全 文 ：基金项目:国家自然科学基金(编号:81403095);北京市属高校青年拔尖人才培育项目(编号:CIT＆TCD201404175，CIT＆TCD201404184);首都中
医药护理专项(编号:12ZYH08)
作者简介:邹海艳(1974—)，女，副教授，博士，主要研究方向:中药质量控制，Tel:(010)83911671，E － mail:bwzhy@ sina. com
通信作者:赵晖(1973—)，女，副教授;硕士研究生导师;Tel:(010)83911633，E － mail:zhaohui8957@ sina. com
竹节参皂苷类化合物 HPLC指纹图谱研究
邹海艳 刘珊珊 李 佳 马 晗 赵 晖
(首都医科大学中医药学院，北京，100069)
摘要 目的:建立竹节参药材皂苷类成分 HPLC 指纹图谱的研究方法，为竹节参药材的质量控制提供依据。方法:采用 Hibar
C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈 － 0. 1%的磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min
－1，检测波长 203
nm，柱温 30 ℃;测定了 7 批市售竹节参药材的 HPLC指纹图谱。结果:竹节参的指纹图谱共检出 12 个共有峰，通过对照品比对
指认了其中的 7 个共有皂苷类成分，7 批药材中有 6 批相似度均达到 0. 9 以上。结论:该方法精密度、稳定性、重复性好，特征性
及专属性强，可用于竹节参药材的质量控制。
关键词 竹节参;皂苷类化合物;HPLC;指纹图谱
Studies on the HPLC Fingerprints of Saponins in Ｒhizoma Panax Japonicus
Zou Haiyan，Liu Shanshan，Li Jia，Mahan，Zhao Hui
(School of Traditional Chinese Medicine，Capital Medical University，Beijing 100069，China)
Abstract Objective:To establish HPLC fingerprint method for quality control of saponins in Ｒhizoma Panax Japonicus． Methods:The
HPLC method was conducted based on a Hibar C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)column，with acetonitrile-0． 1% orthophosphoric acid as
mobile phase by gradient elution． The detection wavelength was at 203 nm． The flow rate was 1． 0 mL·min －1 and the column temperature
was 30 ℃ ． Seven samples from different sources were analyzed by HPLC． Ｒesults:Twelve main marker peaks were selected in the stand-
ard fingerprint and 7 peaks of saponins were identified． The similarity of 6 samples was over 0． 9． Conclusion:The precision，repeatability
and stability of the method were up to standard，and this method can be used for quality evaluation of Ｒhizoma Panax Japonicus．
Key Words Ｒhizoma Panax Japonicus;Saponins;HPLC;Fingerprint
中图分类号:Ｒ282 文献标识码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1673 － 7202． 2014． 10． 033
竹节参，又名竹节人参、竹节三七、白三七，是五加
科人参属植物竹节参 Panax japonicus C. A. Mey的干燥
