全 文 ：中药新药与临床药理 2015年 11月第 26卷第 6期
乌在炮制过程发挥减毒作用的主要是双酯型乌头碱水
解减毒。
乌头汤的单酯型和双酯型乌头碱的含量均明显低
于生川乌单煎液，其单酯型乌头碱的含量更是远远低
于制川乌，且其双酯型生物碱含量也由生川乌的高含
量下降到极低的水平，从而推测乌头汤中的配伍过程
中发挥减毒作用的主要是转化成其他物质或者是单酯
型生物碱的丢失导致单酯型生物碱的含量下降而减
毒，双酯型乌头碱水解减毒在这个过程中发挥作用不
明显。综上所述提出如下规律：炮制过程中主要是双
酯型乌头碱水解成单酯型乌头碱，配伍则是单酯型乌
头碱成分的丢失。
本试验为复方乌头汤用药安全提供有效依据，对
了解掌握乌头汤配伍前后化学成分含量的变化、阐述
复方的配伍机制具有积极意义。
参考文献：
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（编辑：邓响潮）
RP- HPLC法同时测定新疆假龙胆中 5种活性成分含量
杨建华 1，2，萨力塔娜提·热马赞 3，朱丹丹 2，姜湘英 4，胡君萍 2（1. 新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木
齐 830011；2. 新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011；3. 新疆食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐
8300043；4. 新疆巴音郭楞蒙古自治州食品药品检验所，新疆 库尔勒 841000）
摘要：目的 建立双波长反相高效液相色谱（RP- HPLC）法同时测定不同海拔新疆假龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆
苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和齐墩果酸含量的测定方法。方法 采用 Shimpack VP- ODS C18（250 mm× 4.6 mm，5
μ m）色谱柱，以甲醇（A）- 0.02 %磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0～ 20 min，25 %A→ 40 % A；20～ 22
min，40 %A→ 95 % A；22～ 32 min，95 % A；32～ 34 min，95 %→ 25 % A；34～ 50 min，25 % A），流速为 1.0
mL·min-1，柱温为 25 ℃ ，254 nm检测獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷，210 nm波长检测齐墩果
酸。结果 獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和齐墩果酸进样量分别在 0.28～ 5.5 μ g（r=0.9994），
0.10～ 2.0 μ g（r= 0.9998），0.028～ 0.55 μ g（r=0.9997），0.053～ 1.0 μ g（r=0.9999），0.065～ 1.3 μ g（r=0.9993）范围内
呈良好的线性关系；平均回收率（n =6）分别为 100.4 %、96.2 %、95.6 %、97.0 %、98.2 %；RSD分别为 1.89 %，
1.46%，1.91%，1.57%，1.78%。结论 该方法专属性强、准确度高、重现性好，适用于新疆假龙胆的质量控制。
关键词：新疆假龙胆；獐牙菜苦苷；龙胆苦苷；獐牙菜苷；芒果苷；齐墩果酸；反相高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1003- 9783（2015）06- 0837- 04
收稿日期：2015- 03- 29
作者简介：杨建华，男，主任药师，教授，研究方向:天然药物研究与开发。Email: yjh- yft@163.com。通信作者:胡君萍，教授，研究方向: 中药资
源开发与利用。Email: hjp- yft@163.com。
基金项目：新疆优秀青年科技创新人才培养工程项目（2014721050）。
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 November，Vol． 26 No． 6
新疆假龙胆 G e n t i a n e l l a t u r k e s t a n o r u m（Gand.）
Holub为龙胆科假龙胆属 1年或 2年生草本植物，主
要分布于新疆、内蒙古等地区，生长于海拔 1500～
3400 m的草甸、草地、环湖湿地河床及林缘，药用
全草。新疆假龙胆是维吾尔医习用药材，具有清热解
毒、利湿消肿等作用功效，维医中常用于关节炎的治
疗，民间用其全草泡茶治疗感冒、发热等症[1-3]。文献
[4-5]报道假龙胆属植物的化学成分主要包括 酮类，如
芒果苷、当药醇苷、雏菊叶龙胆酮；环烯醚萜及其苷
类，如龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷；三萜及其
苷类，如齐墩果酸。现代药理研究表明[6]，环烯醚萜
具有广泛的生物活性，如抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、
保肝利胆等；芒果苷具有抗炎、利胆等作用；齐墩果
酸具有护肝、抗炎、增强机体免疫功能等作用。目前
对假龙胆属植物的研究报道很少，对新疆假龙胆则更
鲜有报道。因此研究獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜
