全 文 ：nal transduction of smooth muscle cells in multiple organ dysfunc-
tion syndrome［J］． J Surg Res，2006，131(1) :80 － 85．
(编校:张志明)
菝葜皂苷元对胃癌 BGC － 823 细胞增殖、凋亡影响的实验研究
廖子君1，张晓明2，郭亚焕1，孙海凤1
Study on the effect of proliferation and apoptosis of sarsasapogenin to human gastric
cancer line BGC－ 823
LIAO Zi － jun1，ZHANG Xiao － ming2，GUO Ya － huan1，SUN Hai － feng1
1Tumor Hospital of Shaanxi Province，Xi a`n 710061，China;2The First People＇s Hospital of Xianyang City，Xianyang 712000，China．
【Abstract】 Objective:To investigate the effec of proliferation and apoptosis of human gastric cancer cell line BGC
－ 823 cultured in vitro under different concentration． Methods:The BGC － 823 cells were treated by sarsasapogenin
in different concentration and variable durations cell growth activity were observed using MTT assay;Flow cytometry
was used to assay the effec of sarsasapogenin on apoptosis． Results:The rate of proliferation restrain and apoptosis of
BGC － 823 cell were significantly augment． Conclusion:Sarsasapogenin can efficiently inhibit the proliferation and
induce apoptosis of BGC － 823 cell．
【Key words】sarsasapogenin;cell line BGC － 823;apoptosis
Modern Oncology 2010，18(06) :1085 － 1087
【摘要】 目的:观察不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌 BGC － 823 细胞增殖、凋亡的影响。方法:BGC －
823 细胞经不同浓度菝葜皂苷元处理后，采用 MTT 法检测细胞的生长活性，流式细胞仪检测细胞凋亡。结
果:随菝葜皂苷元浓度的增加，胃癌 BGC － 823 细胞增殖抑制率、凋亡率亦升高。结论:菝葜皂苷元对胃癌
BGC － 823 细胞的增殖有抑制作用，并可诱导细胞凋亡。
【关键词】菝葜皂苷元;胃癌 BGC － 823 细胞株;凋亡
【中图分类号】R73 － 36 + 1;R735． 2 【文献标识码】A DOI:10． 3969 / j． issn． 1672 － 4992． 2010． 06． 13
【文章编号】1672 － 4992 －(2010)06 － 1085 － 03
菝葜为百合科植物菝葜(Smilax china L)的干燥根茎，又
名铁菱角、金刚藤，性平，味甘酸，具有祛风除湿、解毒消肿之
功，民间常用于风湿性关节痛及恶性肿瘤(如食管癌、胃癌、
直肠癌、乳腺癌、宫颈癌等)等的治疗。
百合科菝葜属植物全世界有 300 余种，我国亦有 60 余
种，大多分布于长江以南，其化学成分非常复杂。根据近、现
代植物化学研究分析［1］，其主要成分是皂苷，而且是以薯蓣
皂苷元(菝葜皂苷元，sarsasapogenin，SAR) )为主要苷元所衍
生的皂苷，至少包含 3 种成分，称菝葜皂苷 A、B、C，该皂苷均
为甾体皂苷。为进一步探讨其抗胃癌的药理活性，本实验观
察了不同浓度菝葜皂苷元对体外培养胃癌 BGC － 823 细胞
的增殖、凋亡的影响，旨在为胃癌寻找新的天然抗癌植物药。
1 材料与方法
1． 1 细胞株
【收稿日期】 2009 － 07 － 28
【基金项目】 陕西省卫生厅科学研究基金项目(编号:06D09)
【作者单位】 1陕西省肿瘤医院，陕西 西安 710061
2咸阳市第一人民医院，陕西 咸阳 712000
【作者简介】 廖子君(1963 －) ，男，四川人，主任医师，主要从事肿
瘤转移相关研究。E － mail:liaozijun66@ sina． com
