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HPLC法测定民族药材异叶青兰不同部位中木犀草素的含量



全 文 :药物定性定量研究
△基金项目:国家自然科学基金资助项目(81260659)
内蒙古自治区自然科学基金(编号:2014MS0860)
HPLC法测定民族药材异叶青兰不同部位中木犀草素的含量△
王晓娟1 白音夫2
(1.内蒙古锡林郭勒盟食品药品检验检测中心,内蒙古 锡林浩特 026000;
2.内蒙古中医药研究所,内蒙古 呼和浩特 010020)
摘 要:目的:测定异叶青兰不同部位中木犀草素的含量。方法:采用 HPLC法测定,流动相乙腈 -水 -磷酸(30:70:0. 1),
流速 1. 0mL·min -1,检测波长 350nm,柱温 30℃。结果:木犀草素 0. 031 ~ 1. 24μg范围内呈良好的线性关系,r = 0. 999;平
均回收率 101. 52%,RSD为 1. 71%。结论:木犀草素含量根部 0. 41%,茎枝 0. 27%,花叶 0. 24%,平均含量 0. 31%。木樨
草素具有多种作用可作为药材评价指标。
关键词:HPLC法;异叶青兰;木犀草素
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)02 - 0055 - 02
本品系民族医习用药材,为唇形科植物异叶青兰 Dra-
cocephalum heterophyllum Benth. 别名白花枝子花。是西北
具代表性的药用植物之一,它一般生活在山地草原及半荒
漠的多石干燥地区,在 1000 ~ 5000m 的海拔范围内都有生
长。异叶青兰是一种可口的牧草,还是一种蜜源植物。异
叶青兰全株能入药,具有清肺止咳、清肝泻火、散郁结功能,
可用于肺热咳嗽,肝火头晕,目赤肿痛,高血压,瘿瘤瘰疬,
颈下核肿[1]。异叶青兰为蒙、藏、维、哈萨克医治疗肝胃疾
患的药材。含有挥发油、黄酮类化合物,迷迭香酸可作为药
材质量控制成分之一[2]。本文对其不同部位已知成分木
犀草素进行了含量研究。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器:1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司),
TJ - 912 型色谱分析平台(太极计算机公司) ,IN - 180 型柱
温箱(上海英泰科技研究所),SH6150D 超生波清洗器(上
海昆山),电子天平(梅特勒)。
1. 2 试药:木犀草素对照品(111520 - 200201)由中国药品
生物制品检定所提供;乙腈为色谱纯;其他均为分析纯试剂;
水为纯化水;异叶青兰(内蒙古呼和浩特大青山德胜沟)。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:Kromasi - C18 柱(200mm × 4. 6mm,5m),
流动相乙腈 -水 -磷酸(30:70:0. 1),流速 1mL·min -1,温
度 30℃,检测波长 350nm,进样量 10L。在此条件下待测组
分可达到基线分离。样品中木犀草素与其它组分有较好的
分离,见图 1。
图 1 HPLC图谱
A.木犀草素对照品;B.供试品;1. 木犀草素
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取木犀草素对照品适量,
加甲醇制成 0. 62mg·mL -1的溶液,即得。
2. 3 供试品溶液的制备:取本品根、茎、花叶与地上部位,
粉碎,过 100 目筛,精密称定 50mg,置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇 10mL,称质量,超声处理 50min ,放冷,称重,用甲
醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
2. 4 线性关系考察:精密吸取对照品溶液 0. 05、0. 1、0.
25、0. 5、1. 0、2(mL),加到 10mL 量瓶中,加甲醇稀释到刻
度,摇匀,注入高效液相色谱仪 10μL 测定。以峰面积为纵
坐标(Y),进样量为横坐标(X)做线性回归,回归方程为 Y
= 14065852X - 73461,r = 0. 999。结果表明,木犀草素在
0. 031 ~ 1. 24μg范围内呈良好的线性关系。
2. 5 稳定性实验:取同一份供试品溶液,分别在 0,1,2,4h
进样测定,以木犀草素峰面积值计算 RSD为 0. 62%。结果
表明,供试品溶液在 4h内稳定。
2. 6 精密度实验:吸取同一批供试品溶液,在上述色谱条
件下重复进样 6 次,测得木犀草素峰面积 RSD为 0. 53%。
2. 7 重复性实验:取同批药材地上部位按 2. 3 项下平行
制备 6 份样品溶液,并按 2. 1 项下测定,木犀草素的平均含
量为 0. 25%,RSD = 0. 81%。
2. 8 加样回收率实验:取同批药材地上部位已知含量的
样品 6 份,每份取约 30mg,精密称定,分别精密加入木犀草
素对照品溶液 1. 0 mL(0. 062 mg),按 2. 3 项下制备样品溶
液,同法操作,测定含量,计算回收率。木犀草素平均回收
率为 101. 52%,RSD为 1. 71%(n = 6)。
2. 9 样品测定:取异叶青兰药材不同部位,按 2. 3 项下方
法制备供试品溶液,按拟定的色谱条件测定木犀草素含量,
结果根部 0. 41%,茎枝 0. 27%,花叶 0. 24%,平均含量 0.