苷、芒果苷、齐墩果酸 5种活性成分的含量测定方
法，有助于更加全面的评价新疆假龙胆的质量。课题
组收集新疆巴音布鲁克草原与巩乃斯林场 10批不同
海拔地区的新疆假龙胆药材，在总结前期研究成果的
基础上 [7]，建立了双波长反相高效液相色谱
（RP-HPLC）法同时测定新疆假龙胆中獐芽菜苦苷、
龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸 5 种活性
成分的含量，旨在为该药材的质量评价和资源合理利
用提供参考依据。
1 材料
1 . 1 药品及试剂 对照品獐牙菜苦苷（批号：
20120129）、龙胆苦苷（批号： 20120114）、獐牙菜
苷（批号 ：PN1125SA13）均购自上海源叶生物科技
有限公司；芒果苷（批号：111607-200402）、齐墩
果酸（批号：110709-200505)，均购自中国药品生物
制品检定研究院；甲醇，色谱纯，美国 Fisher 公司；
磷酸，分析纯，天津市富宇精细化工材料有限公司；
实验用水为 ULUPURE 超纯水系统制备；10批新疆
假龙胆药材经新疆巴音郭楞蒙古自治州食品药品检验
所姜湘英主任药师鉴定为新疆假龙胆全草，见表1。
1 . 2 仪器 Shimadzu LC-20AT 高效液相色谱仪，
SPD-20A UV/VIS 检测器，Lab Solutions 色谱工作
站，日本岛津公司；Sartorius BP211D 电子天平，
Mettler 公司；SK 7210 LHC型超声波清洗器（200 W，
50 kHz），上海科导超声波仪器厂。
d o i：10.3969/j.issn.1003-9783.2015.06.027
Simultaneous Determination of Five Active Components in Gentianella turkestanorum by RP-HPLC
YANG Jianhua1，2， SALITANATI·Remazan3， ZHU Dandan2， JIANG Xiangying4， HU Junping2（1. The First
Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011 Xinjiang， China； 2. College of Pharmacy，
Xinjiang Medical University，Urumqi 830054 Xinjiang，China；3.Xinjiang Institute for Food and Drug Control，
Urumqi 830004 Xinjiang，China；4. Xinjiang Bayinguoleng Institute for Food and Drug Control，Kurel 841000
Xinjiang，China）
Abstract： Objective To establish a dual wavelength method of RP-HPLC for simultaneously determining
swertiamarin， gentiopicroside， sweroside，mangiferin and oleanolic acid in Gentianella turkestanorum. Methods
The Shimpack C18 column（250 mm× 4.6 mm，5 μ m）was used as the chromatographic column，with a mobile
phase of methanol-0.02 % phosphate acid by gradient elution（0-20 min，25 %-40 % A；20-22 min，40 % -95 %
A；22-32 min，95 % A；32-34 min，95 %-25 % A；34-50 min，25 % A）. The flow rate was 1.0 mL·min-1，the
column temperature was 25℃ ，and the detection wavelength was set at 210 nm for oleanolic acid and at 254 nm
for the other four components.Results The linear ranges of swertiamarin，gentiopicroside，sweroside，mangiferin，
and oleanolic acid were 0.28-5.5 μ g（r=0.9994），0.10-2.0 μ g（r=0.9998），0.028-0.55 μ g（r=0.9997），0.053-1.0
μ g（r=0.9999）and 0.065-1.3 μ g（r=0.9996），respectively. The average recoveries（n=9）the of five components
were 100.4 % with RSD of 1.89 %，96.2 % with RSD of 1.46 %，95.6 % with RSD of 1.91 %，97.0 % with RSD
of 1.57 % and 98.2 % with RSD of 1.78 %， respectively. Conclusion The method is specific， accurate， and
reproducible，which is suitable for the quality control of Gentianella turkestanorum.