胃癌 BGC － 823 细胞株(美国 ATCC公司) ，在含 10%的
胎牛血清的 RPMI 1640 培养液中培养，其内加入青霉素
(100μmol /L)、链霉素(100μmol /L) ，置于 5% CO2 饱和湿度
的培养箱内培养，0． 25%胰酶消化传代。
1． 2 药物及主要试剂
SAR购于中国药品生物制品检定所(批号:110744 －
200509) ，用二甲基亚砜(DMSO)溶解，然后根据实验需要用
RPMI 1640 培养液稀释成实验所需的不同浓度，其中 DMSO
含量均为 1%，－ 20℃ 保存;RPMI 1640 培养液;噻唑蓝
(MTT) ;二甲基亚砜(DMSO) ;碘化丙啶(PI)。
1． 3 实验方法
1． 3． 1 显微镜观察 取对数生长期 BGC － 823 细胞株 4 ×
104 /ml接种到 24 孔板内，1ml /孔。加入不含血清的 RPMI
1640 培养液，培养 24h 后，加入含不同浓度 SAR 的 RPMI
1640 培养液，阴性对照组加无 SAR 的 RPMI 1640 培养液。
药物分别作用 24h、48h后，在倒置显微镜下观察细胞形态变
化。
1． 3． 2 MTT法 检测不同浓度(6． 25、12． 5、25、50、100μg /
ml)的 SAR对 BGC － 823 细胞株增殖的影响。取对数生长期
的培养细胞，用 0． 25%胰蛋白酶消化，以 1 × 105 /孔的密度接
·5801·现代肿瘤医学 2010 年 6 月 第 18 卷第 6 期
种于 96 孔板，每孔设 5 个复孔，并设调零孔(只有培养液)和
对照孔(以等量 PBS 代替药物)。贴壁后，加入不同浓度的
SAR，分别培养 24、48、72 小时，按常规方法操作后，用酶联免
疫仪测 490nm处的吸光度(A490)值。
抑制率(%)=(1 － A /A0)× 100%
A:各药物浓度组吸光值(均值) ，A0:未加药物组(对照
组)组吸光值(均值)。
1． 3． 3 流式细胞仪 检测不同浓度 SAR对 BGC － 823 细胞
株凋亡率的影响。将对数生长期的 BGC － 823 细胞株调整
浓度至 1 × 105 个 /ml，细胞悬液 2ml /孔接种于 6 孔板中，
37℃培养箱培养 24h 后分别加入 SAR 使其终浓度分别为
12． 5、25、50μg /ml，对照组加入等量的 RPMI 1640 培养液，继
续培养 24、48 和 72h，0． 25%胰酶消化、离心、弃上清液，PBS
洗 2 次 × 5min，离心去 PBS，用 250μl 结合缓冲液重悬细胞，
并使其浓度为 1 × 106 /ml，取 100μl 细胞悬液于 5ml 流式管
中，加入 5μl Annexin － V 和 10μl 的 PI 溶液，室温避光染色
15min，在反应管中加 200μl结合缓冲液，流式细胞仪分析。
1． 4 结果判断标准
双变量流式细胞仪所测得的散点图中，左下象限为活细
胞，表现为 Annexin － V － /PI －;右下象限为早期凋亡细胞，
表现为 Annexin － V + /PI －;右上象限为晚期凋亡和坏死细
胞，表现为 Annexin － V + /PI +;左上象限为操作损伤细胞，
表现为 Annexin － V － /PI +。以上各浓度组均为 3 复孔，最
后结果为 3 复孔的均值。
1． 5 统计学方法
结果以(珋x ± s)表示，采用 SPSS 16． 0 统计软件处理，不同
药物浓度之间比较采用单因素方差分析，两两之间比较采用
独立样本 t检验，P ＜ 0． 05 有统计学意义。
2 结果
2． 1 细胞形态学改变
SAR作用 24h、48h 后，阴性对照组的细胞贴壁生长良
好、饱满、边界清楚、细胞呈多角形、细胞透亮、折光性好、无
细胞碎片;SAR 组可见细胞数量减少、细胞变圆、边缘变钝、
悬浮、颜色变暗、折光性降低、有许多细胞碎片，随着 SAR 给
药剂量和作用时间的增加，细胞形态改变更加明显、漂浮的
死细胞逐渐增多。
2． 2 SAR对 BGC －823 胃癌细胞增殖的影响
浓度 6． 25、12． 5、25、50、100μg /ml 的 SAR 作用 BGC －
823细胞 24、48、72h 后，MTT 法检测细胞生长活性，可见随
SAR浓度的增大和作用时间的延长，细胞抑制率明显增加，
呈时间剂量依赖性，且具有统计学差异(P ＜ 0． 05，见表 1)。
表 1 SAR对 BGC － 823 胃癌细胞增殖抑制率的影响(%，珋x ± s)
组别
药物浓度
(μg /ml)
24h 48h 72h
对照组 0 0． 59 ± 1． 35 2． 06 ± 4． 25 2． 73 ± 2． 46
实验组 6． 25 15． 12 ± 3． 67 23． 62 ± 3． 75 30． 28 ± 4． 63
12． 5 24． 45 ± 3． 26 31． 13 ± 5． 31 42． 34 ± 3． 76
