全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2013，28(4)∶395 ～ 397
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:81001606) ;霍英东教育基金(No． 121045) ;高等学校博士学科点专项科研基金(No．
20095132120004) ;四川省教育厅资助科研项目(No． 11ZB049) ;四川省十二五农作物育种攻关项目“突破性川产道地药材新品种选
育”子专题“濒危种质资源收集评价与新材料和新方法创制”(2011NZ0098 － 12 － 02)
作者简介:李青(1985—) ，正攻读生药学专业的硕士学位。
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:zhanghhx@ vip． sina． com
HPLC测定黑籽重楼中的皂苷含量并评价其药材质量
李 青1，文飞燕1，尹鸿翔2，张 浩1*
(1．四川大学华西药学院，四川 成都 610041;2．成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137)
摘要:目的 研究不同产地黑籽重楼中 10 种重楼皂苷的含量。方法 采用 HPLC － ELSD法，Kromasil RP － C18(250 mm ×4. 6
mm，5 μm)柱，流动相为乙腈 －水梯度洗脱，流速 1． 0 mL·min －1，柱温 30 ℃。氮气流速 1． 6 L·min －1，检测器漂移管温度45 ℃。
结果 测定了黑籽重楼药材中 10 种皂苷的含量，在线性范围内线性关系良好(r2 ＞ 0． 9998)。结论 所用方法测定重楼皂苷
准确，重复性好，可作为黑籽重楼药材质量控制的方法。
关键词:黑籽重楼;重楼皂苷;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2013)04 － 0395 － 03
Determination of saponins in Paris thibetica by HPLC
LI Qing1，WEN Fei － yan1，YIN Hong － xiang2，ZHANG Hao1*
(1． West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041 P． R． China;2． College of Ethnomedicine，Chengdu
University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，611137 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To determine the ten steroidal saponins in Paris thebetica Franch． from different habitats． METHODS
Chromatographic conditions included a Kromasil RP － C18 column(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，and the mobile phase consisted of aceto-
nitrile and water in gradient condition for separation． The flow rate was 1． 0 mL·min －1，and the column temperature was kept at 30 ℃ ．
The nebulizing gas flow rate was 1． 6 L·min －1，and the drift tube temperature for ELSD was set at 45 ℃ ． RESULTS The ten steroid-
al saponins in Paris thebetica Franch． were determined by this method，and showed a good linear relationshiop within the linear ranges
(r2 ＞ 0． 9998)． CONCLUSION This method determined steroidal saponins of Paridis rhizoma is accurate and reproducible，and can
be used for controlling the quality of Paris thebetica Franch．
Key words:Paris thebetica Franch;Paris saponin;Content determination;HPLC