Keywords：Gentianella turkestanorum；Swertiamarin；Gentiopicroside；Sweroside；Mangiferin；Oleanolic acid；
RP-HPLC
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中药新药与临床药理 2015年 11月第 26卷第 6期
序号
1
2
3
4
5
来源
八音布鲁克天鹅湖
八音布鲁克二乡山口大桥
八音布鲁克达板
八音布鲁克二乡
八音布鲁克巴西力克草原
海拔
2481
2756
2531
2603
2678
序号
6
7
8
9
10
来源
巩乃斯达板下坡
巩乃斯陈地
巩乃斯达板反修桥
巩乃斯阿尔先沟
巩乃斯达板顶
海拔
2800
2190
2716
1900
3035
2 方法与结果
2 . 1 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：Shimpack
VP-ODS C18（250 mm× 4.6mm，5 μ m）；柱温：25 ℃ ；
流动相：甲醇（A）-0.02 % 磷酸水溶液（B），梯度洗脱
（0～ 20 min，25 %A→ 40 % A；20～ 22 min，40 %
A → 95% A； 22 ～ 32 min， 95% A； 32 ～ 34 min，
95%→ 25% A；34～ 50 min，25% A）；流速：1.0
mL·min-1；检测波长：254 nm、210 nm；进样量：
10 μ L。在选定的色谱条件下，待测成分与相邻色谱
峰分离度均大于 1.5，理论板数均大于 15000，对照
品和样品色谱图见图 1。
1.獐牙菜苦苷（swertiamarin）；2.龙胆苦苷（gentiopicroside）；3.獐牙菜
苷（sweroside）；4.芒果苷（mangiferin）；5.齐墩果酸（oleanolic acid）。
图 1 混合对照品（A 、B）及新疆假龙胆样品（C 、D）H P L C 色
谱图
Figure 1 HPLC chromatogams of mixed reference substances（A，
B） and the samples of G e n t i a n e l l a t u r k e s t a n o r u m（C，D）
2 . 2 对照品溶液制备 取獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐
牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸 5种对照品适量，精密称
定，加甲醇制成含獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜
苷、芒果苷、齐墩果酸浓度分别为 0.275 mg·mL-1、
0.0985 mg·mL-1、0.0276 mg·mL-1、0.0528 mg·mL-1、
0.0648 mg·mL-1的混合对照品溶液。
2 . 3 供试品溶液制备 取新疆假龙胆粉末（过 3号筛）
约 0.5 g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入甲
醇 25 mL，称质量，超声 30 min（功率 200 W，频率
50 kHz），放冷，补足质量，取上清液过 0.45 μ m滤
膜即得。
2 . 4 线性关系考察 取 2.2 项下制备的獐牙菜苦苷、
龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和齐墩果酸混合对照品
溶液 1，2，5，10，20 μ L，按 2.1项下色谱条件进
样，测定色谱峰面积，以进样量 X（μ g）为横坐标，色
谱峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得獐牙菜苦
苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷和齐墩果酸的回归
方程，见表 2。
表 2 新疆假龙胆 5 种成分线性关系测定结果
Table 2 Results of calibration curves of the 5 components
2 . 5 精密度试验 精密吸取 2.3 项下供试品溶液 10
μ L，按 2.1项下色谱条件连续进样 5 次，测得獐牙
菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸峰
面积的 RSD（n =5）分别为 1.53 %、1.23 %、1.08 %、
1.16 %、1.44 %。表明该方法精密度良好。
2 . 6 重复性试验 取同一批样品 5份，精密称定，按
2.3项下方法制备供试品溶液，进样 10 μ L，测得獐
牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸
峰面积的 RSD（n = 5）为 1.48 %、1.59 %、1.31 %、1.12
%、1.47 %。结果表明本法重复性好。
2 . 7 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μ L，
分别于 0，2，4，8，12 h 进样，测得獐牙菜苦苷、
龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸峰面积的
RSD 分别为 1.56 %、1.73 %、1.82 %、1.31 %、1.96
%。结果表明供试品溶液中上述 5个成分在 12 h内
稳定性良好。
2 . 8 回收率试验 精密称取已知含量的假龙胆样品粉
成分
獐牙菜苦苷
龙胆苦苷
獐牙菜苷
芒果苷
齐墩果酸
回归方程
Y =5.069× 104X - 2.378× 103
Y =7.217× 104X - 1.998× 103
