全 文 :! # $ % &
!##$% &’ (&)#*+’)!),- ./0123 ’/14 56078 9::4
文章编号;2::<=:::9>9::4?:4=:@A9=:9 技术方法
’()*!#$%& ’&()*+&,*%+,-./012)34567
89:;<1=>?@!ABC()DE6F!5 GHI
J/013KLM5NO,PQRSTU5V B< WXY2Z[
WX\]^!C;<1@!3()D C2=@D_ ‘abc2de
fghijklm1n $’E ,opaqr!stu1v
djYw5 NVxvyz2)341qr!stu{|}~
0j_ 2)34013Kq]8q,RS1@!
ABC5 62
@!C $’E $’E
dNIJ!h1 $’E 1q_ 5V2
)341tu25 9:@!C1a4U ¡
¢NmC@!£¤C1aWXbc_ ¥¦§¨~©‘2)
342den $’E 1ªl_ £v«K¬an $’E de1
®0J¯°±²³® C4D´µ¶® C3D´·¶® CFD´%G% H¶d® CAD
‘¸¹º»¼ #$&I/0 ?1½K $’E d1¾¿À_ PÁÂ5
G1a4UÃ ÄÅÆjÇÈNÉeG1 $’E de
®_ V’()bc1n $’E de25¥¦®0ʪË|Ì
ÍÎ1Ï50ÊLÐÑÒ´ÓÔÕÖ_ -× ÄØÙÚÆNd
1 *#E( ®de’()bc21n $’E5GHÛ^m5NOÇ
ÜÝÞ´ßàáâ5\ãäåQqr!sÇÜ10æ5ç6
èaé,2)34êën $’E 1deIJì¢jíî
ï_
2 材料和方法
212 材料
ÝÇÜðñòjóôV (3õöWXY÷1’()mC()
D<øbcù -’29C9DúV!CWXY B<2ûüýþZ[WXÿ
< J !áâ@!Cjÿ 2K J !]^©@!C1’
()WXbc_
Ø#$¾¿Àj6%qr!s¾¿º& LM/NOPQ ¸¹_
ÇÜ’(K1¾¿j)U*4+,0-.K :12R GL*
/Í 94 S Ë÷5S0m123út456V GL* /Í07
0m189: 29 S5Ë;< $’E =1>T_
219 方法
n $’E de®¼þ?!e :13 P (3WXY2@A<1B
bc B< WXY2WXPC!D ÄE01F;<’()b
c5~GHIqtJKLM5#NÌ 2: N! OP2ú~ 4T
3 N! dQRG *214 N/0 H ! ’Q*08 :12 N/0 H ! #MUV=+*08 9:
*#E(法提取中草药材滇紫草细胞的总 $’E
刘志,杨永华
南京大学 医药生物技术国家重点实验室,生命科学学院植物细胞与分子生物学实验室,南京 92::<@
摘要:介绍一种适合富含次生产物的中草药材滇紫草细胞总 $’E 的提取方法——*#E( 法。采用 *#E( 作为去污剂,分别
用氯仿和水饱和酚反复抽提以及 !U*0 沉淀以去除蛋白质、碳水化合物和次生代谢物等杂质,最后用纯乙醇沉淀获得 $’E。
该方法不但能获得完整性好和纯度高的总 $’E,而且操作简单、快速、成本低廉,对其它富含次生物质的植物特别是中草药
材组织总 $’E 的提取具有借鉴意义。
关键词:滇紫草;$’E 提取;*#E(
中图分类号:W3:@X W399 文献标识码:E
!#$%’() (* #(#%+ ,-. *$(/ !#$%& ’&()*+&,*%0 % 12’)343 /35’&%+ 6+%)#0
78 19.: /3#2(5
-./ 01(2 3456 3#781*&
*/00OPO /Y !UYO %ZUO[ZOV8 ’Q[\U[P ][U^OMVU_78 ’Q[\U[P 92::<@8 *SU[Q
.74#$% E[ UN‘M/^OJ *#E( NO_S/J aQV ‘MOVO[_OJ SOMO _/ bO V6U_Qb0O Y/M UV/0Q_U/[ /Y _/_Q0 $’E YM/N !#$%& ’&()*+&9
