全 文 ：第 33卷第 2期
2010年 4月
云南中医学院学报
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
Vol. 33No. 2
4.2010
西南山茶花化学成分的定量分析＊
侯　蕾 , 唐　玲 , 史丽颖 , 冯宝民 , 王永奇■
(大连大学药物研究所 , 辽宁大连　116622)
[摘　要 ] 目的:旨在测定西南山茶花醇提物 、 花的醇提物乙酸乙酯萃取物 、 水层中总皂苷 、 总多酚 、 总黄
酮的含量。方法:采用紫外分光光度法。结果:其总皂苷 、 总多酚 、 总黄酮的含量依次为:西南山茶花醇提物
12.15%, 32.4%, 3.27%;花的醇提物乙酸乙酯萃取物 25.86%, 37.0%, 8.64%;水层 5.78%, 12.76%,
0.34%.结论:紫外分光光度法测定以上三种物质简便易行 , 准确可靠 , 重现性较理想 , 回收率较好。
[关键词 ] 西南山茶花;总皂苷;总多酚;总黄酮;含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标志码:A　　文章编号:1000— 2723(2010)02— 0025— 04
西南山茶系山茶科 (Theaceae)山茶属 (Ca-
melia)植物 , 为 《中华本草 》 和 《滇南本草 》 所
收载。具有活血止血 、 收敛止泻 、 解毒敛疮之功
能 。主治月经不调 、 月经过多 、 肠风下血 、 吐血 、
急性肠胃炎 、 痢疾 、 脱肛 、 白带 、 遗精 、 风湿痹
痛 、烧伤。在云南各地分布甚广 , 同时还自云南西
北部分布到贵州的西部 , 四川中部 、 湖南西北部及
广西西北部 , 所以资源非常丰富。我们的前期试验
结果发现其叶具有非常强的抗 IgE介导的Ⅰ型过敏
的作用 , 为了扩大西南山茶的药用部位 , 我们对其
花的化学成分进行了定量分析 。本文以皂苷 、多
酚 、黄酮类成分为指标 , 西南山茶花醇提物 、 花乙
酸乙酯萃取物 、 水层中化学成分进行了分析测定 ,
现报告如下 。
1　仪器与试药
1.1　仪器
Unico7200可见分光光度计 (尤尼柯上海仪器
有限公司);Laborata4000型旋转蒸发仪 (Heidol-
ph公司);BP210S十万分之一电子天平 (Sartorius
公司);Jascov﹣ 2560紫外可见分光光度计 (JAS-
CO日本分光株式会社)。
1.2　试药
西南山茶花采集于广西由昆明植物所裴盛基教
授鉴定;芦丁 (纯度 98%);齐墩果酸 (中国药品
生物制品检定所 , 批号:1107092200304, 纯度
98%以上);没食子酸 (中国药品生物制品检定
所 , 批号:1205632200412 , 纯度 99.1%);所用
试剂均为分析纯;实验用水为蒸馏水。
2　实验部分
2.1　总皂苷的含量测定 [ 1]
2.1.1　对照品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品 20 mg,
置 100mL容量瓶中 , 加入甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 , 得 0.200 mg·mL-1的对照品溶液 , 备用 。
2.1.2　供试品溶液的制备
精确称取西南山茶不同提取溶剂提取部位的干浸
膏 Ag, 置 50mL容量瓶中加入甲醇溶解并稀释到刻
度 , 摇匀 , 得浓度为 Bmg·mL-1的溶液 , 备用。
2.1.3　测定波长的选择
齐墩果酸对照品溶液和供试品溶液香草醛 -冰
醋酸 -高氯酸显色后 , 在紫外可见分光光度计上 ,
波长 400 ～ 800nm区间扫描 。均在 551nm处有最大
吸收 , 因此选择 551nm为测定波长 , 测得的结果
以齐墩果酸为基准计算总皂苷的含量。
2.1.4　线性关系考察
精确吸取齐墩果酸标准溶液 0.1, 0.2, 0.3,
25
＊基金项目:国家自然科学基金 (NO:30772714)
收稿日期:2009— 10— 21　　修回日期:2009— 11— 26
作者简介:侯蕾 (1985 ～ ), 女 , 山西榆次人 , 硕士研究生 , 主要从事天然活性成分的研究。 ■通讯作者:王永奇。
Tel:(0411) 87403834, E-mail:dalianwyq@163.com
2010年 云南中医学院学报 第 33卷
0.4, 0.5和 0.6 mL分置于具塞试管中 , 挥去甲
醇 , 精密加入 5%香草醛 -冰醋酸溶液 (新鲜配
制)0.2mL, 高氯酸 0.8 mL, 摇匀 , 于 60℃水浴
中加热 15min后 , 置冰浴中冷却。加冰醋酸 5 mL,
摇匀 , 立即在 551nm波长下测定吸光度 A, 同时以
试剂空白做参照。以浓度 C(mg· mL-1)为纵坐
标 , 吸光度 A为横坐标 , 绘制标准曲线 。得到回
归方程 C=0.0284A+0.00082 (r=0.9991)线性