Y =2.163× 105X - 2.284× 103
Y =1.346× 106X +1.371× 104
Y =1.482× 105X - 2.762× 103
r
0.9994
0.9998
0.9997
0.9999
0.9993
线性范围 /μ g
0.28～ 5.5
0.10～ 2.0
0.028～ 0.55
0.053～ 1.0
0.065～ 1.3
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0
4
1
2
3
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0
5
4
1
2 3
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0
0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0
5
254 nm
210 nm
254 nm
210 nm
A
B
C
D
t /min
表 1 新疆假龙胆药材采集情况
Table 1 Resource of G e n t i a n e l l a t u r k e s t a n o r u m sample
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology，2015 November，Vol． 26 No． 6
末 6份，每份 0.25 g，精密称定，分别精密加入混合
对照品溶液各 2 mL（獐牙菜苦苷 0.550 mg·mL-1、龙
胆苦苷 0.197 mg·mL-1、獐牙菜苷 0.0702 mg·mL-1、
芒果苷 0.0211 mg·mL-1、齐墩果酸 0.0195 mg·mL-1），
按 2.3 项下的方法制备供试品溶液，进样 10 μ L测
定，计算回收率，结果獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙
菜苷、芒果苷、齐墩果酸的平均回收率（n =6）分别为
100.41 %、96.20 %、95.60 %、97.02 %、98.16 %，
RSD分别为 1.89 %、1.46、1.91 %、1.57 %、1.78 %，
表明本方法准确度良好。
2 . 9 样品测定 取 10批样品粉末，精密称定，按 2.3
项下方法制备供试品溶液，按 2.1项下述色谱条件进
样 10 μ L，用外标法计算獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐
牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸的含量，见表 3。
表 3 1 0 批不同海拔新疆假龙胆中 5 种化学成分含量（%，n =3）
Table 3 Results of content determination of the 10 batches of
the samples
3 讨论
本实验考察了甲醇 -水、甲醇 -磷酸溶液和乙腈 -
磷酸溶液系统的分离效果，并优化了流动相中磷酸的
浓度，最终选择甲醇 -0.02 %磷酸（pH值为 3.2）为流
动相系统进行梯度洗脱，此系统下 5种指标成分的分
离效果及峰形较好，分离时间适中。
用紫外分光光度计分别测定獐牙菜苦苷、龙胆苦
苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸的最大吸收波长为
240.50 nm、 239.00 nm、 242.50 nm、 264.00 nm、
202.50 nm。为保证被测成分均能得到较好的响应，
防止各成分间相互干扰，综合考虑最终设定在 254
nm处检测獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果
苷，在 210 nm处检测齐墩果酸。
参照龙胆科獐牙菜属植物含量测定相关文献[7-9]，
其样品前处理方法为甲醇超声提取法，经考察，采用
甲醇超声提取 30 min药材中各指标成分基本提取完
全，故本试验拟采用该方法。
巴音布鲁克草原与巩乃斯林场是新疆假龙胆分布
较为集中的地区，本研究对这 2个地区不同海拔高度
的 10批药材进行 5种化学成分的含量测定，结果显
示，不同批次间 5种成分的含量存在一定差异，各批
次药材中含量最高的是獐牙菜苦苷，其次分别为龙胆
苦苷、獐牙菜苷、芒果苷、齐墩果酸，前 3者均为环
烯醚萜苷类，含量累积接近或超过 2 %，而芒果苷、
齐墩果酸在药材中含量较低，均在 0.1 %以下。且这
5种成分的含量随海拔的升高呈增长趋势，提示在海
拔较高的地区采收新疆假龙胆可能较为适宜。本研究
提示环烯醚萜苷类为新疆假龙胆的主要化学成分，且
各成分的含量随海拔的升高而显升高态势，为今后该
药材资源利用与开发提供了重要的科学参考。
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（编辑：邓响潮）
批号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
獐牙菜苦苷
1.23
2.10
1.29
1.51
1.74
1.61
1.74
2.00
1.48
1.82
龙胆苦苷
0.396
0.468
0.414
0.440
0.418
0.450
0.336
0.502
0.513
0.564
獐牙菜苷
0.128
0.105
0.127
0.078
0.098
0.089
0.113
0.094
0.149
0.092
芒果苷
0.0572
0.0828
0.0749
0.0342
0.0464
0.0778
0.0588
0.0474
0.0584
0.0710
齐墩果酸
0.0393
0.0483
0.0334
0.0395
0.0390
0.0339
0.0318
0.0425
0.0332
0.0329
840· ·