,*%8 Q *SU[OVO NOJUZQ0 ‘0Q[_ Z/[_QU[OJ Qb6[JQ[_ VOZ/[JQM7 NO_Qb/0U_OV1 ]VU[P ZSONUZQ0 *#E( QV JO_OMPO[_ U[ _SO Oc_MQZd
_U/[ b6YYOM8 _SO QbV/06_O O_SQ[/0 ‘MOZU‘U_Q_U/[ /Y $’E aQV ‘OMY/MNOJ YU[Q007 QY_OM MON/^U[P /Y ‘M/_OU[V8 ZQMb/S7JMQ_OV8 Q[J
VOZ/[JQM7 NO_Qb/0U_OV b7 V6bVOe6O[_ ZS0/M/Y/MN8 +9)=VQ_6MQ_OJ ‘SO[/0 Oc_MQZ_U/[ Q[J !U*0 ‘MOZU‘U_Q_U/[8 MOV‘OZ_U^O071 #SO
NO_S/J 7UO0JOJ _/_Q0 $’E [/_ aU_S U[_OPMQ0U_7 Q[J SUPS ‘6MU_7 b6_ aU_S VUN‘0O NQ[U‘60Q_U/[8 V‘OOJU[OVV Q[J ZSOQ‘[OVV1 &_
NQ7 bO Q‘‘0UOJ _/ /_SOM JUYYUZ60_ ‘0Q[_V Y600 /Y VOZ/[JQM7 NO_Qb/0U_OV8 ‘QM_UZ60QM *SU[OVO NOJUZQ0 ‘0Q[_V1
<38 =($5; !#$%& ’&()*+&,*%X $’E Oc_MQZ_U/[X *#E(
收稿日期:9::@=22=9A
作者简介:ST*2
@A9
!!# $ % &’()*+,-./01 23 4()51 23 6761 23 !8!#$%&
’()*&+ 9: ;,- 2/<=/ !>?./ /.- 012345@67
$82A@B%&9:)*&+ A ; B= /// C $ !>? ;< B: !>?&=>?
@ABCDE3 B/ !%;FGH.#IJKL$MNOPQR.
%/ = $ A S236T$)*&UVWX 2C $ !>? ;F B2 !>?&YZ>?[\Q&/ B !% (&8+,-./%]^
_‘&a@AB B.: !% ;
‘]+ /.: !% (& H& d B 0S23,efghi 2<= jNO
PQR[&/ B 0S2345@67$khi B j.(>?H/b
B $ B/ S23 = !# $ % EF)G8+,:.2%f 2 0S23lmn$&8H/
;WX =/ !>? [&+ A ; B= /// C $ !>? ;F B: !>?.)_‘Q[/b :/ *% o ’&64 pq3rs,9:]^&IE) +8-/
;tuvdw
x@yf I(864I z{|}~3
w
2 结果与讨论
2.B 提取的总 IE) 的完整性和纯度
d 5:>3f
JK Hfoj3
¡¢H3£ IE)& ¤ 2 +% IE) ]¥+ B3¦§¨3©ª
«¬>®:¯& °±²³ 2-L f B-L CIE) 2 ´?µ3´¶&
·¸ 2-L 3´¶¹º»¼ B-L 3½f¾& ¿À¹dÁÂÃ
3 IE) ÄŨÆ&ÇÈÉÊËÌ^8Í B%w i¤3 IE) ÎÊ
Ï3ÐÑÒÓ&ÔÕÖ×3 !29/?! $!2-/?!3ØÙÚ B.K<2./&Û
ÉÊÜÝÞß’E) fgàáÞ3âã&ä·åæçw èéê
ÂÃ B//
.%xó]¥ôõö÷
I(864Iw 64I øùúûü ¡¢
ÕDý3þ¡¢8#$%&’()*+,+ )*-$%*&*%#.&/%H:;3ÿ¨À
!3 =8#$%&’()8N)6’,%äf*T+,-.
H3)/0#8A812)84A,%ä3 G’E)O-Pé3·45
3w 6789Í 2&:3´¶?;¹&<¹=i¤3£ IE)
3Þç&Ä>?d+DK3:@ABCDw
2.2 方法快速、简单,实验成本低
i¤EF¥Hd3 4()5 ùDGíH3Zâ~& IÜ
ÝÞ3§¨J8¹ºH+ L’L& ¿ÖKLCM*NOP?
