物药理研究室 ,北京 l姗84
摘要 : 目的 采用反相高效液相色谱示差折光检测 法建立复方知母胶囊中援莫皂菩元 的含量测 定方法 。 方法 色谱柱 : Hy -
eP o il ODS ( 4
.
6
~ xl 50 ~
,
5 ,二 )不锈钢柱 , 流动相 : 纯甲醇 , 流速 : 0 . g mL · im n 一 ’ ,检测器 :川 D 2 41 0 , 柱温 : 30 ℃ ,进样量 : 20 沙 。
结果 被测定峰与其 它色谱峰 可达到基线 分 离 , 线性范 围 1 . 0 一 7 . 0 滩 , 相关 系数 : = 0 . 9坚〕 8 , 平均 回收率 98 . 6 % , ( sR D 二
2
.
36 %
, n = 5 )
。 结论 本法简便 , 准确 , 灵敏度高 , 可用 于本制剂 的含量测定和质量控制
关键词 :反相高效液相色谱法 ;示差折光 ;援葵皂普元 ;含量测定
中图分类号 : 2H 84 . 1 文献标识码 : A 文章编号 : 10 1一 24 94 ( 2仪碎 )02 一 0 141 一 02
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复方知母胶囊由知母 、人参 、 柴胡 、 黄荃组成 , 经提取精
制加工得到的复方制剂 , 临床试用表明该方对抑郁症具有较
好的治疗作用 。 知母 为百 合科植物 知母 ( A z le n 砚王r} 汉Zan as -
p ho de 勿山 B ge . )的干燥根 , 是该方的君药 , 知母中的主要化学
成分是以菠莫皂昔元为母核结构的知母皂昔 A 一 I , 知母皂昔
A
一
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, 知母皂营 B一 I ; ’ 一 “ 。 目前高效液相法测定知母药材 中
筱葵皂昔元含量的文献报道较少匡 “ 」 , 制剂中的菠莫皂昔元
的含量测定笔者尚未见文献报道 。 本实验采用乙醇提取样
品再进行酸水解 , 以水解产物菠葵皂昔元为含量测定的指
标 ,建立 了反相高效液相色谱示差折光检测法测定其在制剂
中的的含量 , 为该制剂的质量控制提供依据 。
1 仪器 、 试剂和药品
W at
e sr 高效液相色谱仪 (美国 Wat e 。 公司 , 包括 5巧 泵 ,
24 10 示差检测器 , 7 725 1进样器 , iM le nlu un 护2色谱工作站 ) 。 甲
醇为色谱纯 (天津康科德科技有限公 司 ) 。 援葵皂昔元对照
品 (中国药品生物制品鉴定所 ,供含量测定用 , 批号 : 74 -
9郑 ) ,复方知母胶囊 (批号 : 0 2一胆 l , 0 1 10 22 , 0 1 102 3 , 自制 ) 。
2 方法与结果
2
.
1 色谱条件
色谱柱 : Hy伴sr il o D s (4 . 6 nu x 15 o nr , 5四 )不锈钢柱 ;
流动相为甲醇 ;流速 0 . 9 礼 · im n 一 ’ ;柱温 30 ℃ ;进样量 : 20 江 ;
灵敏度 : 4 x 10 一 “ A u玲 。
.2 2 供试 品溶液的制备
取复方知母胶囊内容物约 50 mg ,精密称定后 , 置 25 礼
量瓶中 ,加乙醇约 20 mL ,超声提取 4D im n , 取出后 , 加乙醇稀
释至刻度 。 滤过 ,精密吸取滤液 20 礼 置圆底烧瓶中 , 加盐
酸 l mL , 置水浴上用蒸气缓慢回流 1
.
o h
,放冷 ,加 巧 mL 水 ,
回收溶剂至无醇味 ,用氯仿萃取 4 次 , 每次 20 mL ,合并萃取
液 , 回收氯仿 , 残渣用甲醇溶解 , 稀释至 10 mL 的量瓶中 , 0 . 45
卿 滤膜过滤作为供试品溶液 。
.2 3 对照品溶液的制备
精密称取筱葵皂昔元对照品适量 , 加 甲醇配制成 0 . 5
mg
·
mL
一 `的溶液 , 即得 。
2
.
4 线性关系考察
精密吸取被莫皂昔元对照品溶液适量 , 加甲醇溶液定量
稀释成 50 , 10 , 巧。 , 姗 , 250 , 30 , 350 陷 · mL 一 ’ 的溶液 , 按
“
2
.
1
” 项下条件测定 ,侧定峰面积 , 以菠葵皂昔元对照品的微
克数为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 回归方程为
y = 9 139
.
5 x + 3 3
.
2 56
,相关系数 ; = 0 . ,更) 8。 结果表明 ,菠葵
皂昔元在 1 . 0 一 7 . 0 陀 范围内的质量与峰面积具有良好的线
J胜关系 。
.2 5 精密度实验
作者简介 : 刘美凤 , 女 , 清华大学生物科学与技术系 2〕 〕l 级博士 生
犯7 87 36 30 E 一二l : P han n @ t s l n gh u a . 记 u . e n
中国药学杂志 2以” 年 2 月第 39 卷第 2 期
` 通讯作者 : 丁怡 , 女 , 教授 elT : ( 0 10 ) 6 27 94 7 97 F ax : ( 0 10)
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汉刁
n J
,
2之兀峥 eF b附 ry , Vol .刃 No . 2 · 14 1
取 0. 5 m g’ 耐 一 ’ 菠莫皂营元对照品溶液 , 按 “ 2 . 1 ” 项下条
件测定 , 峰面积分别为 : 4 5 7 5一, 4 5 51 9 , 巧翎 , 4 5 5 6 3 ,朽 渊 ,
45 16
,平均峰面积 = 45 839 , 略D = 0 . 59 % ,说明方法的精密
度较高 , ; ; = 6
2
.