31%。
3 讨 论
木犀草素是一种天然四羟基黄酮类化合物,广泛存在
552015 年 2 月第 2 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.02.033
在菊花、胡萝卜、卷心菜等植物中。目前已有报道,木犀草
素可以抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,增加抗癌药
物的活性,抗氧化,神经保护,可能还具有抗老年痴呆症的
作用[3]。所以,以木犀草素含量的高低可作为异叶青兰质
量的评价标准。
本研究显示异叶青兰含有丰富的木犀草素,尤以根部
含量最高。
参考文献
[1]朱亚民.内蒙古植物药志[M].二部.呼和浩特:内蒙古
人民出版社,1989:440 - 442.
[2]关薪莉,等,HPLC 法测定异叶兰青中迷迭香酸含量
[J]. 新疆医科大学学报,2013 36(9):1284.
[3]王继双,何焱,张文静,等.木犀草素药理作用研究进展
[J].生命科学,2013,25(6):560.
2015 年 1 月 7 日收稿
△基金项目:内蒙古自治区自然科学基金(编号:2014MS0860)
* 通讯作者:白音夫
HPLC法测定蒙药材并头黄芩根、茎、叶、花中野黄芩苷的含量△
王旭瑞1 周雪梅2 白音夫3* 张拴珍3 任晓伟3
(1.内蒙古自治区人民医院,内蒙古 呼和浩特 010017;
2 内蒙古自治区食品药品检验所,内蒙古 呼和浩特 010070;
3.内蒙古自治区中医药研究所,内蒙古 呼和浩特 010020;)
摘 要:目的:建立民族药材并头黄芩中野黄芩苷的 HPLC测定方法。方法:采用 HPLC法测定;流动相为甲醇 -水 -磷酸
(44:56:0. 2),流速 1. 0mL·min -1,检测波长为 280nm,柱温为 30℃。结果:野黄芩苷 0. 011 ~ 0. 44mg·mL -1范围内呈良好
的线性关系,r = 0. 999;平均回收率 100. 37%,RSD = 1. 68%(n = 6)。结论:并头黄芩中野黄芩苷含量根 3. 17% >茎 2. 30%
>叶 1. 78% >花卉 0. 38%,含量范围 1. 78% ~ 3. 17%,根部野黄芩苷含量最高。
关键词:HPLC法;并头黄芩;野黄芩苷
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)02 - 0056 - 02
本品系蒙医习用药材。为唇形科植物并头黄芩 Scutel-
laria scordifolia Fisch. ex Schrank的干燥全草。性味苦,凉,具
有清热消肿功能,可用于肝热,肝肿大,牙龈脓肿[1]。本文采
用高效液相色谱(HPLC)法对并头黄芩成分野黄芩苷含量进
行测定,以期建立并头黄芩中野黄芩苷的含量测定标准。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器 1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司),TJ
- 912 型色谱分析平台(太极计算机公司),IN - 180 型柱
温箱(上海英泰科技研究所),SH6150D 超生波清洗器(上
海昆山),电子天平(梅特勒)
1. 2 试药 野黄芩苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供;甲醇为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化水;并头
黄芩与 2013 年 8 月初采集于呼和浩特市大青山坝口子村。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:Kromasi - C18 柱(200mm × 4. 6mm,
5μm);流动相:甲醇 -水 -磷酸(44:56:0. 2),流速 1. 0mL
·min -1;温度:30℃;检测波长:280nm nm;进样量 10μL。
在此条件下待测组分可达到基线分离。样品中野黄芩苷与
其它组分有较好的分离,见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备:精密称取野黄芩苷对照品适量,
加甲醇制成 1. 10mg·mL -1的溶液,即得。
2. 3 供试品溶液的制备:取本品,粉碎,过 100 目筛,精密
称定 20mg,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 10mL,称质量,
超声处理 50min ,放冷,称重,用甲醇补足减失的质量,摇
匀,滤过,取续滤液备用,即得。
2. 4 线性关系考察:精密吸取对照品溶液 0. 1、0. 2、0. 4、
1、2、4(mL),分别加到 10mL 量瓶中,加甲醇稀释到刻度,
摇匀,注入高效液相色谱仪,测定峰面积;以峰面积为纵坐
标(Y),进样量为横坐标(X)做线性回归,回归方程为 Y
= 28650384X + 489727,r = 0. 999。结果表明,野黄芩苷在
0. 011 ~ 0. 44mg·mL -1范围内呈良好的线性关系。
图 1 HPLC图谱
A.野黄芩苷对照品;B.供试品;1. 野黄芩苷
65 中国民族医药杂志 2015 年 2 月第 2 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.02.034