呈竹鞭状的根茎。竹节参收载于 1977 年以后的各版
《中华人民共和国药典》，具有滋补强壮，有散瘀止痛，
止血祛痰的功效，常用于治疗病后虚弱，劳嗽咯血，咳
嗽痰多，跌扑损伤等证［1 － 2］。竹节参中主要含有皂苷
类化合物、多糖、挥发油、氨基酸等成分，现代药理研究
表明，皂苷类化合物是竹节参中的主要有效成分，在中
枢神经系统、消化系统、心血管系统、免疫系统等方面
均有较好的活性［3 － 5］。竹节参中的皂苷类成分主要为
齐墩果烷型和达玛烷型三萜皂苷，其中以齐墩果烷型
皂苷含量为高，包括竹节参皂苷Ⅳa，Ⅴ，Ⅰb，Ⅳ等
［5］。
竹节参广泛分布于我国云南、四川、湖北、贵州等省，是
民间常用中草药，但迄今为止，《中华人民共和国药
典》尚未建立相应的质量控制标准，本文在前期化学成
分研究的基础上，针对竹节参中的皂苷类化合物，进行
了 HPLC指纹图谱的研究。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent HP 1260 高效液相色谱仪，配有自
动进样器、柱温箱及 DAD 检测器;舒美双频数控超声
波清洗器(KQ －500VDE，昆山市超声仪器有限公司)，
ＲT －04 高速粉碎机，赛多利斯万分之一分析天平。
1. 2 试剂 乙腈(Caledon，色谱纯)，娃哈哈纯净水，
其余试剂均为分析纯。人参皂苷 Ｒb1(批号:110704 ～
201122)、人参皂苷 Ｒg1(批号:110703 ～ 201027)、人参
皂苷 Ｒd(批号:111818 ～ 2010001)、人参皂苷 Ｒe(批
号:110754 ～ 200822)、竹节参皂苷 IVa(批号:111861
～ 201001)，均为含量测定用，购于中国药品生物制品
检定所;人参皂苷 Ｒ0(批号:MUST － 12010503，纯度 ＞
98%，购于北京世纪奥科生物技术有限公司);巨花雪
胆皂苷 B(自制)、Cynarasaponin C(自制)、竹节参皂苷
IV(自制)。
1. 3 药材 7 批竹节参药材分别购于广西(S1)、四川
(S2)、云南(S3)、陕西(S4，S5)、湖北(S6)、湖北恩施
·4631· WOＲLD CHINESE MEDICINE October． 2014，Vol． 9，No． 10
(S7);由首都医科大学中医药学院李佳副教授鉴定。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Hibar C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5
μm);流动相:乙腈(A)－ 0. 1%磷酸水溶液(B)，梯度
洗脱(0 ～ 30 min，19% ～ 19% A;30 ～ 35 min，19% ～
23% A;35 ～ 63 min，23% ～ 32% A;63 ～ 85 min，32%
～70% A);流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 203 nm，柱
温 30 ℃，进样量 10 μL。
2. 2 对照品溶液的制备 分别取人参皂苷 Ｒg1、Ｒe、
Ｒ0、Ｒb1、Ｒd、竹节参皂苷Ⅳa、Ⅳ、cynarasaponin C、巨花
雪胆皂苷 B适量，用甲醇溶解制成混合对照品溶液，备
用。
2. 3 供试品溶液的制备 取竹节参药材，粉碎，过 60
目筛，取样品粉末约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，加 70%甲醇 30 倍量，称重，超声提取 1 h，放至室
温，补足失重，过滤，取续滤液用 0. 45 μm滤膜滤过，即
得。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度实验 取同一竹节参供试品溶液适量，
连续进样 6 次，按上述色谱条件测定，以竹节参皂苷Ⅳ
a为参照物，测得各共有峰的相对保留时间 ＲSD≤
0. 60%，相对峰面积 ＲSD≤1. 02%，符合指纹图谱研究
技术要求。
2. 4. 2 重复性试验 取同一竹节参药材样品 6 份，按
上述方法平行制备供试品液，并进行测定，以竹节参皂
苷Ⅳa为参照物，测得各共有峰的相对保留时间 ＲSD
≤0. 17%，相对峰面积 ＲSD≤2. 72%，符合相关要求。
2. 4. 3 稳定性试验 取同一竹节参供试品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件，分别于 0 h，4 h，8 h，12 h，16 h，