范围:0.014 ～ 0.030mg· mL-1。
2.1.5　显色反应精密度考察
精确吸取 CmL的供试品溶液 , 置于具塞试管
中 , 挥去甲醇 , 照标准曲线项下的方法操作 , 平行
做 5次实验 , 测定吸光度 A, 代入回归方程 , 计算
总皂苷的含量。结果见表 2 (注:A、 B、 C的数据
见表 1)。
表 1　西南山茶不同提取溶剂提取部位总皂
西南山茶花不同提取溶剂提取部位 A/g B/mg· mL-1 C/mL
西南山茶花醇提物 0.1304 2.608 0.15
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 0.1103 2.206 0.1
西南山茶花水层 0.1326 2..652 0.2
表 2　总皂苷含量测定结果表
西南山茶不同提取溶剂提取部位 含量平均值 /% RSD/%
西南山茶花醇提物 12.15 0.3
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 25.86 0.15
西南山茶花水层 5.78 0.09
2.1.6　重现性实验
取西南山茶的花 0.5 kg, 用 95%乙醇提取 ,
得醇提物浸膏 , 平行进行 5组实验。精确称取干燥
至恒重的醇提物干浸膏 , 置 100 mL容量瓶中加入
甲醇溶解并稀释到刻度 , 摇匀 , 得不同浓度的溶
液 , 备用。精确吸取 0.15 mL的供试品溶液 , 置于
具塞试管中 , 挥去甲醇 , 照标准曲线项下的方法操
作 , 平行做 5次实验 , 测定吸光度 A, 代入回归方
程 , 计算总皂苷的含量 , 结果为 12.56%, RSD为
1.06%.
2.1.7　加样回收率实验
精确吸取已知总皂苷含量的供试品提取液
0.15mL, 置于具塞试管中 , 分别加入 0.200mg·
mL-1的齐墩果酸对照品溶液 0.1mL, 余下部分按
标准曲线项下的方法操作 , 平行测定 5次 , 计算加
样回收率 , 结果见表 3。
表 3　总皂苷测定的加样回收率实验
试品量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
19.0 20 38.3 98.2
19.0 20 38.7 99.2
19.0 20 39.4 101.0 99.7 1.10
19.0 20 38.9 99.7
19.0 20 39.2 100.5
2.2　多元酚的含量测定 [ 2-3]
2.2.1　对照品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的没食子酸对照品 50μg,
置 100mL棕色容量瓶中 , 加水溶解并稀释到刻度 ,
摇匀 , 得浓度为 50μg· mL-1的对照品溶液 , 备
用。
2.2.2　供试品溶液的制备
精确称取西南山茶花不同提取溶剂提取部位的
干浸膏 Dg, 置 50mL容量瓶中 , 加水溶解并稀释
至刻度 , 摇匀 。过滤 , 弃去初滤液 50mL, 得浓度
为 Emg· mL-1供试品溶液备用。
2.2.3　测定波长的选择
没食子酸对照品溶液和供试品溶液经磷钼钨酸
-碳酸钠显色后 , 在紫外可见分光光度计上 , 波长
400 ～ 1 000nm区间扫描。均在 754 nm处有最大吸
收 , 因此选择 754 nm为测定波长 , 测得的结果以
没食子酸为基准计算总酚的含量 。
2.2.4　线性关系考察
精确吸取没食子酸标准溶液 0.2, 0.4, 0.6,
0.8, 1.0 mL分别置 10mL棕色容量瓶中 , 各加水
2mL, 再分别加入磷钼钨酸试液 1mL, 再加 29%
Na2CO3溶液 2 mL, 用水稀释至刻度 , 摇匀 , 以相
应的试剂为空白 , 30 min后 , 在 754 nm波长下测
定吸光度 A。以浓度 C(mg· mL-1)为纵坐标 ,
吸光度 A为横坐标 , 绘制标准曲线。得到回归方
程 C=0.0063A-0.00004 (R2 =0.9995)线性范
围:0.001 ～ 0.005mg/mL。
2.2.5　显色反应精密度考察
精确吸取 FmL的供试品溶液 , 分别置于
10 mL的棕色容量瓶中 , 照标准曲线项下的方法操
26
第 2期 侯　蕾 , 等:西南山茶花化学成分的定量分析　　　　　　　　　　　　　　
作 , 同法测定吸收值 , 各平行测定 5次 , 在754nm
处测定吸光度 A, 代入回归方程 , 计算总酚的含
量 。结果见表 5 (注:D、 E、 F的数据见表 4)
表 4　西南山茶不同提取溶剂提取部位测总酚的实验数据
西南山茶不同提取溶剂提取部位 D/g E/mg· mL-1 F/mL
西南山茶花醇提物 0.1195 2.390 2.0
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 0.1278 2.556 1.0