25 33． 53 ± 3． 27 50． 17 ± 3． 28 56． 37 ± 4． 52
50 45． 14 ± 2． 65 59． 45 ± 2． 71 67． 46 ± 2． 94
100 52． 36 ± 4． 75 70． 26 ± 2． 89 83． 75 ± 3． 26
注:SAR不同浓度组与对照组比较，不同浓度组之间比较以及不同时
间点比较均为 P ＜ 0． 05
2． 3 SAR对 BGC －823 胃癌细胞凋亡的影响
浓度 12． 5、25、50μg /ml的 SAR作用 BGC － 823 细胞 24、
48、72h后，AnnexinV － PI双标法检测其凋亡率，可见随 SAR
浓度加大和作用时间的延长，细胞凋亡率明显增高，与对照
组比较有显著性差异，组间两两比较，差异亦有统计学意义
(P ＜ 0． 05，见表 2)。
表 2 SAR对胃癌 BGC － 823 细胞凋亡率影响(%，珋x ± s)
组别
药物浓度
(μg /ml)
24h 48h 72h
对照组 0 3． 16 ± 2． 33 4． 52 ± 1． 56 5． 76 ± 2． 31
实验组 12． 5 12． 03 ± 2． 56 18． 24 ± 3． 23 25． 32 ± 3． 17
25 20． 11 ± 1． 78 26． 37 ± 2． 16 31． 58 ± 2． 49
50 27． 89 ± 2． 43 35． 16 ± 1． 97 39． 43 ± 2． 15
注:SAR不同浓度组与对照组比较，不同浓度组之间比较以及不同时
间点之间比较均为 P ＜ 0． 05
3 讨论
胃癌是当今最常见的恶性肿瘤之一［2］。预后较差，综合
治疗的疗效很有限。美国 5 年生存率在 5% － 15%之间;日
本较高，约 20% － 30%;我国约 20% － 25%。为此，寻找新
的治疗方法或药物显得尤为重要和迫切。
恶性细胞最基本的生物学行为即无限增殖(失控性生
长) ，是导致进一步浸润、转移的前提。细胞的增殖是通过细
胞分裂完成的，许多细胞毒药物的作用靶点就是阻止核酸合
成、干扰 mRNA转录、影响蛋白质合成和功能，破坏细胞分
裂，最终阻止细胞增殖。绝大部分天然植物药的细胞毒作用
很弱，但具有抑制恶性细胞增殖的作用，可能具有其他机制，
如促进细胞凋亡等。
肿瘤细胞凋亡的研究一直是肿瘤学研究的热点，尤其是
细胞凋亡与恶性肿瘤发生、生长的关系以及诱导肿瘤凋亡的
治疗更是目前肿瘤学基础研究的重点之一。体外细胞株和
临床癌组织的研究发现，胃癌细胞中存在有较高表达的 bcl
－ 2 蛋白。Kume 等［3］对胃癌组织切片进行免疫组化研究，
发现 bcl － 2 阳性率达 75%。胃癌组织中 Survivin 表达研究
显示［4］，34． 5%的胃癌组织表现不同程度的 Survivin 阳性表
达(20% －100%) ，其表达与 p53 的表达呈正相关，而与胃癌
凋亡指数呈负相关。研究表明［5］，肝癌、胃癌等恶性肿瘤细
胞在体外可诱导 Fas 介导的凋亡敏感的 T 淋巴细胞凋亡;
FasL阳性的胃癌患者易发生远处淋巴结转移。
近年来，人们发现了大量能诱导肿瘤细胞凋亡的药物，
如单抗 PD4 可诱导胃癌细胞 MGC －803 的凋亡，阻止细胞周
期［6］;李忌等［7］研究了薯蓣皂苷抗肿瘤活性，发现薯蓣皂苷
对肝癌 SMMC － 7721、胃腺癌 MGC － 803、人宫颈癌 HeLa 细
胞的抑制作用强于长春新碱(VCR)。
国内有学者研究证实［8 － 9］，SAR能诱导肝癌 HepG2 细胞
发生凋亡，是一种由 ROS作为早期信号触发的，并通过线粒
体介导的过程。同时，Ca2 +作为促使 ROS 信号爆发的必要
因素在整个过程中也起到关键作用。由 ROS 产生所造成的
细胞氧化还原状态的改变会进一步促使线粒体膜电位去极
化，活力下降，最终导致细胞色素 C的释放，进而活化一系列
凋亡执行蛋白，如 Caspase － 9，CasPase － 3，使凋亡最终完成。
此外，SAR可在体外比较明显的降低酪氨酸激酶的活性，因
此，推测 SAR可能通过抑制细胞的信号转导通路来诱导细
胞凋亡。
本实验结果表明，SAR对胃癌 BGC － 823 细胞株有抑制
生长作用，在 MTT实验中观察到，随着作用浓度的增加与时
·6801· MODERN ONCOLOGY，Jun. 2010，VOl. 18，NO. 6
间的延长，这种增殖抑制作用愈加明显，与对照组比较有显
著性差异(P ＜ 0． 05) ;本研究应用 AnnexinV － PI双标法检测
到 SAR可以明显诱导 BGC － 823 细胞发生凋亡，BGC － 823
胃癌细胞在 SAR浓度为 50μg /ml、作用时间为 72h时的凋亡
率达到 39． 43%，与对照组比较有显著性差异(P ＜ 0． 05)。
从本研究结果可以看出，菝葜皂苷有值得进一步研究、开发
的价值。
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(编校:张志明)
?头颈肿瘤?