QRÜÝÞ§¨a«S& T[345fg3hiHUVW=
ÜÝÞáÞZXQRw i¤EY¥HçZæ3 EF4# Ê[+ZX
\]& ·¸^_ %>4# _‘ IE) ì?Q=‘:\]a>?¥
H&¿ÖUÊJbZXc]3âãw Cd&efBKLHgÊ
í\3jAÞ& i¤EY¥H/ÊíçZæ3 /8!n
$f 676& ?Qhig,àj2ïAËj2·ü IE) 7ï&
ÕORÃ*N¥§õkl&mn IE) 3:;å2.·¸ 676 ê
ü¿o2ïApqb7ïaQ[3hiKLHËXZw
HrsO±Rd45hi&?Qtu£ IE) äcgßvw
àjAÞËj2·§k&ì?ZX‘:3l+AÞw i¤
JKH3 ¡¢3 IE) O&x+Híc
3¡¢wàl+AÞ&ðDjd6T$_‘O IE) _‘Êí
y3zl&{^_ %>4# kj_‘[PUÊJb|Xzlwx+
}d %>4# ~¨_‘£ IE)& [[d,efg
hiO &
IE) ,&· ’E) Ê&äÁ?QÊJb|X ’E) 3â
ãw Ád&3Å IE) i¤ô?Q B Q Ä&iç
ôJë. @AB B.: !% 3
}G[Rdí3gh
i&·¸iEY¥HìÉÊRd6#ß#à}
~&·bÌz{Ûw Ûz{IgjA
Þ3AùH¢Kÿ£ IE) 3i¤ÎÊw
参考文献
OBP RFSFT> U1 JFVWXTF ,1 YZ>DFCF (1 LFV [. LD>T?>? \>W]?VD^W>W >?
#$%&’()*+,+ )*-$%*&*%#.&/_ %>MDV 8>?QXG^Q ?^MFV>‘^ C^MX#FV>? a
W^G?QFC] !^VF\#>W!ObP. 6#F?V 5>V^GD?#1 BKKK1B9_==:
O2P RF?M R,1 cDF?M ,1 4F Id. &aa^GV a \CFWW>?#>Q^ ? MCeVD F?Q
WD>T?>? aC!FV>? >? GX#VXC^Q 0/&’+1 (1/#2,31$,+ G^##WObP. b 6#F?V
NCeVD I^MX#1 BKKK1B-*20_-K
O=P (F\FVF J1 J>SXTF!> ,1 ,>CSTF E1 )$ 13. 6>M!^?V aC!FV>? >?
GF##XW GX#VXC^W a #$%&’()*+,+ )*-$%*&*%#.&/ ObP. 6D]VGD^!>WVC]1
BKHA1B=_K2H
OAP 4D!GS]?WT> 61 LFGGD> E. L>?M#^8WV^+ !^VDQ a IE) >W#FV>? \]
FG>Q MXF?>Q>?>X! VD>G]F?FV^8+D^?#8GD#CaC! ^fVCFGV>?ObP. )?F#
5>GD^!1 BK-H1B92_B:9
O:P [XVV^C^C b1 N>W^# )1 cM#^W>FW 71 )$ 13. LVF?QFCQ !#^GX#FC V^GDg
?>hX^W aC VD^ F?F#]W>W a VCF?WM^?>G +#F?VW O)P. i?_ 6VC]TXW i1
L+F?M^C\^CM N. N^?^ (CF?Wa^C V 6#F?VOJP. 5^C#>?_ L+C>?M^C87^C#FM1
1BKK:_2B:
O9P JF?>FV>W (1 [C>VWGD &[1 LF!\CT b. J#^GX#FC 4#?>?MOJP. E^e
RCT_ 4#Q L+C>?M ,FC\C %F\CFVC]1 BK-2. BKA
OHP & ¡. ¢£ IE) 3i¤. ¢£B¤ObP& 2///&
B2¥2/:
O-P RF!F!XCF R1 jM>DFCF R1 J>SXTF!> ,. 4>??F!>G FG>Q A8D]QCf]g
#FW^ aC! #$%&’()*+,+ )*-$%*&*%#.&/4 G’E) G#?>?M F?Q M^?^ ^fg
+C^WW>?ObP. 6#F?V 4^## I^+1 2//B12/_9::
图 B 滇紫草细胞的总 IE)电泳图谱
B.5:H3.2.JKH¦§[ð K Q 3.
=1A.JKH¦§[ð B- Q 3
图 2 滇紫草细胞中 N)6’,(上)和 4A,(下)基因的 I(864I结果
¨©à¥4()5 i¤H¢K ¡¢3£ IE) =H=