全 文 ：作者简介 汪忠波(1971-),男,湖北孝感人,在读硕士,讲师,从事中药
新制剂与分子生物学研究。*通讯作者,硕士生导师,副教
授,E!mail:amz25@163.com。
收稿日期 2007!05!15
竹节参(PanaxjaponicusC.A.Mey)[1]始载于《百草镜》,
在《本草纲目拾遗》中也有记载,别名竹节三七[2]、竹根七[3],
为五加科植物,以干燥竹鞭、根、茎入药,具我国北药人参和
南药三七的功用,有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰、健脾和
胃等功效[4],其主要成分为齐墩果酸型皂甙[5]。齐墩果酸型皂
甙的定量分析方法有分光光度法、薄层色谱法和高效液相
色谱法。笔者建立了分光光度法测定竹节参中齐墩果酸皂
甙的含量,所用方法简便、快捷,结果相对准确,重复性好。
1 材料与方法
1.1 材料 WFZV!2100型紫外可见分光光度计(尤尼可上
海仪器有限公司);METTLERAE100分析天平(电子天平)
1/10000天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);KWY!300!1
型电热干燥箱(武汉市武昌实验仪器厂);H.H.S!4S型电热
恒温水浴锅(上海天平仪器厂);植物样本粉碎机(北京周口
地区五七农业机械厂);RE!52A旋转蒸发器(上海亚荣生化
仪器厂);移液枪;喷雾瓶;薄层色谱展开缸;微量进样器(上
海高欣玻璃仪器厂);小型真空泵;布氏漏斗;抽滤瓶;干燥
器等。
齐墩果酸标准品(纯度>98%,北京市生物制品研究所);
香草醛(分析纯,中国医药集团上海化学试剂公司);95%乙
醇、甲醇(分析纯,上海振兴化工一厂);乙酸(分析纯,广东
汕头市西陇化工厂);高氯酸(分析纯,天津东方化工厂);试
验用水为去离子水。竹节三七来自湖北恩施。
1.2 方法
1.2.1标准溶液的配制。精密称取50℃减压干燥至恒重的
齐墩果酸标准品12mg,用甲醇溶解并定容至 10ml容量瓶
中,即得标准品溶液。
1.2.2 样品溶液的制备。准确称取粉碎的竹节参干粉(过
100目筛)10.00g,置 250m1圆底烧瓶中,加入 20倍量的
70%乙醇在 80℃的水浴锅中加热回流提取 2h,过滤后将
滤液浓缩成干浸膏,用50m1水将浸膏溶解,然后用石油醚
萃取2次去脂,萃余相用等体积正丁醇萃取3次,正丁醇萃
取液合并浓缩,用水溶解并定容在50m1的容量瓶中,备用。
1.2.3 吸光度的测定。吸取标准品溶液(或样品溶液)适量
置10ml具塞试管中,水浴蒸干,待冷却后分别加入 5%的
香草醛-冰醋酸溶液0.2ml,振摇溶解后加入高氯酸0.8ml,
摇匀后置于 70℃水浴中加热 15min,然后流水冷却,再各
加入冰醋酸5ml,充分振摇后静置10min,测其在最大吸收
波长处的吸光度值。
2 结果与分析
2.1 线性关系的考察 分别吸取标准品溶液 0、30、40、50、
60、70、80、90、100μl,依“1.2.3”方法,在相同条件下,测其在
最大吸收波长处的吸光度值。以标准品的浓度为纵坐标,吸
光度值为横坐标,绘制标准曲线,经计算得回归方程为:C=
20.259A+0.2989,r=0.9976,线性范围为0.036～0.120mg/ml。结
果见图1。
2.2 精密度试验 精密吸取5份齐墩果酸标准品溶液 100
μl,依“1.2.3”方法,在相同条件下,测定其吸光度值分别为
0.563、0.564、0.559、0.561、0.558,得 RSD=0.45%,表明该方
法测定竹节参中齐墩果酸型皂甙的含量精密度良好。
2.3 稳定性试验 取样品溶液 20μl,依“1.2.3”方法,于 0、
10、20、30、40、50、60、90min时测得其吸光度值分别为
1.048、1.037、1.029、1.022、1.019、1.016、1.011、1.006,得RSD=
分光光度法测定竹节参中齐墩果酸皂甙含量
汪忠波 1,2,敖明章 2*(1.湖北职业技术学院医学院,湖北孝感 432000;2.华中科技大学生命科学与技术学院,湖北武汉 430074)
摘要 [目的]建立测定竹节参中齐墩果酸皂甙含量的方法。[方法]采用分光光度法,以香草醛-高氯酸显色,在波长 545nm处测定吸
光度。[结果]齐墩果酸线形关系良好,线性范围为0.036～0.120mg/ml(r=0.9976),平均回收率为98.81%,RSD=1.32%(n=5)。[结论]所
用方法结果准确,重复性好,专属性强,可用于竹节参中齐墩果酸皂甙含量的测定。
关键词 竹节参;齐墩果酸皂甙;分光光度法
中图分类号 Q63 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2007)26-08094-02
DeterminationofOleanolicAcidSaponininPanaxjaponicusC.A.MeywithSpectrophotometry
WANGZhong!boetal(HubeiVocationalandTechnicalColege,Xiaogan,Hubei432000)
Abstract [Objective]MethodfordetectingthecontentofoleanolicacidsapoininPanaxjaponicusC.A.Meywasestablished.[Method]
Absorbanceinλmax545nmwasdetectedbyusingspectrophotometryandvanilinandperchloricacidaschromogenicagents.[Result]Linear
relationsofoleanolicacidweregood.Thelinearrangeofoleanolicacidwas0.036~0.120mg/ml(r=0.9976)andtheaveragerecoveryofoleanolic
acidwas98.81% (RSD=1.32%,n=5).[Conclusion]Themethodwasaccurateandreproducibleandcouldbeusedtodeterminethecontentof
oleanolicacidsapoin.