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2013)04 － 0395 － 03
在 24 种重楼属植物中，中国分布约有 20 种，许
多种类现已濒临灭绝［1］。重楼来源于百合科植物
云南重楼 Paris polyphylla Smith var． yunnanensis
(Franch．)Hand． － Mazz． 或七叶一枝 花 Paris
polyphylla Smith var． chinensis(Franch．)Hara的干燥
根茎［2］，其主要化学成分为甾体皂苷。重楼具有止
血、祛痰、抑菌、镇痛、镇静、抗生育和抗细胞毒等作
用［3］。中国西南地区为重楼属药用植物的主要分
布区和药材主产区，除《中国药典》收载的品种外，
其余多数品种均在市面上流通。黑籽重楼 Paris thi-
betica Franch．在该地区广泛分布，在商品流通中占
较大比例，为了解该品种的化学成分特点、合理有效
地开发利用重楼药材，现对各产区的黑籽重楼进行
了化学成分的比较研究，测定了重楼皂苷的含量并
评价其品质。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
1200 高效液相色谱仪系统(美国 Agilent)。重
楼皂苷Ⅰ、Ⅱ对照品(中国药品生物制品检定所，批
号为:111590 － 200402、111591 － 200402) ;另外 8 个
重楼皂苷对照品(自制，纯度 ＞ 98%) ;重楼样品采
于西南地区各地，经张浩教授鉴定为黑籽重楼
(13 份) ，所有供试药材样品均有带花果的植物标本
及彩色照片以资对照，原植物标本及药材样品均存
放于四川大学华西药学院，药材样品信息见表 1;
甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余试剂为分
析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 色谱柱为 Kromasil RP － C18柱
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2013.04.014
表 1 样品基源及产地信息
Table 1 The detailed information of the paris thebetica franch．
No． 种类 产地 采集日期
1 黑籽重楼 四川安县高山乡 2009 － 5 － 6
2 黑籽重楼 四川崇州市鸡冠乡 2010 － 5 － 20
3 黑籽重楼 四川彭州白鹿镇 2009 － 4 － 21
4 黑籽重楼 四川彭州 2009 － 8 － 3
5 黑籽重楼 四川彭州 2010 － 5 － 19
6 黑籽重楼 四川什邡 2009 － 5 － 6
7 黑籽重楼 四川什邡 2009 － 5 － 6
8 黑籽重楼 四川崇州市 2009 － 7 － 13
9 黑籽重楼 四川崇州市 2009 － 5 － 12
10 黑籽重楼 四川宜宾屏山县龙华镇 2010 － 6 － 2
11 黑籽重楼 四川峨眉 2006 － 4
12 黑籽重楼 四川彭州白鹿 2009 － 4 － 21
13 黑籽重楼 四川芦山大川镇 2009 － 4 － 30
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(B)－水
(A) ，梯度洗脱:0 ～ 5 min、30% ～ 45% B，5 ～ 10
min、45% B，10 ～ 20 min、45% ～ 50% B，20 ～ 30
min、50% ～60% B，30 ～ 35 min、60% ～ 100% B;每
次分析样品后用 100% B 冲洗 5 min 后，再用 30%
B平衡 10 min。流速 1 mL·min －1，柱温30 ℃，ELSD
漂移管温度 45 ℃，氮气流速 1． 6 L·min －1，进样量
20 μL。
1． 2． 2 溶液的制备 分别精密称取各重楼皂苷对
照品，用甲醇溶解至一定浓度备用。混合对照品溶
液中 10 种对照品浓度分别为 0． 62、0． 68、1． 64、
1. 52、0. 84、0． 20、0． 94、0． 88、0． 78、0． 74 mg·mL －1，
化合物结构见图 1。重楼样品低温干燥后打粉过筛
(40 目)。精确称取约 0． 5 g 粉末，加入 50 mL 甲
醇，浸泡 4 h 后超声提取(0． 5 h × 2) ，合并滤液，回
收至干。加入甲醇溶解并定容至 10 mL，经 0． 45
μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
R1 R3 R5
R2 R4 R6
OH
HO
HO
HO
HO
HO
OH
OH
OH
OHHO
HO
Me
Me
HOHO
OH
OH
OO
O
O
HO
HO
OH
O
O
O
O
O
OH
OH
OHHO
O
O
O
O O
O
O
HO