ESR1 及其亚型 Δ5 － Del － ESR1 mRNA在泌乳素腺瘤中的表达
李储忠1，桂松柏1，刘方军2，张亚卓1
The mRNA expression of ESR and its subtypes in prolactionoms
LI Chu － zhong1，GUI Song － bai1，LIU Fang － jun2，ZHANG Ya － zhuo1
1Beijing Neurosurgical Institute，Neurosurgical Department of Beijing Tiantan Hospital，Beijing 100050，China;2Neurosurgical Department
of Sanbo Brain Institute，Beijing 100036，China．
【Abstract】 Objective:To research the mRNA expression of ESR and its subtypes in prolactionoms． Methods:To
determine the mRNA expression of ESR and its subtypes in 20 prolactinoma samples with RT － PCR． Results:
ESR1，ESR2 and Δ5 － Del － ESR1 mRNA expression were detected in all of the prolactinomas． Among them，ESR1
mRNA had a higher expression in male and postmenopausal female patients than those in fertile female and the inva-
sive prolactinomas were higher than noninvasive tumors． The ESR1 mRNA level and the Log PRL level had a linear
regression，R2 = 0． 665． On the contrary，the correlation between the mRNA expression of ESR2 and sex difference，
PRL level，tumor volume and tumor invasion in prolactionoms had no statistical significance． Δ5 － Del － ESR1 mRNA
levels in patients with PRL≥1000ng /ml were higher than those with PRL ＜ 1000ng /ml． Conclusion:The expression
of ESR1and Δ5 － Del － ESR1mRNA correlated with PRL secretion and tumor invasion in prolactinomas but the exact
mechanism need more researches．
【Key words】ESR1;Δ5 － Del － ESR1;RT － PCR;prolactinoma
Modern Oncology 2010，18(06) :1087 － 1098
【摘要】 目的:研究 ESR及其亚型 mRNA在泌乳素腺瘤中的表达。方法:应用 RT － PCR测定 20 例泌乳素腺
瘤标本 ESR1、ESR2 及 Δ5 － Del － ESR1 mRNA的表达，研究其表达水平与患者性别、肿瘤体积、侵袭性及 PRL
水平的关系。结果:男性和绝经后女性患者肿瘤 ESR1 mRNA表达高于育龄女性患者(P = 0． 08) ;侵袭性泌乳
素腺瘤高于非侵袭性肿瘤(P = 0． 01) ;表达水平与 PRL 的对数值呈正相关，R2 = 0． 665(P = 0． 00)。PRL≥
【收稿日期】 2009 － 09 － 17
【修回日期】 2009 － 12 － 25
【作者单位】 1北京市神经外科研究所，首都医科大学附属北京天坛医院，北京 100050
2北京三博脑科医院，北京 100036
【作者简介】 李储忠(1978 －) ，男，山东高密人，医学博士，住院医师，主要从事脑肿瘤的基础和临床研究。E － mail:lichuzhong@ 163． com
【通讯作者】 张亚卓(1957 －) ，男，黑龙江尚志人，医学博士，主任医师，教授，主要从事神经外科疾病的临床和基础研究。
·7801·现代肿瘤医学 2010 年 6 月 第 18 卷第 6 期