Keywords PanaxjaponicusC.A.Mey;Oleanolicacidsaponin;Spectrophotometry
安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(26):8094-8095 责任编辑 金琼琼 责任校对 王 淼
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2007.26.081
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低分子量的多糖,这一部分多糖在红枣多糖中也只占很少
一部分,40%～80%醇浓度沉淀出的应是一些中等分子量
的多糖,这一部分多糖在红枣多糖中占很大比例,且以60%
和70%醇浓度沉淀出的多糖比例最大。这表明红枣多糖中
以中等分子量的多糖比例最高。
3 讨论
试验结果表明,红枣多糖提取的最优工艺条件为料液
比1∶15、浸提温度100℃、提取时间6h、提取2次,该条件下
多糖得率为3.76%。目前,在植物多糖的提取中引入了一些
新技术、新方法如酶法、超声提取法、微波提取法等,这些新
技术对红枣多糖的提取效率如何,尚需进一步研究。此外,
该试验还通过分级及分布醇沉的方法探讨了红枣多糖分子
量的分布范围,发现在10%~90%的醇浓度范围内均有分布,
以 60%~70 %醇浓度沉淀出的中等分子量的多糖比例最
高,但不同醇沉部分的活性尚待研究。
参考文献
[1]王军,张宝善,陈锦屏.红枣的营养成分及其功能研究概况[J].食品
研究与开发,2003,24(2) :68-72.
[2]陈蕙黎.糖复合物的结构与功能[M].上海:上海医科大学出版社,
1996.
[3]闫巧娟,韩鲁佳,江正强,等.黄芪多糖分子量的分布研究[J].食品科
学,2004,25(8) :27-31.
1.36%,表明该方法制备的供试品溶液的稳定性良好。
2.4重复性试验 取5份竹节三七粉各 10.00g,按照样品
溶液制备方法制得样品液,每份取20μl测定样品中齐墩果
酸含量,计算5份样品的含量分别为5.38%、5.36%、5.26%、
5.33%、5.28%,得 RSD为 1.03%,说明该法测定竹节参中
齐墩果酸型皂甙含量的重复性较好。
2.5回收率试验 精密吸取已知齐墩果酸型皂甙浓度为
12mg/ml的样品溶液5份,每份取10μl,分别精密加60.0、120.0、
180.0、240.0、3 0.0μg齐墩果酸对照品溶液,测定结果并计
算回收率及RSD,结果见表1。
2.6样品的测定 取不同产地竹节参 5批,按“1.2.2”制备
供试品溶液,依“1.2.3”方法,在相同条件下,测定吸光度值,
计算齐墩果酸型皂甙的含量,结果见表2。
3 小结与讨论
采用分光光度法测定竹节参中齐墩果酸型皂甙的含
量,并从准确度和精密度两方面对测定方法的可靠性进行
了验证。结果表明:该方法具有操作简便、重现性好、精密度
和回收率高等优点。
通过预试验可知,香草醛-浓硫酸试剂比色效果不够
好,试剂的空白吸收值较高,对分析样品的测定干扰较大,
而香草醛-高氯酸试剂中空白对照品的测定几乎无干扰,显
色灵敏度高,方法重现性好。
竹节参齐墩果酸型皂甙与香草醛-高氯酸的反应非常
灵敏,测定过程较简单,但显色温度、时间对试验结果影响
较大。因此在含量测定过程中,应严格控制显色时间和温
度。通过查资料和试验摸索,以 0.2ml新配制的香草醛-冰
醋酸、0.8m1高氯酸的显色剂配比为宜。显色剂过多或过
少,导致反应不完全,在测定过程中不稳定,或在不适宜的
范围内误差较大。反应时间以 15min为宜,过短则反应不
完全,过长则空白颜色加深,误差加大。加入冰醋酸测定吸
光度值前,容器一定要用流水冷却,保证反应及时终止,稳
定平行测定。显色前一定要充分振摇,否则试验误差较大,
且所用容器必须充分干燥,否则会对测定结果有干扰。5%
香草醛-冰醋酸溶液必须现配现用,如果放置时间过长,显
色灵敏度会下降。
参考文献
[1]《中国药典》编篡委员会.中国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:
93.
[2]赵学敏.本草纲目拾遗[M].北京:人民卫生出版社,1957:74-75.
[3]范崔生.中药采收鉴别应用全书 [M].南昌:江西科技出版社,1995:347-
348.
[4]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科技出版社,1985:
417-420.
[5]顿耀艳,袁丁.竹节参化学成分的研究进展[J].时珍国医国药,2006
(17) :16.
序号
加入量
μg
测得量
μg
回收率
%
平均回收率
%
RSD
%
1 60.0 174.23 96.79 98.81 1.32
2 120.0 240.52 100.22
3 180.0 297.35 99.12
4 240.0 358.12 99.48
5 300.0 413.39 98.42
表1 加样回收率试验结果
1 0.0558 0.0559 0.0558 0.0558
2 0.0543 0.0540 0.0538 0.0540
3 0.0522 0.0527 0.0519 0.0522
4 0.0557 0.5580 0.0554 0.0556
5 0.0532 0.0534 0.0538 0 0534
1 2 3
样品
重复
平均
表2 样品中齐墩果酸型皂甙含量的测定结果 mg/g
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汪忠波等 分光光度法测定竹节参中齐墩果酸皂甙含量35卷26期
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顷)、m2(平方米),不用亩、尺 2等;质量用 t(吨)、kg(千克)、mg(毫克),不再用担等;表示浓度的 ppm一律改用 mg/kg、
mg/L或μl/L。
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