HO
Me
Me
HO
HO
HO OH
OH
O O O
O
O
OH
OH
OH
OH
HO
HO
Me HO
HOOO
O
OH
OH
HO
OH
Me
IO
1: Pennogenin-R1
2: Pennogenin-R2
3: Pennogenin-R3
4: Pennogenin-R4
5: Pennogenin-R5
6: Pennogenin-R6
7: Diosgenin-R1
8: Diosgenin-R2
9: Diosgenin-R3
10: Diosgenin-R4
O
O
O
Diosgenin
O
OH
R-O
R-O
Pennogenin
图 1 10 种重楼皂苷的结构
Fig 1 Chemical structures of the ten saponins
1． 2． 3 线性关系考察 精密吸取 4、8、12、16、20、
60 μL混合对照品溶液，均稀释到 200 μL，以进样浓
度为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归。重楼
皂苷 1 ～ 10 的回归方程分别为:Y1 = 1． 4405X +
4. 1987(r2 = 0． 9987) ;Y2 = 1． 3189X + 3. 7829(r
2 =
0． 9982) ;Y3 = 1． 3275X + 4． 0596(r
2 = 0． 9998) ;Y4 =
1． 3069X + 4． 0539(r2 = 0． 9988) ;Y5 = 1． 2366X +
3. 5514(r2 = 0． 9987) ;Y6 = 1． 0135X + 3. 3049(r
2 =
0． 9992) ;Y7 = 1． 3456X + 4． 1125(r
2 = 0． 9961) ;Y8 =
1． 3207X + 4． 0488(r2 = 0． 9989) ;Y9 = 1． 2914X +
4. 1301(r2 = 0． 9990) ;Y10 = 1． 1494X + 4. 0058(r
2 =
0． 9943)。线性范围分别为 2． 48 ～ 37. 2、2． 72 ～
40. 8、6． 56 ～ 98． 4、6． 08 ～ 91． 2、3． 36 ～ 50． 4、2． 80 ～
12． 0、3． 76 ～ 56． 4、3． 52 ～ 52． 8、3． 12 ～ 46. 8、2． 96 ～
44． 4 μg·mL －1。在当前色谱条件，信噪比响应值分
别为 3、10 的条件下，检测限分别为 2、2、5、2、3、2、
2、3、2、2 μg·mL －1，定量限分别为 5、5、10、5、10、10、
5、5、5、5 μg·mL －1。
1． 2． 4 精密度试验 精密吸取 20 μL 混合对照品
溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件连续进样 5 次，重楼
皂苷 1 ～ 10 对照品峰面积的 RSD 分别为 1． 85%、
1. 20%、1. 74%、0． 71%、0． 82%、1． 17%、1． 32%、
1. 50%、1. 89%、1． 10%，表示方法精密度良好。
1． 2． 5 重复性试验 精密称取同一批样品(样品
10)5 份，按“1． 2． 3”项方法制备供试品溶液，按
“1. 2. 1”项下色谱条件分别进样 20 μL，测定 5 种重
楼皂苷的峰面积，计算皂苷 1、2、3、4、10 峰面积的
RSD 分别为 1． 41%、1． 33%、0． 95%、0. 83%、
1. 01%，表明方法的重复性较好。
1． 2． 6 稳定性试验 取同一批样品溶液(样品 10)
间隔 0、4、8、24、48 h，进样 5 次，按“1． 2． 1”项色谱
条件进样 20 μL，计算皂苷 1、2、3、4、10 峰面积的
RSD 分别为 1． 55%、1． 03%、0． 88%、1． 12%、
1. 47%，表明供试品溶液稳定性良好。
1． 2． 7 加样回收试验 精密称取 5 份已知含量的
同一批药材(样品 10) ，精密加入皂苷混合对照品溶
液适量，按“1． 2． 3”项下方法制备供试品溶液，在
“1． 2． 1”项色谱条件下测定重楼皂苷 1、2、3、4、10
693 华 西 药 学 杂 志 第 28 卷
的峰面积，计算重楼皂苷 1、2、3、4、10 的平均加样回
收 率 分 别 为 102． 83%、94． 33%、98． 02%、
101. 26%、95． 68%;RSD 分别为 1． 83%、2． 24%、
1. 45%、1. 76%、1． 97%。
1． 2． 8 样品的测定 精密称取约 0． 5 g 不同产地
的重楼药材粉末。按“1． 2． 2”项下方法制备供试品
溶液，按“1． 2． 1”项下色谱条件进样 20 μL，测得各
色谱峰的峰面积，计算各样品的皂苷含量(表 2)。
色谱图见图 2。
表 2 黑籽重楼样品中 10 种皂苷的含量(%)
Table 2 Contents of the 10 saponins in the tested samples(%)