20 h进行测定，以竹节参皂苷Ⅳa 为参照物，测得各共
有峰的相对保留时间 ＲSD≤0. 60%，相对峰面积 ＲSD
≤2. 18%，表明样品溶液 20 h内稳定。
2. 5 竹节参皂苷类成分指纹图谱的建立
2. 5. 1 共有峰的确定和化合物的指认 按 2. 1 项下
色谱条件，分别对 7 批竹节参药材样品进行 HPLC 分
析，记录图谱(见图 1)，采用“中药色谱指纹图谱相似
度评价系统(2004A)”软件进行数据处理，以平均数生
成竹节参皂苷类成分的指纹图谱，经分析确定指纹图
谱中有 12 个峰为共有特征峰，即 1 ～ 12 号峰(见图
2)。采用混合对照品对照(见图 3)，指认了其中的 7
个共有峰，即 2 ～ 4 号、6 号、10 ～ 12 号共有峰分别为人
参皂苷 Ｒg1、Ｒe、Ｒb1、Ｒ0、竹节参皂苷Ⅳ、人参皂苷 Ｒd
和竹节参皂苷Ⅳa，由图可知，6，9，10，12 峰为主要的共
有峰，峰面积平均值约为总峰面积的 90. 19%。
2. 5. 2 不同批次竹节参药材指纹图谱相似度评价
采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”软
件对 7 批竹节参药材的指纹图谱进行分析，结果 7 批
竹节参药材(S1 ～ S7)相似度分别为 0. 999，0. 986，
0. 966，0. 997，0. 958，0. 959，0. 702。除购于湖北恩施
的样品外，其余批次药材的相似度均大于 0. 9，相似度
良好。
图 1 7 个批次竹节参药材的 HPLC指纹图谱
1. 人参皂苷 Ｒg1;2. 人参皂苷 Ｒe;3. 巨花雪胆皂苷 B;4. 人参皂苷
Ｒb1;5. 人参皂苷 Ｒ0;6. 竹节参皂苷Ⅳ;7. 人参皂苷 Ｒd;8. 竹节参皂苷
Ⅳa;9. cynarasaponin C
图 2 竹节参药材 HPLC指纹图谱
图 3 混合对照品溶液的 HPLC图谱
3 讨论
1)实验中对色谱条件进行了优化，分别比较了甲
醇 －水、乙腈 －水、乙腈 － 0. 1%甲酸水、乙腈 － 0. 1%
磷酸水为流动相的分离效果，结果以乙腈 － 0. 1%磷酸
水为流动相时，基线漂移小，色谱峰峰形较好。试验还
比较了 203 nm，220 nm，254 nm，280 nm，320 nm，360
nm各检测波长下的色谱图，发现检测波长为 203 nm
时，色谱峰数目最多，响应值高，同时考虑到皂苷类成
分主要为末端吸收，并参考相关文献［7］，故选择 203
nm为检测波长。
2)实验中考察了供试品液的制备方法，以竹节参
皂苷Ⅳa的峰面积为指标，分别对药材的提取方法(回
流、浸渍、超声)，提取溶剂(95%、70%、35%甲醇和乙
醇)，以及提取时间(30 min，1 h，2 h)进行了考察，结果
显示，70%甲醇回流 1 h 和超声 1 h 效果接近，超声提
取 1 h和 2 h无统计学意义，因此选择 70%甲醇超声 1
h进行提取。
3)近年来，竹节参药材需求量不断增涨，竹节参药
材产地较多，市场上野生和家种药材并存，本实验曾收
集了 10 个不同批次的竹节参药材，其中有 3 批样品外
·5631·世界中医药 2014 年 10 月第 9 卷第 10 期
形与竹节参相似，但 HPLC谱图中不含有上述特征峰，
经显微鉴别发现这些批次药材粉末中无草酸钙簇晶，
不属于人参属植物，应为伪品;7 批竹节参药材检测结
果表明，湖北恩施(S7)所产竹节参药材样品出峰较
多，含有巨花雪胆皂苷 B、cynarasaponin C等皂苷，其主
要色谱峰的峰面积也与其他样品相差较大，相似度较
低(0. 702)，可能与竹节参产地的生态环境、栽培年限、
采收加工等因素有关［8 － 10］。以上结果说明市售的竹
节参药材存在一定的质量差异和掺伪情况，因此，亟需
建立相应的质量控制方法。
4)本实验建立了竹节参药材皂苷类成分的 HPLC
指纹图谱分析方法，并对其主要色谱峰进行了指认，结
果表明竹节参药材中主要皂苷类成分在色谱图中分离
度良好，方法的稳定性、重复性、精密度符合要求，特征
性及专属性强，可用于竹节参药材的质量控制。
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(2014 － 04 － 14 收稿 责任编辑:曹柏)
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