全 文 ：· 204· China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.3 中国药房 2007年第 18卷第 3期
*硕士研究生。研究方向:中药新剂型开发 。电话:025-
85637809。E-mail:binren99@sohu.com
#通讯作者:研究员 ,硕士研究生导师。研究方向:中药新制剂。电
话:025-85637809。E-mail:jxiaobin@yahoo.com.cn
反相高效液相色谱 -蒸发光散射检测法测定酸枣仁浓缩丸中菝葜皂苷元的含量
成旭东 1 ,2 *,贾晓斌 1 , 2# ,陈 彦 1 ,蔡 垠 1 ,2(1.江苏省中医药研究院 、江苏省现代中药制剂工程技术研究中心 ,
南京市 210029;2.江苏大学 ,镇江市 212013)
中图分类号 R283.622;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)03-0204-02
摘 要 目的:建立以反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定酸枣仁浓缩丸中菝葜皂苷元含量的方法 。方法:色谱柱为 Zor-
bax C 18 ,流动相为甲醇-水(90∶10),流速为 1.0mL ·min -1 ,漂移管温度为 85℃,气流速度为 1.71mL ·min -1。结果:菝葜皂苷元检测
浓度在 0.112 7 ～ 0.676 2mg ·mL -1范围内呈良好线性关系(r=0.998 3),平均加样回收率为 99.83%(RSD=0.93%)。结论:本
方法操作简便 、准确 ,重现性好 ,可用于酸枣仁浓缩丸的质量控制 。
关键词 酸枣仁浓缩丸;菝葜皂苷元;高效液相色谱-蒸发光散射检测法;含量测定
Determination of Sarsasapogenin in Jujube Seed Concentrated Pill s by RP-HPLC-ELSD
CHENG Xudong , JIA Xiaobin , CHEN Yan , CAI Yin(Jiangsu Prov incial Academy of Tradi tional Chinese
M edicine , Jiang su Engineering and Technology Research Center for Modern Chinese Pharmaceutical Prepa-
rations , N anjing 210029 ,China)
CHENG Xudong , JIA Xiaobin ,CAI Yin(Jiangsu University , Zhenjiang 212013 , China)
ABSTRACT OBJECTIV E:To de termine S arsasapogenin in Jujube seed concentra ted pills by RP-HPLC-ELSD.M ETH-
ODS:Separa tion o f Sarsasapogenin w as perfo rmed on Zorbax C 18 column wit h methanol-w ater (90:10)as a mobile phase at a
flow rate of 1.0mL ·min -1.The tempera ture o f the drift tube w as 85℃and t he air flow -ra te w as at 1.71mL ·min -1.RE-
SULTS:The linear range of S arsasapogenin w as 0.112 7 ～ 0.676 2mg ·mL -1(r =0.998 3).T he average recovery was
99.83%(RSD =0.93%).CONCLUSION :The method is simple , accu rate and reproducible , and suitable fo r the quality
contro l o f Jujube seed concentra ted pills.
KEY WORDS Jujube seed concen tra ted pills;Sarsasapogenin;RP-HPLC-ELSD;Assay ing
酸枣仁浓缩丸处方源于 《卫生部药品标准中药成方制剂》
第 7册(WS 3-B-1458-93)[1 ] ,由酸枣仁 、知母 、茯苓等 5味
药材组成 ,具有清热泻火 、养血安神的功效 ,临床上用以治疗顽
固性失眠 、更年期综合征 、心血管系统疾病等效果显著 [2 ]。由于
原制剂质量控制方法缺乏科学性 , 本文研究以知母中的菝葜皂
苷元含量为指标 ,采用反相高效液相色谱-蒸发光散射(RP-
HPLC-ELSD)检测法测定 ,结果表明该方法操作简便 、准确 ,
重现性好 ,可用于该制剂质量控制 。
1 材料
1.1 仪器
1100型高效液相色谱仪(美国 Agilent公司);2000ES型
蒸发光散射检测器 、 Allchrom Plus 工作站 (美国 Alltech 公
司);分析天平 (瑞士M ettler Toledo仪器有限公司);KQ -
100B超声清洗仪(江苏昆山市超声设备有限公司)。
1.2 试药
酸枣仁浓缩丸 (河南省宛西制药股份有限公司 , 规格 :
0.2g ·丸 -1 , 批号:20050301 、20050304 、20050306);菝葜皂苷
元(供含量测定用 , 中国药品生物制品检定所 , 批号:110744-
200205);甲醇为色谱纯 , 氢氧化钠(NaOH)、三氯甲烷为分析
醇 ,水为纯净水 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Zorbax C 18(150mm×4.6mm , 5μm);流动相:甲
醇-水(90∶10);流速:1.0mL ·min -1;柱温:30℃;漂移管温
度:85℃;气流速度:1.71mL ·min -1。
2.2 对照品溶液的制备
取菝葜皂苷元对照品适量 , 准确称定 , 加甲醇制成每 1mL
分别含 0.5mg 的溶液 ,即得 。