西南山茶花水层 0.1558 3.116 4.0
表 5　总酚含量测定结果表
西南山茶不同提取溶剂提取部位 含量平均值 /% RSD/%
西南山茶花醇提物 32.40 0.13
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 37.00 0.10
西南山茶花水层 12.76 0.06
2.2.6　重现性实验
取西南山茶的花 0.5kg, 用 95%乙醇提取 , 回
收溶剂得醇提物浸膏 , 平行进行 5组实验 。精确称
取 0.200g干燥至恒重的醇提物干浸膏 , 置 100 mL
容量瓶中 , 加水溶解并稀释至刻度 , 摇匀。过滤 ,
弃去初滤液 50 mL, 精密量取 20mL, 置 100mL棕
色容量瓶中 , 用水稀释至刻度 , 摇匀 , 得供试品溶
液;精确吸取 1 mL的供试品溶液 , 分别置于
10 mL的棕色容量瓶中 , 照标准曲线项下的方法操
作 , 同法测定吸收值 , 各平行测定 5次 , 在754nm
处测定吸光度 A, 代入回归方程 , 计算总酚的含量
为 32.64%, RSD为 0.76%.
2.2.7　加样回收率实验
精确吸取已知总酚供试品试液 1.0 mL置于
10 mL棕色容量瓶中 , 分别加入 50 μg· mL-1的没
食子酸标准溶液 1.0 mL余下部分按标准曲线项下
的方法操作 , 平行测定 5次 , 计算加样回收率 , 结
果见表 6。
表 6　总酚测定的加样回收率
试品量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
8.80 10.00 18.80 100.00
8.80 10.00 18.82 100.20
8.80 10.00 18.77 99.70 100.04 0.21
8.80 10.00 18.81 100.10
8.80 10.00 18.82 100.20
2.3　总黄酮的含量测定 [ 4-5]
2.3.1　对照品溶液的制备
精确称取干燥至恒重的对照品 10μg, 置50 mL
容量瓶中 , 加入甲醇溶解并稀释到刻度 , 摇匀 , 得
浓度为 0.20 mg· mL-1的对照品溶液 , 备用。
2.3.2　供试品溶液的制备
精确称取西南山茶花的不同提取溶剂提取物的
干浸膏 Gg, 置 50 mL容量瓶中加入甲醇溶解并稀
释至刻度 , 摇匀 , 得 Hmg· mL-1的溶液 , 备用 。
2.3.3　测定波长的选择
对照品溶液和供试品溶液 AlCl3显色后 , 在紫
外可见分光光度上 , 波长 200 ～ 600nm区间扫描。
均在 420nm处有最大吸收 , 因此选择 420nm为测
定波长。测得的结果以对照品为基准计算总黄酮的
含量 。
2.3.4　线性关系考察
精密吸取对照品溶液 0.0, 1.0 , 1.5, 2.0,
2.5 mL, 再加 10%AlCl3溶液 2.0mL, 再分别加入
pH=4NaAc-HAc缓冲溶液 3.0 mL, 各加 60%甲
醇 -水至 10.0 mL摇匀 , 室温放置 10 min, 在
420 nm波长下测定吸光度 A, 同时以试剂空白做参
比。以浓度 C(mg· mL-1)为纵坐标 , 吸光度 A
为横坐标 , 绘制标准曲线。得到回归方程 C=
0.0608A-0.0001 (r=0.9998)线性范围:0.012
～ 0.048mg· mL-1。
2.3.5　显色反应精密度考察
精确吸取 ImL的供试品溶液 , 置于试管中 ,
按照标准曲线项下的方法操作 , 测定吸光度 , 平行
做 5次实验 , 代入回归方程 , 计算总黄酮的含量。
结果见表 8 (注:G、 H、 I的数据见表 7)
表 7　西南山茶不同提取溶剂提取部位测总黄酮的实验数据
西南山茶不同提取溶剂提取部位 G/g H/mg· mL-1 I/mL
西南山茶花醇提物 0.2589 5.178 2.0
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 0.1203 2.406 1.0
西南山茶花水层 0.8062 16.124 2.0
表 8　总黄酮含量测定结果表
西南山茶不同提取溶剂提取部位 含量平均值 /% RSD/%
西南山茶花醇提物 3.27 0.08
西南山茶花乙酸乙酯萃取物 8.6 0.09
西南山茶花水层 0.22 0.06
27
2010年 云南中医学院学报 第 33卷
2.3.6　重现性实验
取西南山茶的种子 0.5 kg, 用 95%乙醇提取 ,
回收溶剂得醇提物浸膏 , 醇提物平行进行 5组实
验 。精确称取干燥至恒重的醇提物干浸膏 , 置 100
mL容量瓶中加入甲醇溶解并稀释到刻度 , 摇匀 ,
得不同浓度的溶液 , 备用 。精确吸取 3.0 mL的供
试品溶液 , 置于试管中 , 按照标准曲线项下的方法
操作 , 测定吸光度 , 平行做 5次实验 , 代入回归方
程 , 计算总黄酮的含量为 4.05%, RSD为 1.10%.