No． 化合物 1
(重楼皂苷Ⅶ)
化合
物 2
化合物 3
(重楼皂苷 H)
化合物 4
(重楼皂苷Ⅵ)
化合
物 5
化合
物 6
化合物 7
(重楼皂苷Ⅱ)
化合物 8
(纤细薯蓣苷)
化合物 9
(重楼皂苷Ⅰ)
化合物 10
(重楼皂苷Ⅴ)
皂苷(Ⅰ +Ⅱ +
Ⅵ +Ⅶ)
总皂
苷量
1 0． 040 0． 029 0． 067 0． 020 － － － － － － 0． 060 0． 156
2 0． 045 － 0． 168 0． 108 － － － － － 0． 041 0． 153 0． 362
3 0． 107 － 0． 155 － － － － － － 0． 008 0． 107 0． 270
4 0． 154 0． 037 0． 154 0． 073 － － － － － － 0． 227 0． 418
5 0． 052 － 0． 054 － － － － － － － 0． 052 0． 106
6 － － 0． 018 － － － － － － － 0 0． 018
7 － － 0． 067 － － － － － － － 0． 067 0． 067
8 0． 196 － 0． 177 0． 024 － － 0． 062 － 0． 182 0． 159 0． 464 0． 800
9 0． 078 0． 039 0． 348 0． 417 － － － － － 0． 029 0． 495 0． 911
10 － － 0． 033 0． 087 － － 0． 022 － 0． 040 0． 515 0． 149 0． 697
11 － 0． 031 0． 039 0． 509 － － － － － 0． 083 0． 509 0． 662
12 － － 0． 045 － － － － － － － 0 0． 045
13 0． 219 0． 044 － 0． 196 － － － － － － 0． 415 0． 459
重
楼
皂
苷
Ⅶ
化
合
物
2 重
楼
皂
苷
H
重
楼
皂
苷
Ⅵ
化
合
物
5
化
合
物
6
重
楼
皂
苷
Ⅱ
纤
细
薯
蓣
苷
重
楼
皂
苷
Ⅰ
重
楼
皂
苷
Ⅴ
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35
A
0 5 10 15 20 25 30 35
B
图 2 对照品(A)和黑籽重楼(B)溶液的 HPLC图
Fig 2 HPLC chromatograms of control solution(A)and Paris
thibetica Franch． solution(B)
2 讨论
甾体皂苷几乎无紫外吸收，文中采用 HPLC －
ELSD检测方法对不同产地黑籽重楼的 13 个样品进
行了分析，结果表明:文中方法能在 35 min 内将 10
种重楼皂苷完全分离，检测灵敏度较好。从表 2 可
看出:黑籽重楼主要含有偏诺皂苷(重楼皂苷Ⅶ、化
合物 2、重楼皂苷 H和重楼皂苷Ⅵ) ，13 个样品中有
12 个样品含有重楼皂苷 H，且含量相对较高。重楼
皂苷 H 有一定的抗肿瘤活性［4］，因此，也部分说明
了黑籽重楼在西南民间广泛入药的科学内涵。黑籽
重楼中的薯蓣皂苷包含有重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅰ
和重楼皂苷Ⅴ。其中，13 个样品中有 6 个含有重楼
皂苷Ⅴ，只有样品 8 和 10 含有重楼皂苷Ⅰ和重楼皂
苷Ⅱ。样品 1、4、5、6、7、12、13 中都不含薯蓣皂苷，
占所测样品的一半以上，说明黑籽重楼中薯蓣皂苷
分布少，含量低。什邡地区采的两个样品中只含有
重楼皂苷 H。样品 3、4、5、12 均采自彭州，4 号样品
于 8 月份采收，含量高于其他时间采收的重楼样品，
说明采收时间对重楼的品质有一定的影响。崇州采
集样品 8、9 的含量与其他品种相比，重楼总皂苷含
量高于其他产地，且重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ之和与其
他产地的样品比较也相对较高。13 个样品均不含
有化合物 5、6 和 8。2010 版《中国药典》规定重楼
皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的总量不得少于 0. 60%。从表 2
可以看出:13 个黑籽重楼样品均不符合药典标准，
样品 11 的含量高于同种重楼其他样品，采于峨眉山
区。峨眉山区由于特殊的地形、充沛的雨量、多样的
气候和复杂的土壤结构，适于重楼等中药材的生长。
不过此次只测定了两个峨眉山区的样品，不能完全
确定此地区的重楼品质高于其他地区，也可能是个
体差异。
参考文献:
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收稿日期:2012 － 10 － 23
793第 4 期 李 青，等。HPLC测定黑籽重楼中的皂苷含量并评价其药材质量