2.3 供试品溶液的制备
取本品适量 ,碾碎 ,取粉末 0.5g ,准确称定 ,加水 20mL ,加
盐酸 2mL , 回流 2h , 放冷 , 加入 40%NaOH调节 pH值至颜色
变成红褐色 , 氯仿萃取 3次 , 每次 40mL , 合并萃取液 , 水浴挥
干 ,加甲醇溶解 ,定容至 5mL ,过滤 ,即得 。
2.4 阴性样品溶液的制备
按酸枣仁浓缩丸的制备工艺 , 制备不含知母药材的模拟酸
枣仁浓缩丸 ,按“2.3”项下方法制备得阴性样品溶液 。
2.5 线性关系考察
准确称取菝葜皂苷元对照品适量 , 加甲醇稀释成含菝葜皂
苷元浓度为 1.127mg ·mL -1的贮备液 。精密量取贮备液 1 、2 、
3 、4 、5 、6mL ,置于 10mL 容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,
即得系列溶液 。按“2.1”项下色谱条件进行测定 ,记录色谱图 ,
详见图 1。以峰面积对数(Y)为纵坐标 ,浓度对数(X)为横坐标 ,
进行线性回归 ,得回归方程为 Y =1.669 1X +6.397 7(r=
0.998 3)。结果表明 ,菝葜皂苷元检测浓度在 0.112 7 ～ 0.676 2
中国药房 2007年第 18卷第 3期 China Pharmacy 2007 Vo l.18 No.3 · 205·
mg ·mL -1范围内呈良好的线性关系 。
2.6 精密度试验
取“2.3”项下供试品溶液 ,在“2.1”项色谱条件下 ,分别重
复进样 6次 ,测定菝葜皂苷元的峰面积 。结果 ,菝葜皂苷元峰面
积的相对标准差(RSD)为 0.23%,表明精密度较好 。
2.7 稳定性试验
取“2.3”项下同一供试品溶液 ,分别于 0 、1 、2 、4 、8 、12 、24h
进样测定 。结果 ,菝葜皂苷元峰面积 RSD=1.07%,表明供试
品溶液在 24h内稳定 。
2.8 重现性试验
按 “2.3”项下方法处理同一批样品 6份 , 进样 , 测定峰面
积 ,计算样品中菝葜皂苷元的含量 。结果 ,RSD=0.86%。
2.9 加样回收率试验
准确称取已知含量的酸枣仁浓缩丸样品 6份 , 分别精密加
入菝葜皂苷元对照品溶液 (浓度为 0.563 5mg ·mL -1)3mL ,
按“2.3”项下自“加水 20mL ……”起进行制备 ,测定 ,记录峰面
积 ,计算回收率 ,结果详见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
Tab 1 Results of recovery test
样品重量/g 样品含量/mg 添加量/mg 测得量/mg 回收率/ % x/ % RSD/ %
0.250 4 0.748 7 0.573 0 1.317 8 99.32
0.250 9 0.750 2 0.573 0 1.314 5 98.48
0.249 1 0.744 8 0.573 0 1.320 2 100.4
0.248 7 0.743 6 0.716 2 1.472 1 101.7
0.251 5 0.752 0 0.716 2 1.463 9 99.40 99.83 0.93
0.251 9 0.753 2 0.716 2 1.463 4 99.16
0.247 7 0.740 6 0.859 4 1.601 3 100.2
0.252 3 0.754 4 0.859 4 1.615 9 100.2
0.248 6 0.743 3 0.859 4 1.599 5 99.63
2.10 样品含量测定
按上述色谱条件与方法测定 3批酸枣仁浓缩丸中菝葜皂
苷元的含量 ,结果详见表 2。
表 2 样品含量测定结果(n=3)
Tab 2 Results of sample assaying(n=3)
批号 含量/mg·丸-1
20050301 0.66
0.66
20050304 0.66
0.66
20050306 0.65
0.65
3 讨论
菝葜皂苷元的含量测定方法有薄层扫描法 [3 , 4 ] 、HPLC
法 [5 , 6 ]等 ,与其它分析方法相比 ,HPLC法具有分离效能高 、重
现性好 、分析速度快 、方法简便等特点 , 故本文选择 RP -
HPLC法 , 以 C 18为固定相 、甲醇-水(90∶10)为流动相测定
酸枣仁浓缩丸中菝葜皂苷元的含量 。
本试验比较了称取样品加水温热溶解 、加等体积酸溶液
(水∶盐酸=10∶1)加热回流酸水解和药典方法 ,即乙醇回流
液加酸溶液加热回流水解 2种方法对其含量的影响 。结果表
明 , 直接加水温热溶解提取法测得含量 (0.68mg ·丸 -1)明显
高于药典中的乙醇超声提取法 (0.50mg ·丸 -1)。这可能与制
剂工艺相关 , 可能由于其它水溶性杂质干扰了乙醇超声提取法
提取菝葜皂苷元的效率 。本制剂中知母药材的提取方法为水提
取 。
本文比较了甲醇-水(95∶5 、90∶10 、85∶15)3种不同比
例流动相进行分离 。结果表明 ,采用甲醇-水(95∶5)时 ,菝葜
皂苷元的色谱峰分离效果不好 , 分离达不到基线;采用甲醇-
水(90∶10)时 ,菝葜皂苷元的色谱峰分离能达到基线 , 分离效
果理想;采用甲醇-水(85∶15)时 , 菝葜皂苷元的色谱峰理论
塔板数较低 ,分离时间长 。因此 ,本试验选择甲醇-水(90∶10)
为流动相进行分离 。
本文对比 75℃、85℃、95℃的漂移管温度对基线水平和噪
音的影响 ,选择分析效果较好的温度 85℃作为漂移管温度 。同
时对比了不同气体流速 , 结果气流速度达到 1.71mL ·min -1
时 , 分离效果较好且分离时间短。所以 , 本试验选用 85℃漂移
管温度 、1.71mL ·m in -1气流速度作为检测条件 。
本文建立了对酸枣仁浓缩丸中主药的含量进行定量分析
的方法 ,该方法亦适合于含有知母中药成方制剂的定量分析 。
参考文献
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皂苷元的含量[ J].中国药房 ,2003 , 14(8):496.
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(收稿日期:2006-04-23 修回日期:2006-07-26)