2.3.7　加样回收率实验
精确吸取已知总黄酮含量的供试品提取液1.0mL
置于试管中 , 分别加入 0.2mg·mL-1的芦丁标准溶液
0.5mL, 余下部分按标准曲线项下的方法操作 , 平行
测定 5次 , 计算加样回收率 , 结果见表 9。
表 9　总黄酮加样回收率实验
试品量
/μg
加入量
/μg
测得量
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
72.8 100.0 173.00 100.20
72.8 100.0 173.10 100.30
72.8 100.0 172.90 100.10 100.13 0.12
72.8 100.0 172.88 100.08
72.8 100.0 172.78 99.98
3　讨论
3.1　皂苷含量测定方法的选择
皂苷的分析测定有多种方法 , 如沉淀法 、 溶血
指数法 、层析法等 , 沉淀法测定往往易带进杂质或
导致皂苷变质;层析法一般可以分离出总皂苷 , 但
对总含量测定不适 , 误差大 , 成本高 , 而分光光度
法操作简便 、 灵敏 , 属于经典 、 成熟的方法 [ 6] ,
我们选择了与西南山茶皂苷类成分基本母核结构接
近的齐墩果酸为对照品 , 采用分光光度法测定其总
皂苷的含量。
3.2　总黄酮含量测定方法的选择
经大量的文献调研表明 , 采用可见分光光度法
测定总黄酮的含量是比较成熟的方法 , 此方法稳定
性好 , 准确度高 , 且简便快捷 , 易于操作 , 结果可
靠。故我们选择了采用分光光度法测定西南山茶提
取物中总黄酮的含量。
[参考文献 ]
[ 1] 高声传 , 郭涛 , 夏维杰 , 等.比色法测定酸枣仁提取
物中总皂苷的含量 [ J] .实用药物与临床 , 2005, 8
(1):15-16.
[ 2] 国家药典委员会.中国药典 2005年版 (一部) [ S] .
2005:附录 57.
[ 3] 王坤 , 鲁静.中药材中鞣质含量测定方法的研究
[ J] .中国药事 , 2004, 18 (6):361-364.
[ 4] 欧敏锐 , 许小平 , 邓燚杰 , 等.福建产白花蛇舌草活
性成分提取与含量测定 [ J] .海峡药学 , 2004, 16
(2):44.
[ 5] 毕和平 , 韩日长 , 廖家旺 , 等.穿心莲总黄酮含量的
测定 [ J] .光谱实验室 , 2006, 23 (3):356-359.
[ 6] 国家药典委员会.中国药典 2005年版 (一部) [ S] .
2005:附录 63.
(编辑:迟　越)
DeterminationofChemicalConstituentsinCamelliaPitardi
HOULei, TANGLing, SHILi-ying, FENGBao-min, WANGYong-qi
(InstituteofMateriaMedicaofDalianUniversity, DalianLiaoning116622)
[ ABSTRACT] OBJECTIVE:Todeterminethechemicalconstituentsoftotalsaponin, totalpolyphenol
(tannin)andtotalflavonoidsinsectionCameliapitardi.METHOD:Theircontentsweredeterminedbyspectro-
photometry.RESULTS:Thecontentsoftotalsaponin, totalpolyphenol(tannin)andtotalflavonoidswererespec-
tivelydeterminedas:alcoholextractofCameliapitardi12.15%, 3.27%, 32.4%;ethylacetateextractsofCa-
meliapitardi25.86%, 37.0%, 8.64%;waterlayer5.78%, 12.76%, 0.34%.CONCLUSIONS:Themethod
isconvenientandreliabletodeterminatethethreesubstance, thereproducibilityandtherecoverywerefairlywel.
[ KEYWORDS] Cameliapitardi;totalsaponin;totalpolyphenol;totalflavonoids;determination
28