6 稳定性实验
取 0 . 5 , gn · 。止 一 ’拨莫皂营元对照品溶液 , 分别在 2 . 0 ,
4
.
0
,
8
.
0
,
12
.
0
,
24
.
0
,
4 8
.
0
,
72
.
0 h 按 “ 2 . 1” 项下条件测定 , 测得
峰面积积分值分别为 : 4 5 叩 5 , 4 5 7 8 2 , 4 5 3叩 , 4 5 7印 ,朽 9 7 1 , 4 5
9 6 8
,
46 的 7 , 平均峰面积 = 45 839 , 邓D = 0 . 50 % , n 二 7 结果
表明 ,该溶液在室温下放置 72 h峰面积无明显变化 。
.2 7 重现性实验
精密称取同一批号 (01 10 2 1) 的复方知母胶囊样品 5 份 ,
按 “ 2 . 2’ 项下供试品溶液的制备操作 ,按 “ 2 . 1” 项下条件进行
测定 , 测得菠莫皂昔元含量分 别为 f % ) : 5 . 07 , 5 . 16 , 4 . 98 ,
5
.
ro
,
5
.
19
, 平均含量为 5 . 10 % , 略D = 1 . 61 % , n 二 5 结果表
明方法重现性较好
2
.
8 空白实验
取不含知母的其余药材按制剂 _ L 艺制备空 白样品 , 并按
,’2 . 2’ 项 下供试品溶液的制备方法操作制得空白溶液 , 按
,’2 . 1”项下条件测定 , 结果空 白溶液在与被莫皂着元对照品
相同的保留时间处无色谱峰出现 ,说明空白溶液对样品的测
定无干扰 , 见图 1。
取 3 个批号 (批号 0 1 10 2 1 , 0 1 10 22 , 0 1 102 3 )的复方知母胶
囊 , 按 “ 2 . 2’ 项下供试品溶液的制备操作 ,按 “ 2 . 1” 项下条件进
行测定 , 计算含量 ,结果见表 1 ( n = 5 ) 。
表 1 复方知母胶囊中菠葵皂普元的含量测定 . %
T a b 1 Co n t e nt s of s a r sa ` ” p g c in n in th e erP P a r a l io ns
.
%
批号 拨契皂昔元含量 F S I )
0 1 1(2j 1
0 1 10 22
0 1 1沮 3
5
.
10
5
.
27
4 97
1
.
6 1
1
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】t o l
图 l 菠葵皂普元对照 品 ( A ) , 复方知母胶囊剂 ( B )和空 白溶
液 ( C )的 HP 忧色谱图
l 一 拨契皂普儿
iF g 1 H p LC c lu D ll l a t o gn u l l o f So as
a即邵in r l ( A ) , 。 o n l即朋 d
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u e叩 s ul e s p re p之I r a t io n ( B ) 。 1( 1 b la l l k axsn p l
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l 一 s明盆巧叫 )喂 . 川 n
.2 9 回收率 实验
精密称取 同一批号 ( 01 102 1) 复方知母胶囊适量 (共 5
份 ) ,加入筱莫皂昔元对照品 , 按 “ 2 . 2’ 项下供试品溶液的制
备操作 ,按 “ 2 . 】” 项下条件测定 ,菠莫皂昔元对照品的回收率
分别为 ( % ) : 98 . 18 , 102 . 81 , 103 . 5 1 , 10 2 . 46 ,卯 . 6 1 , 平均回收率
为 9 . 80 % , sR D 二 2 . 27 % , 。 二 5 , 结果说明本法回收率好 , 方
法可行
2
.
10 样品的测定
3 讨 论
3
.
1 检测器的选择
与紫外可见吸收检测器 ( UV D ) 和蒸发光散射检测器
( E玲 )D 相比 , 示差折光检测器 ( RI )D 的灵敏度较低 , 一般不用
于痕量分析 。 有些很灵敏的检测器 (如紫外吸收检测器 )不
能响应的组分 , 可用示差折光检测器检测 。 菠莫皂营元在紫
外区和可见 区内无特征吸收峰 ;示差折光检测器 ( IH )D 和蒸
发光散射检测器 ( E峪 )D 都是少有的通用型检测器 , 具有广泛
的适用范围 ,在不苛求灵敏度的情况下 , 示差折光检测器还
是很有效的 , 因此选择了示差折光检测器检测拨莫皂昔元
.3 2 流动相的选择
比较了甲醇 , 乙睛 , 甲醇 一水作为流动相的色谱效果 , 用
乙睛为流动相时色谱峰倒置 , 且未出现被测定峰 ; 以甲醇一水
作为流动相时基线不平稳 ;以甲醇为流动相溶剂峰与被测定
峰比例适当 ,基线平稳 。
.3 3 流速的选择
以甲醇作流动相 , 比较 了 0 . 8 一 1 . 2I nL · ha n 一 ’ 范围内的流
速 ,结果表明流速为 O . g mL · im n 一 ’ , 色谱图中各峰的分离度
好 , 被测定峰的保留时间适当 。
.3 4 样品的前处理
制剂按中国药典 2侧叉〕年版一部知母项下含量测定方法
的条件进行酸水解后 ,加人 巧 rnL 水 , 回收溶剂至无醇味 , 加
氯仿萃取 , 比较了萃取 4 次合并液样品与第 5 次萃取样品中
菠葵皂普元的含量 , 结果显示其含量在第 5 次萃取样品极
少 ,对含量测定无影响 ,说明萃取 4 次可将被测定成分全部
萃取出来 。
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(收稿日期 : 2《X) 2一 10 一 14 )
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